Anticuerpos e inmunoconjugados y usos de los mismos.

Un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo que se une a CD22 unidocovalentemente a un agente citotóxico,

en el que el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesadaque tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 16, y un dominio variable de cadena ligera que tiene lasecuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 18.

Anticuerpos e inmunoconjugados y usos de los mismos

Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos anti CD22 e inmunoconjugados de los mismos. La invención se refiere además a métodos para usar anticuerpos anti CD22 e inmunoconjugados de los mismos.

Antecedentes Los linfocitos son uno de muchos tipos de glóbulos blancos producidos en la médula ósea durante el proceso de hematopoyesis. Hay dos poblaciones principales de linfocitos: linfocitos B (células B) y linfocitos T (células T) . Los linfocitos de interés particular en la presente memoria son linfocitos B.

Los linfocitos B maduran dentro de la médula ósea y dejan la médula expresando un anticuerpo de unión a antígeno en su superficie celular. Cuando un linfocito B virgen se encuentra por primera vez con el antígeno para el que es específico su anticuerpo unido a membrana, la célula comienza a dividirse rápidamente y su descendencia se diferencia en linfocitos B de memoria y células efectoras denominadas “células plasmáticas”. Los linfocitos B de memoria tienen una vida más larga y continúan expresando anticuerpo unido a membrana con la misma especificidad que la célula parental original. Las células plasmáticas no producen anticuerpo unido a membrana sino que producen en su lugar el anticuerpo en una forma que puede secretarse. Los anticuerpos secretados son la principal molécula efectora de inmunidad humoral.

Los trastornos relacionados con linfocitos B incluyen, pero sin limitación, linfoma maligno (linfoma No de Hodgkin, NHL) , mieloma múltiple y leucemia linfocítica crónica (CLL, leucemia de linfocitos B (linfocitos B CD5+) . Los linfomas No de Hodgkin (NHL) , un grupo heterogéneo de cánceres que surgen principalmente de linfocitos B, representan aproximadamente un 4 % de todos los cánceres de nuevo diagnóstico (Jemal, A. et al., CA-Cancer J Clin, 52: 23-47, (2002) ) . El NHL agresivo comprende aproximadamente 30-40 % de los NHL de adultos (Harris, N. L. et al., Hematol.

J. 1: 53-66 (2001) ) e incluye linfoma de linfocitos B grande difuso (DLBCL) , linfoma de células del manto (MCL) , linfoma de linfocitos T periféricos, y linfoma de células grandes anaplásico. La quimioterapia de combinación de primera línea cura a menos de la mitad de los pacientes con NHL agresivo, y la mayoría de los pacientes con el tiempo sucumben a su enfermedad (Fisher, R. L Semin. Oncol. 27 (supl 12) : 2-8 (2000) ) .

Los trastornos relacionados con linfocitos B también incluyen enfermedades autoinmunitarias. Las enfermedades autoinmunitarias siguen siendo enfermedades clínicamente importantes en seres humanos. Como el nombre implica, las enfermedades autoinmunitarias actúan mediante el sistema inmunitario del propio cuerpo. Aunque los mecanismos patológicos difieren entre tipos individuales de enfermedades autoinmunitarias, un mecanismo general implica la unión de ciertos anticuerpos (denominados en la presente memoria anticuerpos autorreactivos o autoanticuerpos) a las proteínas endógenas del cuerpo. Los médicos y científicos han identificado más de 70 enfermedades autoinmunitarias clínicamente distintas, incluyendo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, vasculitis, diabetes mediada por inmunidad, y lupus tal como lupus eritematoso sistémico. Aunque muchas enfermedades autoinmunitarias son poco comunes, afectando a menos de 200.000 individuos, colectivamente, estas enfermedades aquejan a millones de americanos, una estimación de cinco por ciento de la población, estando las mujeres 45 afectadas desproporcionadamente por la mayoría de las enfermedades. La naturaliza crónica de estas enfermedades conduce a una carga social y financiera enorme.

Los agentes citotóxicos que se dirigen a antígenos de superficie de linfocitos B son un centro importante de terapias de cáncer relacionadas con linfocitos B. Uno de dichos antígenos de superficie de linfocitos B es CD20. Rituximab

(Rituxan; Genentech, Inc. (South San Francisco, CA) e IDEC Pharmaceutical Corp. (San Diego, CA) ) , un anticuerpo monoclonal quimérico (ratón/humano) anti-CD20 fue el primer anticuerpo terapéutico aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos de los Estados Unidos para el tratamiento de NHL recidivante o refractario de grado bajo o folicular (Leonard, J. P. et al., Clin. Canc. Res. 10: 5327-5334 (2004) ) .

Otros antígenos de linfocitos B, tales como CD19, CD22 y CD52, representan dianas de potencial terapéutico para el tratamiento de linfoma (Grillo-Lopez A. J. et al., Curr Pharm Biotechnol, 2: 301-11, (2001) ) . CD22 es una sialoglicoproteína restringida a linfocitos B de 135-kDa expresada en la superficie de linfocitos B solamente en los estadios maduros de diferenciación (Dorken, B. et al., J. Immunol. 136: 4470-4479 (1986) ) . La forma predominante de CD22 en seres humanos es CD22beta que contiene siete dominios de superfamilia de inmunoglobulina en el

dominio extracelular (Figura 1) (Wilson, G. L. et al., J. Exp. Med. 173: 137-146 (1991) ) . Una forma variante, CD22 alfa, carece de los dominios de superfamilia de inmunoglobulina 3 y 4 (Stamenkovic, I. y Seed, B., Nature 345: 74-77 (1990) ) . Se ha mostrado que la unión de ligando con CD22 humano está asociada con los dominios de superfamilia de inmunoglobulina 1 y 2 (también denominados epítopos unidos) (Engel, P. et al., J. Exp. Med. 181: 1581-1586, 1995) .

En NHL de linfocitos B, la expresión de CD22 varía del 91 % al 99 % en las poblaciones agresivas e indolentes, respectivamente (Cesano, A. et al., Blood 100: 350a (2002) ) . CD22 puede actuar como un componente del complejo de activación de linfocitos B (Sato, S. et al., Semin. Immunol. 10: 287-296 (1998) ) y como una molécula de adhesión (Engel, Pl et al., J. Immunol. 150: 4719-4732 (1993) ) . Los linfocitos B de ratones deficientes en CD22 tienen una vida más corta y apoptosis potenciada, lo que sugiere un papel clave de este antígeno en la supervivencia de linfocitos B (Otipoby, K. L. et al., Nature (Lond) 384: 634-637 (1996) ) . Después de la unión con su ligando o sus ligandos naturales o anticuerpos, CD22 se internaliza rápidamente, proporcionando una potente señal coestimuladora en linfocitos B primarios y señales proapoptóticas en linfocitos B neoplásicos (Sato, S. et al., Immunity 5: 551-562 (1996) ) .

Se han estudiado anticuerpos anti CD22 como terapias potenciales para cánceres de linfocitos B y otras enfermedades proliferativas de linfocitos B. Dichos anticuerpos anti CD22 incluyen RFB4 Mansfield, E. et al., Blood

90: 2020-2026 (1997) ) , CMC-544 (DiJoseph, J. F., Blood 103:1807-1814 (2004) ) y LL2 (Pawlak-Byczkowska, E. J. et al., Cancer Res. 49: 4568-4577 (1989) ) . El anticuerpo LL2 (anteriormente denominado HPB-2) es un anticuerpo monoclonal de ratón IgG2a dirigido contra el antígeno CD22 (Pawlak-Byczkowska, E. J. et al. (1989) , mencionado anteriormente) . Las evaluaciones inmunohistológicas in vitro demostraron reactividad del anticuerpo LL2 con 50 de 51 muestras de ensayo de NHL de linfocitos B ensayadas, pero no con otros tumores malignos o tejidos no linfoides normales (Pawlak-Byczkowska (1989) , mencionado anteriormente; Stein, R. et al., Cancer Immunol. Immunother.

37: 293-298 (1993) ) .

El uso de conjugados de anticuerpo-fármaco para el suministro local de agentes citotóxicos o citostáticos, es decir fármacos para destruir o inhibir células tumorales en el tratamiento de cáncer (Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19: 605-614; Niculescu-Duvaz y Springer (1997) Adv. Drg Del. Rev. 26: 151-172; patente de Estados Unidos 4975278) permite el suministro dirigido del resto farmacológico a tumores, y su acumulación intracelular en los mismos, cuando la administración sistémica de estos agentes farmacológicos no conjugados puede dar como resultado niveles inaceptables de toxicidad para células normales así como las células tumorales que se busca eliminar (Baldwin et al., (1986) Lancet pp. (15 Mar., 1986) : 603-05; Thorpe, (1985) “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review, ” en Monoclonal Antibodies ’84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (ed.s) , pp. 475-506) . Se busca de este modo la máxima eficacia con mínima toxicidad. Se ha indicado que tanto los anticuerpos policlonales como los anticuerpos monoclonales son útiles en estas estrategias (Rowland et al., (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21: 183-87) . Los fármacos usados en estos métodos incluyen daunomicina, doxorrubicina, metotrexato y vindesina (Rowland et al., Cancer Immunol. Immunother. 21: 183-87 (1986) ) . Las toxinas usadas en conjugados de anticuerpo-toxina incluyen toxinas bacterianas tales como toxina diftérica, toxinas vegetales tales como ricina, toxinas de... [Seguir leyendo]

1. Un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo que se une a CD22 unido covalentemente a un agente citotóxico, en el que el anticuerpo comprende un dominio variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 16, y un dominio variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 18.

2. El inmunoconjugado de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo comprende:

(i) una cadena pesada que tiene al menos un 90 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 88 y/o

(ii) una cadena ligera que tiene al menos un 90 % de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 87.

3. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el CD22 es CD22 de mamífero.

4. El inmunoconjugado de la reivindicación 3, en el que el CD22 es CD22 humano.

5. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el anticuerpo se une a un epítopo dentro de una región de CD22 del aminoácido 22 al 240 de SEC ID Nº: 27.

6. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado de un fragmento Fab, Fab’-SH, Fv, scFv o (Fab’) 2.

7. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el agente citotóxico se selecciona de una toxina, un agente quimioterapéutico, un resto farmacológico, un antibiótico, un isótopo radiactivo y una enzima nucleolítica.

8. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, teniendo el inmunoconjugado la fórmula Ab (L-D) p, en la que:

(a) Ab es el anticuerpo como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6;

(b) L es un adaptador;

(c) D es un resto farmacológico.

9. El inmunoconjugado de la reivindicación 8, en el que:

(i) L se selecciona de 6-maleimidocaproilo (MC) , maleimidopropanoilo (MP) , valina-citrulina (val-cit o vc) , alaninafenilalanina (ala-phe) , p-aminobeciloxicarbonilo (PAB) , N-succinimidil 4- (2-piridiltio) pentanoato (SPP) , Nsuccinimidil 4- (N-maleimidometil) ciclohexano-1 carboxilato (SMCC) y N-succinimidil (4-yodo-acetil) aminobenzoato (SIAB) ;

(ii) el adaptador está unido al anticuerpo mediante un grupo tiol en el anticuerpo;

(iii) el adaptador es escindible mediante una proteasa;

(iv) el adaptador comprende un dipéptido de valina-citrulina (val-cit o vc) ;

(v) el adaptador comprende una unidad de p-aminobenzilo, que opcionalmente es p-aminobenziloxicarbonilo (PAB) ;

(vi) el adaptador comprende un 6-maleimidocaproilo (MC) ; o

(vii) el adaptador comprende un 6-maleimidocaproilo (MC) , un dipéptido de valina-citrulina (val-cit o vc) y un paminobenziloxicarbonilo (PAB) .

10. El inmunoconjugado de la reivindicación 8, en el que D se selecciona de una auristatina y una dolastatina.

11. El inmunoconjugado de la reivindicación 10, en el que D es un resto farmacológico de forma DE o DF:

y en el que R2 y R6 son cada uno metilo, R3 y R4 son cada uno isopropilo, R7 es sec-butilo, cada R8 se selecciona independientemente de CH3, O-CH3, OH y H; R9 es H; R10 es arilo; Z es -O-o -NH-; R11 es H, alquilo C1-C8 o (CH2) 2-O- (CH2) 2-O- (CH2) 2-O-CH3; y R18 es -C (R8) 2-C (R8) 2-arilo; y

(d) p varía de aproximadamente 1 a 8.

12. El inmunoconjugado de la reivindicación 11, en el que el fármaco se selecciona de MMAE y MMAF.

13. El inmunoconjugado de la reivindicación 8, en el que el inmunoconjugado tiene la fórmula

Ab- (L-MMAE) p, en laqueL es unadaptador yp varía de2 a5,

o tiene la fórmula Ab- (L-MMAF) p, en laqueL es unadaptador yp varía de2 a5.

14. El inmunoconjugado de la reivindicación 13, en el que L comprende val-cit (vc) , MC, PAB, MC-PAB o MC-vc-PAB.

15. El inmunoconjugado de la reivindicación 8 o 14, en el que L es MC-vc-PAB; y D es MMAE o MMAF.

16. El inmunoconjugado de la reivindicación 8 en el que D es un maitansinoide.

17. El inmunoconjugado de la reivindicación 16, en el que D se selecciona de DM1, DM3 y DM4.

18. El inmunoconjugado de la reivindicación 17, en el que:

(i) L se selecciona de N-succinimidil 4- (2-piridiltio) pentanoato (SPP) , N-succinimidil 4- (N-maleimidometil) ciclohexano-1 carboxilato (SMCC) y N-succinimidil (4-yodo-acetil) aminobenzoato (SIAB) ;

(ii) el adaptador está unido al anticuerpo mediante un grupo tiol en el anticuerpo;

(iii) el adaptador comprende un SPP;

(iv) el adaptador comprende SMCC; o

(v) p es de 2-4º de 3-4.

19. Una composición farmacéutica que comprende el inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

20. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 para uso en un método para tratar un trastorno proliferativo de linfocitos B.

21. La composición farmacéutica de la reivindicación 19, para el uso de acuerdo con la reivindicación 20, en la que el trastorno proliferativo de linfocitos B se selecciona de linfoma, linfoma no de Hodgkin (NHL) , NHL agresivo, NHL agresivo recidivante, NHL indolente recidivante, NHL refractario, NHL indolente refractario, leucemia linfocítica crónica (CLL) , linfoma linfocítico pequeño, leucemia, leucemia por tricoleucitos (HCL) , leucemia linfocítica aguda

(ALL) y linfoma de células del manto.

22. Un método in vitro para inhibir la proliferación de linfocitos B que comprende exponer una célula a dicho

inmunoconjugado en condiciones permisivas para la unión del inmunoconjugado a CD22. 5

23. El inmunoconjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, para el uso de acuerdo con la reivindicación 22, en el que la proliferación de linfocitos B está asociada con un trastorno seleccionado de linfoma, linfoma no de Hodgkin (NHL) , NHL agresivo, NHL agresivo recidivante, NHL indolente recidivante, NHL refractario, NHL indolente refractario, leucemia linfocítica crónica (CLL) , linfoma linfocítico pequeño, leucemia, leucemia por

tricoleucitos (HCL) , leucemia linfocítica aguda (ALL) y linfoma de células del manto.

Anti-CD22 (10F4v1) -smcc-DM1 en modelos con xenoinjerto de BJAB-luc