Un procedimiento de producción de un regulador de la producción de interleuquina para el mantenimiento o la promoción de la producción de interleuquina-10 y el mantenimiento o la inhibición de la producción de interleuquina12,

comprendiendo el procedimiento la etapa de rotura de un microorganismo que pertenece al género Bifidobacterium en suspensión realizada mediante rotura ultrasónica, la cual se lleva a cabo con la energía de 7.800 julios a 31.500 julios por mililitro.

Procedimiento de producción del regulador de producción de interleuquina

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento de producción de un regulador de la producción de interleuquina que tiene el efecto de mantenimiento o de promoción de la producción de interleuquina-10 y el efecto de mantenimiento o de inhibición de la producción de interlequina-12, el cual puede usarse en una composición farmacéutica y alimento o bebida.

Técnica antecedente

El síntoma principal de enfermedad autoinmune tal como enfermedad reumática o enfermedad del intestino inflamatorio es la inflamación. Se estima que existen citocinas que causan la inflamación y la incidencia de la inflamación depende del equilibrio entre citocinas que envían señales y receptores de citocinas que reciben las señales. Además, se estima que la inflamación se cura espontáneamente cuando las citocinas anti-inflamatorias son más fuertes, pero cuando la acción de citocinas pro-inflamatorias es fuerte, la inflamación continúa durante un largo período de tiempo y llega a transformarse en inflamación crónica. Tal como se ha descrito anteriormente, puesto que se estima que el equilibrio de producción de citocinas (por ejemplo, interleuquinas) contribuye de manera significativa al desarrollo de la enfermedad autoinmune, puede considerarse que la regulación de la producción de estas citocinas es importante para prevenir o tratar dicha enfermedad.

La IL-10 es una citocina producida por células T, células B, mocitos, y macrófagos. La IL-10 promueve la proliferación y diferenciación de células B dentro de células que secretan anticuerpos, y muestran principalmente actividades anti-inflamatorias. Se estima que esto está basado en un mecanismo en el cual la IL-10 sobre-regula la expresión de la IL-1RA mediante monocitos e inhibe la mayoría de las actividad inflamatorias de los monocitos. En tiempos pasados, ha resultado ya evidente que la IL-10 inhibe la producción de colagenasa intestinal y de colagenasa tipo IV al interferir con una vía dependiente de PGE2-cAMP y, en consecuencia, se estima que la IL-10 puede usarse como un regulador de la destrucción del tejido conjuntivo observada en la enfermedad inflamatoria crónica. El Documento de Patente 3 divulga cepas de Lactococcus (especialmente Lactococcus lactis subsp. Cremoris C60) como microorganismos que inducen eficazmente la producción de IL-10.

La IL-12 es una citocina producida fundamentalmente por células que presentan antígenos tales como macrófagos anticipadamente en la cascada inflamatoria, y es una proteína heterodimétrica de 70 KD compuesta de proteínas de 35 kD y de 40 kD. La IL-12 es un inductor fuerte de la producción de IFN-y e igualmente es un activador de células asesinas naturales. Se estima que la IL-12 es una citocina importante para la generación de respuestas inmunes mediadas por células, o TH1, fundamentalmente a través de su capacidad para activar células para la producción de IFN-y. Es decir, la IL-12 muestra de manera general actividades pro-inflamatorias.

Es sabido que las bifidobacterias muestran diversos efectos fisiológicos basados en su funcionalidad, tales como de regulación de las funciones intestinales y de reducción de colesterol en suero, cuando se ingieren dentro del cuerpo en la forma de, por ejemplo, leche fermentada. En los últimos años, se ha introducido el concepto de “probióticos (microorganismos vivos que afectan de manera beneficiosa al mantenimiento de la salud del huésped) ” y, en consecuencia, dichos efectos fisiológicos de las bifidobacterias han recibido una amplia atención en la consideración del del consumidos consciente de su salud, por lo que están siendo llevados a cabo diversos estudios. La palabra “probióticos” se definió originalmente como “suplementos alimenticios microbianos vivos que afectan de manera beneficiosa al animal huésped mediante la mejora del equilibrio de su flora microbiana intestinal”, pero actualmente se usa en el sentido amplio anteriormente descrito.

Entre los diversos efectos fisiológicos de las bifidobacterias, han empezado a recibir atención los efectos sobre enfermedades autoinmunes tales como diabetes dependiente de la insulina y artritis reumatoide crónica, síndrome del intestino irritable, y enfermedad del intestino inflamatorio tal como colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. A este respecto, por ejemplo, se sabe ya de un agente terapéutico para la colitis ulcerativa que contiene las células de un Bifidobacterium como un ingrediente activo (véase Solicitud de Patente Japonesa Abierta a Consulta Pública No. 7126177) y cepas de Bifidobacterium eficaces para la prevención y/o el tratamiento de la actividad inflamatoria gastrointestinal, tal como enfermedad del intestino inflamatorio o síndrome del intestino irritable (véase Publicación Nacional de Solicitud de Patente Japonesa No. 2005-508617) .

Además, se ha informado previamente ya que las células de bifidobacterios estimulan células que presentan antígenos profesionales tales como macrófagos y células dendríticas para inducir la producción de IL-12 (es decir, una capacidad de inducción de producción de IL-12) (véase International Archives of Allergy and Immunology (Int Arch Allergy Immunol) , vol. 135, págs. 205-215, (2004) ) . Además, se ha informado previamente ya que las bifidobacterias inducen la producción de IL-10 (es decir, una capacidad de inducción de producción de IL-10) (véase Publicación Nacional de Solicitud de Patente Japonesa No. 2005-508617) . Se estima que la capacidad de las bifidobacterias para inducir la producción de diversas interleuquinas (ILs) varía dependiendo del tipo de cepa, y diversos estudios se han realizado hasta ahora basados en dicha forma de pensar.

Entre la técnica anterior adicional, la Solicitud de Patente Japonesa Abierta a Consulta Pública No. 2005-154387 divulga que los cocos del género Lactococcus son co-cultivados conjuntamente con las células dendríticas o las células del bazo de un mamífero para seleccionar una cepa que tenga altas propiedades de inducción de la producción de IL-10. Un procedimiento de selección para los microorganismos o los componentes comprende el cultivo de microorganismos, por ejemplo los cocos que pertenecen al género Lactococcus conjuntamente con células del epitelio intestinal para seleccionar la cepa mediante la actividad Caspase-1 y la capacidad de inducción de producción de IL-18, proporcionándose un alimento o un material alimenticio y alimento animal que contiene los cocos que pertenecen al género Lactococcus como un ingrediente activo.

Entre la técnica anterior adicional, Amrouche y otros, en International Dair y Journal, vol. 16, págs. 70-80, (2006) , divulgan que extractos bifidobacterianos, fundamentalmente las paredes de las células, estimulan la proliferación de linfocitos y sugieren que dichos extractos podrían usarse en el control de ciertas inmunopatologías.

Entre la técnica anterior adicional, la Patente Japonesa JP 2004-262773 divulga una preparación farmacéutica que comprende un ingrediente de célula bacteriana de un bacterio del género Bifidobacterium, el cual mejora la resistencia al estrés y/o la disfunción de la competencia inmunológica inducida por el estrés. La preparación farmacéutica bacteriana de bifidus es útil para mejorar la disfunción del sistema inmunológico del canal intestinal causado como un resultado del estrés.

Entre la técnica anterior adicional, la Patente Japonesa JP 2000-095698 divulga un remedio que contiene un componente de célula microbiana de las bacterias del ácido láctico como un ingrediente activo. De acuerdo con esta referencia, las bacterias del ácido láctico pueden ser las bacterias que pertenecen al género de Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus o similares. Un procedimiento de extracción del componente de la célula microbiana es preferiblemente el de someter las células microbianas al tratamiento de lisado mediante el uso de una enzima lítica, y posteriormente someter las células microbianas tratadas a tratamiento térmico. La pared de célula puede destruirse usando un procedimiento físico tal como un tratamiento ultrasónico o una prensa Francesa.

Entre la técnica anterior adicional, la Patente Japonesa JP H07-330806 divulga un polisacárido que se ha aislado a partir de la pared de la célula de Bifidobacterium, y la cual muestra propiedades físicas y químicas específicas, e induce el incremento de granulocitos en los glóbulos blancos.

Entre la técnica anterior adicional,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de producción de un regulador de la producción de interleuquina para el mantenimiento o la promoción de la producción de interleuquina-10 y el mantenimiento o la inhibición de la producción de interleuquina12, comprendiendo el procedimiento la etapa de rotura de un microorganismo que pertenece al género Bifidobacte

rium en suspensión realizada mediante rotura ultrasónica, la cual se lleva a cabo con la energía de 7.800 julios a 31.500 julios por mililitro.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la producción del regulador de la producción de interleuquina es un regulador de la producción de interleuquina para incrementar la relación de la producción de IL10/producción de IL-12.

3. El procedimiento de producción de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que el microorganismo que pertenece al género Bifidobacterium es uno o más microorganismos seleccionados entre el grupo que consiste en microorganismos que pertenecen a la especie Bifidobacterium longum, microorganismos que pertenecen a la especie Bifidobacterium angulatum, microorganismos que pertenecen a la especie Bifidobacterium pesuodocatenulatum, y microorganismos que pertenecen a la especie Bifidobacterium catenulatum.

Concentración de muestra (µg/ml) Concentración de muestra (µg/ml)

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Tiempo de oscilación ultrasónica (min) Tiempo de oscilación ultrasónica (min)

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