PROCEDIMIENTOS Y KITS PARA EL PRONÓSTICO DE CÁNCER DE MAMA.

Un procedimiento para la identificación de un resultado probable de cáncer de mama en una paciente con cáncer de mama que comprende las etapas de

(a) determinar el estado de ERBB2 de un tumor de dicha paciente,

y

(b) determinar en una muestra de tejido de cáncer de mama de dicha paciente el nivel de expresión de al menos una inmunoglobulina en dicho tumor de dicha paciente al menos si dicho estado de ERBB2 de dicho tumor es positivo, en el que dicha identificación de un resultado probable se basa en dicho nivel de expresión si el estado de ERBB2 de dicho tumor es positivo, en el que la identificación del resultado probable comprende una clasificación de la paciente en uno de al menos dos grupos, correspondiendo dichos dos grupos a un grupo de "buenos resultados" y un grupo de "malos resultados", respectivamente, y en el que un cáncer se clasifica como perteneciente al grupo de "malos resultados" si el nivel de expresión de dicha al menos una inmunoglobulina está por debajo de un nivel de umbral predeterminado.

Procedimientos y kits para el pronostico de cancer de mama Campo técnico de la invención La presente invencion se refiere al campo del pronostico de una enfermedad proliferativa en una paciente. Mas especificamente, la presente invencion se refiere a procedimientos para la identificacion del resultado probable de cancer de mama en una paciente con cancer de mama. La invencion tambien se refiere a procedimientos para la identificacion del resultado probable de cancer de mama en una paciente en base al estado de ERBB2 de la paciente y los niveles de expresion de genes inmunes en el tejido tumoral de dicha paciente.

Antecedentes de la invención El cancer de mama es una de las principales causas de muerte por cancer en mujeres en los paises occidentales. Mas especificamente, el cancer de mama se cobra la vida de aproximadamente 40.000 mujeres y se diagnostica a unas 200.000 mujeres cada ano, solo en los Estados Unidos. En las ultimas decadas, la terapia sistemica complementaria ha provocado una notoria mejora en la supervivencia en cancer de mama precoz [2, 3]. Esta experiencia clinica ha llevado a recomendaciones de consenso que ofrecen terapia sistemica complementaria a la gran mayoria de las pacientes con cancer de mama [1]. Para tratar el cancer de mama se dispone de una diversas opciones de tratamiento que pueden aplicarse ademas de la extirpacion quirurgica del tumor que se realiza comunmente y la posterior radiacion del lecho del tumor. El tratamiento endocrino, la quimioterapia y el tratamiento con terapias dirigidas son tres estrategias principales y conceptualmente diferentes. Un requisito para el tratamiento con agentes endocrinos es la expresion de receptores de hormonas en el tejido tumoral, ya sea estrogeno, progesterona o ambas. Se encuentran disponibles muchos agentes endocrinos con distintos modos de accion y diferencias en el resultado de la enfermedad cuando se evaluan en grandes cohortes de pacientes. El tamoxifen es uno de los farmacos endocrinos mas antiguos, que redujo significativamente el riesgo de la reaparicion del tumor. Aparentemente, son aun mas efectivos los inhibidores de aromatasa, que pertenecen a una nueva clase de farmacos endocrinos. En contraste con el Tamoxifen, que es un inhibidor competitivo de la union del estrogeno, los inhibidores de aromatasa bloquean la produccion de estrogeno y, de ese modo, logran reducir el estimulo del crecimiento para las celulas tumorales con receptor de estrogeno positivo. Los ensayos clinicos recientes han demostrado un mejor resultado de la enfermedad en las pacientes tratadas con estos agentes en comparacion con las tratadas con Tamoxifen. No obstante, algunas pacientes todavia experimentan una recaida a pesar del tratamiento endocrino y, en particular, estas pacientes podrian beneficiarse de farmacos terapeuticos adicionales. Se ha demostrado que la quimioterapia con antraciclinas, taxanos y otros agentes es eficiente para reducir la recidiva de la enfermedad en pacientes tanto con receptor de estrogeno positivo como con receptor de estrogeno negativo. El estudio NSABP-20 comparo el Tamoxifen solo con el Tamoxifen mas la quimioterapia en pacientes con receptor de estrogeno positivo sin afectacion ganglionar y mostro que el tratamiento combinado fue mas efectivo que el Tamoxifen solo.

Un nuevo enfoque es el tratamiento de pacientes con cancer de mama con anticuerpos monoclonales dirigidos a moleculas de la superficie celular asociadas con el tumor o a moleculas de la superficie celular en celulas endoteliales de la vasculatura tumoral.

Recientemente, se ha demostrado que el anticuerpo monoclonal administrado sistemicamente Trastuzumab (Herceptin; Genentech, South San Francisco, CA, Estados Unidos) dirigido al antigeno HER2 en la superficie de las 40 celulas tumorales reduce el riesgo de recidiva en pacientes con tumores con sobreexpresion de HER2. En la reunion de la Sociedad Americana de Oncologia Clinica de 2005 se presentaron dos informes que describian una reduccion del 50% en el riesgo de recaida durante el tratamiento con Trastuzumab en pruebas que comprendian alrededor de 8.000 pacientes con cancer de mama. El antigeno HER2 se codifica mediante el gen ERBB2 que se ubica en el cromosoma 17q12-q21. Varios estudios realizados en diversos laboratorios han demostrado que entre el 25% y el 45 30% de todos los tumores malignos de mama y ovario muestran la amplificacion y sobreexpresion de este gen [4, 5]. La amplificacion del gen ERBB2 se encuentra en mas del 90% de los casos que tienen sobreexpresion de proteina ERBB2 [6, 7], pero en una mama normal la expresion de ERBB2 se debe a una activacion transcripcional [8]. La sobreexpresion de ERBB2 en mujeres con cancer de mama con afectacion ganglionar [4, 5] y sin afectacion ganglionar [9] se asocia con un mal pronostico, y varios estudios han encontrado una correlacion entre la 50 sobreexpresion de ERBB2 y un periodo libre de enfermedad mas corto y una supervivencia general mas corta [10, 11].

Si bien en la tecnica se dispone de varios procedimientos para evaluar el estado de ERBB2 [12], los mas utilizados son la inmunohistoquimica (IHC; para sobreexpresion de proteinas) y la hibridacion fluorescente in situ (FISH; para la amplificacion de genes) . Los informes de casos de falsos positivos de Herceptest llevaron a sugerir que los 55 Herceptests que proporcionan un puntaje 2+ tambien deberian estudiarse mediante FISH [13]. Tubbs y sus colegas [14] solicitaron que la Administracion de Alimentos y Farmacos de los Estados Unidos (FDA) ordenara la retractacion de los criterios aceptados previamente para la terapia con Trastuzumab, precisamente aquella con Herceptests que proporcionan un puntaje 2+, salvo que esos casos tambien fueran confirmados mediante FISH.

El ensayo de FISH aprobado por la FDA, PathVysion (Vysis, Inc., Downers Grove, IL, Estados Unidos) , es un sistema de sonda dual para la enumeracion simultanea del gen ERBB2 y la region centromerica del cromosoma 17, definiendo la amplificacion de ERBB2 como una relacion de copias del gen ERBB2 por centromero del cromosoma 17 [15]. Otro ensayo de FISH aprobado por la FDA, INFORM (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, Estados Unidos) , define la amplificacion de ERBB2 como un numero absoluto medio de copia del gen ERBB2 de mas de cuatro puntos por nucleo, sin correccion de centromero 17. El FISH con la sonda PathVysion y el ensayo inmunohistoquimico con Herceptest son altamente concordantes para los casos que muestran puntajes de IHC 3+ y para casos negativos, si bien el grupo de IHC de puntaje 2+ incluye tumores ERBB2 amplificados y no amplificados, mostrando una tasa de discordancia relativamente alta [16, 17]. Los mecanismos para la expresion de ERBB2 en tumores no amplificados puntuados 2+ mediante IHC no son claros y pueden implicar una mayor dosificacion de genes mediante la polisomia del cromosoma 17 [18].

La administracion de Trastuzumab puede considerarse como un tipo de inmunoterapia pasiva. La inmunoterapia activa, por ejemplo la vacunacion, no ha sido desarrollada con exito debido, en parte, a la comprension limitada del impacto funcional del sistema inmune en el cancer de mama. Los estudios histologicos y de citometria de flujo han documentado que los canceres de mama humanos son infiltrados por una poblacion heterogenea de celulas inmunes, que consiste en diferentes proporciones de celulas T, celulas B, linfocitos citoliticos naturales y macrofagos. Aparentemente, el sistema inmune es capaz de responder al cancer de mama como se evidencia por la activacion sistemica, regional e intratumoral de leucocitos y la presencia de leucocitos que infiltran los tumores de mama ha sido asociada con un pronostico favorable en algunos estudios. Sin embargo, la importancia de pronostico de infiltrados linfoides en el sitio del tumor y la importancia relativa de estos infiltrados como un indicador del estado inmune del huesped sigue siendo controversial [14, 15, 16, 17]. Hasta ahora, para las pacientes individuales, no existe una relacion predecible entre la composicion de leucocitos y el pronostico de la enfermedad.

Puesto que la terapia con Trastuzumab es costosa, la provision de este farmaco a todas las pacientes con cancer de mama con sobreexpresion de ERBB2 resultaria en una enorme carga economica para el sistema sanitario. En consecuencia, una prueba de diagnostico capaz de distinguir entre los tumores de mama con sobreexpresion de ERBB2 con pronosticos buenos o malos podria ayudar a priorizar la urgencia del tratamiento con Trastuzumab.

Slamon et al. [9] mostraron que la amplificacion del gen ERBB2 esta asociada con un mayor riesgo de recaida y muerte en las pacientes con cancer de mama en etapa inicial. Sin embargo, no se divulgo que el nivel de expresion de anticuerpos puede utilizarse... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la identificacion de un resultado probable de cancer de mama en una paciente con cancer de mama que comprende las etapas de

(a) determinar el estado de ERBB2 de un tumor de dicha paciente, y

(b) determinar en una muestra de tejido de cancer de mama de dicha paciente el nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina en dicho tumor de dicha paciente al menos si dicho estado de ERBB2 de dicho tumor es positivo,

en el que dicha identificacion de un resultado probable se basa en dicho nivel de expresion si el estado de ERBB2 de dicho tumor es positivo, en el que la identificacion del resultado probable comprende una clasificacion de la paciente en uno de al menos dos grupos, correspondiendo dichos dos grupos a un grupo de "buenos resultados" y un grupo de "malos resultados", respectivamente, y en el que un cancer se clasifica como perteneciente al grupo de "malos resultados" si el nivel de expresion de dicha al menos una inmunoglobulina esta por debajo de un nivel de umbral predeterminado.

2. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el etapa de determinar el estado de ERBB2 de dicho tumor es anterior a la etapa de determinar el nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina.

3. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que en la etapa (b) se determina el nivel de expresion de mas de una inmunoglobulina.

4. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la identificacion del resultado probable es

(a) una determinacion de la probabilidad de recidiva de un tumor en dicha paciente, y/o

(b) la prediccion de la supervivencia a largo plazo de dicha paciente, y/o

(c) luego de la cirugia, y/o es

(d) el pronostico de cancer de mama.

5. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la determinacion del estado de ERBB2 comprende una comparacion de un nivel de expresion de ERBB2 con un valor de umbral predeterminado.

6. El procedimiento de la reivindicacion 5, en el que dicho valor de umbral se determina a partir de un modelo de mezcla gaussiano de un histograma determinado a partir de una cohorte adecuada de pacientes con cancer de mama, en el que el histograma comprende los niveles de expresion de ERBB2 en tumores de dicha cohorte.

7. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicha determinacion de dicho nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina comprende la determinacion de la cantidad de ARNm que codifica dicha inmunoglobulina.

8. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que dicha determinacion de dicho nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina comprende la determinacion de la cantidad de ARNm que codifica al menos partes de dicha inmunoglobulina.

9. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el estado de ERBB2 se determina mediante PCR, o mediante PCR en tiempo real, o mediante inmunohistoquimica, o mediante hibridacion fluorescente in situ (FISH) , o mediante hibridacion cromosomica in situ (CISH) o en un genochip.

10. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el nivel de expresion de dicha inmunoglobulina se determina mediante PCR, o PCR en tiempo real, o mediante inmunohistoquimica o en un genochip.

11. Un procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el estado de ERBB2 y el nivel de expresion de dicha inmunoglobulina se determinan en el mismo genochip.

12. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicha inmunoglobulina se selecciona del grupo que consiste en IGH@, IGHG1, IGHG4, IGHM, IGHD, IGHG3, IGJ, IGKC, IGLC2, IGLV@, IGLJ3, IGSF2, IGSF3, IGSF4B e IGSF4C.

13. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 12, en el que la inmunoglobulina es IGCK o IGHG1 o IGH@.

14. El uso de un kit para realizar el procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, comprendiendo dicho kit

(a) medios para la determinacion del estado de ERBB2 de una paciente con cancer de mama a partir de una muestra de tumor de dicha paciente, (b) medios para la determinacion del nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina en una muestra de tumor de dicha paciente, y (c) material impreso o un portador de datos que comprenden instrucciones para realizar un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-13.

15. El uso de un aparato para realizar el procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, 10 comprendiendo dicho aparato

(a) medios para la determinacion del estado de ERBB2 de una paciente con cancer de mama a partir de una muestra de tumor de dicha paciente,

(b) medios para la determinacion del nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina en una muestra de tejido de cancer de mama de dicha paciente, y

(c) medios informaticos adaptados para la identificacion de dicho resultado probable, en donde dicha identificacion se basa en el nivel de expresion de al menos una inmunoglobulina si dicho estado de ERBB2 es positivo, en el que la identificacion del resultado probable comprende una clasificacion de la paciente en uno de al menos dos grupos, correspondiendo dichos dos grupos a un grupo de "buenos resultados" y un grupo de "malos resultados", 20 respectivamente, y en el que un cancer se clasifica como perteneciente al grupo de "malos resultados" si el nivel de expresion de dicha al menos una inmunoglobulina esta por debajo de un nivel de umbral predeterminado.