PROCEDIMIENTO IN VITRO PARA EL PRONÓSTICO DE LA PROGRESIÓN DE UN CÁNCER Y EL RESULTADO EN UN PACIENTE Y MEDIOS PARA LLEVAR A CABO DICHO PROCEDIMIENTO.

Procedimiento in vitro para el pronóstico de la progresión de un cáncer y el resultado en un paciente y medios para llevar a cabo dicho procedimiento. SECTOR DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al sector del pronóstico del resultado de un cáncer en un paciente. Más específicamente, la presente invención se refiere al pronóstico del resultado de un cáncer en un paciente, cuyo pronóstico se basa en la cuantificación de uno o varios marcadores biológicos que son indicativos de la presencia de respuesta inmune adaptativa o de forma alternativa, del nivel de la misma, de dicho paciente contra dicho cáncer. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Dado que el cáncer es la segunda causa de mortalidad, en particular en Europa y en Estados Unidos, se están invirtiendo una gran cantidad de esfuerzos y recursos económicos en el desarrollo de estrategias terapéuticas nuevas. Sin embargo, la necesidad de herramientas de diagnóstico y pronóstico fiables es una etapa limitante del progreso de la aplicación satisfactoria de una terapia de cáncer. La mejor forma de manifestarlo es mediante el hecho de que la mayor parte de los marcadores de cáncer conocidos son muy poco fiables. En la actualidad, los tumores malignos se clasifican generalmente según el sistema TNM. El sistema de clasificación TNM de Tumor-Node-Metastasis (Tumor-Ganglio-Metástasis) utiliza el tamaño del tumor, la presencia o ausencia de tumores en nódulos linfáticos regionales, y la presencia o ausencia de metástasis distantes, para asignar un estadio al tumor (AJCC Cancer Staging Manual (Manual de estadificación del cáncer de la AJCC), Lippincott, 5ª edición, págs. 171-180, 1997). El estadio asignado se utiliza como base para objetivos de selección de una terapia y un pronóstico adecuados. Cuando se aplica para la estadificación de cánceres colorrectales, el sistema TNM permite la distinción entre (T) el grado de invasión de la pared intestinal, que oscila entre T0 y T4, (N) el grado de implicación de nódulos linfáticos, que oscila entre N0 y N3 y (M) el grado de metástasis, que oscila entre M0 y M1. Para cánceres colorrectales, también se puede asignar un estadio al tumor según la clasificación de Dukes. La clasificación de Dukes permite la distinción, como mínimo, entre cuatro estadios de tumor principales, respectivamente (A) tumor confinado en la pared del intestino, (B) extensión del tumor a través de la pared del intestino, (C) implicación de ganglios regionales y (D) existencia de metástasis distante. Sin embargo, las clasificaciones clínicas anteriores, aunque son útiles, son imperfectas y no permiten pronóstico fiable del resultado de los cánceres. Esto es particularmente cierto para los cánceres asignados como clase B de Dukes, que son de una gran variedad de gravedad. En lugar de la estadificación clínica convencional, en la técnica se han dado a conocer una gran cantidad de marcadores biológicos, entre los que se incluyen genes y proteínas, que serían potencialmente útiles para el diagnóstico o el pronóstico de una gran variedad de cánceres. De forma destacable, se han dado a conocer diversos procedimientos para proporcionar patrones de expresión génica que serían potencialmente útiles como herramientas para el diagnóstico o pronóstico, incluyendo el diagnóstico o pronóstico de cánceres colorrectales. En este contexto, diversos trabajos de la técnica anterior se dirigieron hacia la demostración de una relación entre (i) la presencia de diversos marcadores biológicos, o el nivel de expresión de los mismos, del huésped de la respuesta inmune y (ii) la existencia de un cáncer o el estadio de desarrollo de un cáncer, principalmente con el objetivo de descifrar los mecanismos que sustentan la evasión de la respuesta inmune por parte de los tejidos tumorales, y finalmente con el objetivo de sugerir estrategias de inmunoterapia contra el cáncer. De forma ilustrativa, Nistico y otros (1999, Int. J. Cancer, Vol. 84: 598-603) sugirieron la existencia de una respuesta inmune espontánea contra el producto del oncogén erbB-2 en una paciente con cáncer de mama HLA-A2 positivo, la eficacia de la cual sería dependiente de la expresión de la molécula HLA de clase I y de la localización de linfocitos CD3+-T, es decir, en tejido intratumoral (IT) o peritumoral (PT). Según dichos autores, estos resultados podrían conducir a la identificación de nuevos parámetros que podrían ser útiles para definir estrategias inmunoterapéuticas más específicas y más eficaces contra el cáncer de mama. Philips y otros (2004, British Journal of Surgery, Vol. 91: 469-475) han demostrado que linfocitos infiltrantes de tumor en cáncer colorrectal con inestabilidad de microsatélites estaban activados y eran citotóxicos, mediante el ensayo de (i) las proporciones de ARNm de CD8 / CD3 y (ii) la producción de CD3, CD4, CD8, IL-2R y la proteína Granzima B en el tejido tumoral, aunque no existía una correlación significativa entre los números de copia del ARNm de los marcadores de células T y los conteos inmunohistoquímicos. Dichos autores sugirieron que en cáncer colorrectal con inestabilidad de microsatélites, se podían producir péptidos mutados inmunogénicos, que inducirían una respuesta inmune antitumoral, y concluían que dicho modelo de cáncer podría ayudar a la comprensión de las interacciones huésped-tumor, con el objetivo de mejorar las estrategias inmunoterapéuticas de forma destacada. 2 E06809203 28-11-2011   Maki y otros (2004, J. Gastroenterolgy y Hepatology, Vol. 19: 1348-1356) habían demostrado un deterioro del sistema inmune celular en pacientes con carcinoma hepatocelular, que se evaluaba por una expresión reducida de las proteínas CD3 y CD28 por parte de las células T, así como por una actividad caspasa-3 aumentada en células T con modulación descendente por CD28, sugiriendo la existencia de apoptosis de células T en pacientes HCC. Según dichos autores, se podría establecer una nueva modalidad de terapia inmune antitumoral, que estaría dirigida a la activación de dichas células T y a evitar su apoptosis. Grujil y otros (1999, British Journal of Cancer, Vol. 79 (7 / 8): 1127-1132) también habían informado acerca de una expresión reducida de CD3 en carcinoma cervical infiltrante de células T. Dichos autores sugirieron que a efectos de que las estrategias de vacunación fueran satisfactorias, debería ser esencial identificar, en primer lugar, y contrarrestar los mecanismos que conducen a esta pérdida de CD3. El deterioro de la respuesta inmune del huésped, mediante la evaluación de la expresión de las proteínas CD3, CD4, CD8 y ligando Fas en linfocitos infiltrantes de tumor (TIL), también se demostró en pacientes con carcinoma oral (Reichert y otros (2002, Clinical Cancer Research, Vol. 8: 3137-3145)). Prado-García y otros (2005, Lung Cancer, Vol. 47: 361-371) realizaron observaciones similares, habían estudiado mecanismos de evasión de adenocarcinoma de pulmón, midieron los porcentajes de células CD3+, CD4+ y CD8+ en sangre periférica y la efusión pleural, y adicionalmente la expresión de de proteínas CD27, CD28, CD45RO, CD45RA, granzima A, Fas y perforina en los subconjuntos de células T CD8+. Dichos autores habían encontrado un bloqueo de la respuesta inmune y sugirieron que eran necesarios estudios adicionales para la comprensión de los diversos mecanismos mediante los cuales las células de adenocarcinoma inhiben las células T CD8+ en los procesos de iniciación, crecimiento e invasión del carcinoma de pulmón, con el objetivo de desarrollar tratamientos mejorados para enfermedades malignas de pulmón. Kuss y otros (2003, British Journal of Cancer, Vol. 88: 223-230) que realizaron observaciones similares, determinaron un subconjunto de células T efectoras CD8+CD45RO-CD27 dotadas de una señalización TcR disfuncional, en pacientes con carcinoma de células escamosas. Estos autores sugirieron estudios adicionales para confirmar directamente la hipótesis que uniría los defectos de señalización observados con la apoptosis y la rápida renovación de linfocitos en pacientes con cáncer. Además, Valmori y otros (2002, Cancer Research, Vol. 62: 1743-1750) han descubierto la presencia de un subconjunto de células T CD45RA+CCR7-CD8+ PBL que tiene una actividad citolítica en pacientes con melanoma. Dichos autores sugirieron que una vacunación antitumoral mejorada debería estar dirigida hacia la estimulación y mantenimiento de dicha respuesta inmune efectora en un estadio temprano de la evolución de la enfermedad, en un momento en el que una respuesta de este tipo podría ser eficaz para erradicar una enfermedad residual mínima y para evitar recaídas. Los trabajos anteriores que se han descrito en esta descripción dan a conocer la utilización de numerosos marcadores biológicos de la respuesta inmune en el curso de... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vivo para el pronóstico de pacientes para la progresión de un cáncer, que comprende las siguientes etapas: a) la cuantificación, en una muestra de tejido tumoral de dicho paciente, como mínimo, de dos marcadores biológicos indicativos del estado de la respuesta inmune adaptativa de dicho paciente contra el cáncer; y b) la comparación del valor obtenido en la etapa a) para cada uno de dichos, como mínimo, dos marcadores biológicos con un valor de referencia predeterminado para el mismo marcador biológico; cuyo valor de referencia predeterminado se correlaciona con un pronóstico específico de la progresión de dicho cáncer, en el que dichos, como mínimo, dos marcadores biológicos se cuantifican, en la etapa a), en las muestras tumorales recogidas de dos regiones en el tumor, respectivamente (i) el centro del tumor (CT) y (ii) el borde invasivo del tumor (IM); en el que dichos, como mínimo, dos marcadores biológicos indicativos del estado de la respuesta inmune adaptativa de dicho paciente contra el cáncer comprenden CD3 y CD45RO. 2. Procedimiento in vitro, según la reivindicación 1, en el que la etapa a) se lleva a cabo cuantificando, como mínimo, tres marcadores biológicos distintos, respectivamente CD3, CD45RO y, como mínimo, un marcador biológico adicional seleccionado del grupo que comprende CDB y GZMB. 3. Procedimiento in vitro, según la reivindicación 1, en el que la etapa a) se lleva a cabo cuantificando los cuatro marcadores biológicos distintos que comprenden CD3, CD45RO, CD8 y GZMB. 4. Procedimiento in vitro, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la etapa a) es a) la cuantificación de dicho, como mínimo, un marcador biológico en una sección de tejido tumoral mediante inmunodetección, de forma separada tanto (i) en el centro del tumor (CT) como (ii) en el borde invasivo (IM). 91   92   93   94     96   97   98   99     101   102   103   104