PROCEDIMIENTO DE PREPARACIÓN DE PÉPTIDOS.

La invención se refiere a un procedimiento nuevo y versátil para la preparación de compuestos que contienen uno o más enlaces amida, en particular péptidos, especialmente para procedimientos realizados en solución. Los péptidos se sintetizan en solución o sobre un soporte sólido. En ambos enfoques, etapas de acoplamiento y desprotección se alternan de forma repetitiva y pueden estar separadas por purificaciones intermitentes. Un exceso de un componente carboxílico activado se usa preferiblemente en cada etapa de acoplamiento para asegurar el acoplamiento cuantitativo a un componente amino; de este modo, puede evitarse la aparición de secuencias de supresión en el producto final. En la síntesis peptídica en fase sólida, el componente carboxílico activado residual se retira habitualmente por filtración al final de cada etapa de acoplamiento. En la síntesis en fase en solución se supone habitualmente que el componente carboxílico activado residual se destruye y se retira durante el procesamiento en fase acuosa intermitente. Sin embargo, a menudo se encuentran secuencias peptídicas de inserción, en la síntesis en fase en solución como impurezas del péptido final debido a la incompleta retirada del componente carboxílico (activado) residual después de una etapa de acoplamiento, que posteriormente se acoplaba después de la desprotección. Para evitar la aparición de dichas reacciones secundarias una etapa de depuración (scavenging) puede introducirse directamente después de la etapa de acoplamiento para depurar (inactivar) las funciones carboxílicas activadas residuales. Las aminas se aplican habitualmente como agentes depuradores (scavengers). El uso de poliaminas como agentes depuradores conduce a compuestos depurados que pueden extraerse de forma activa en una fase acuosa - preferiblemente ácida -, dependiendo de su polaridad [por ejemplo, Kisfaludy, L. et al. (1974) Tetrahedron Lett. 19, 1785-1786]. Esta extracción se realiza habitualmente antes de la etapa de desprotección para evitar la pérdida del péptido en desarrollo en la fase acuosa. Sin embargo, se ha descubierto que este procedimiento en muchos casos da como resultado una purificación intermitente incompleta debido a la hidrofobia del compuesto depurado: la hidrofobia intrínseca de la parte aminoacilo del componente carboxílico es potenciada por el aún presente grupo protector de amino. La extracción acuosa no es, por lo tanto, completamente eficaz. El documento US 6.121.488 divulga diversos agentes inactivadores tales como sales de metales alcalinos o sales de metales alcalinotérreos. El documento US 5.516.639 divulga la formación de un enlace amida haciendo reaccionar a un éster activado con una amina, inactivando a continuación con lisina. Recientemente, Carpino, L.A. et al. [(1999) J. Org. Chem. 64, 4324-4338] describieron una mejora del método de depuración. Además del uso de una poliamina como agente depurador, el grupo protector de amino 1,1dioxobenzo[b]tiofen-2-ilmetoxicarbonilo (Bsmoc) se aplicó en el procedimiento. La función Bsmoc tiene una muy alta labilidad hacia la base. Como resultado de esto, las funciones carboxílicas activadas residuales son depuradas y las funciones Bsmoc se retiran en una única y misma etapa usando una poliamina. Ahora se ha descubierto un nuevo procedimiento para la preparación de péptidos, en el que un exceso de un componente carboxílico activado se usa para acilar un componente amino, y en el que, después de la acilación una amina que comprende un anión latente, es decir un anión que se forma después de la desprotección, se usa como un agente depurador de funciones carboxílicas activadas residuales, portando el anión latente un grupo protector temporal que puede retirarse selectivamente, seguido de una etapa de desprotección que da como resultado compuestos hidrófilos depurados que pueden ser extraídos de forma activa en una fase acuosa básica. Este nuevo procedimiento permite una selección esencialmente arbitraria del grupo protector en el extremo N del componente carboxílico activado, dado que - al contrario que el procedimiento de Carpino - su desprotección no tiene lugar necesariamente en las mismas condiciones de reacción que la depuración del exceso de funciones carboxílicas activadas. Además, el procedimiento de esta invención permite la retirada altamente eficaz del componente carboxílico activado residual sin que surjan los problemas de hidrofobia de otros procedimientos de la técnica anterior en los que se usan poliaminas como agentes depuradores. Preferiblemente, el procedimiento de la invención tiene lugar en solución. Sin embargo, el procedimiento también puede aplicarse en la síntesis peptídica en fase sólida. El procedimiento de la invención también es adecuado para la preparación de otros compuestos que contienen uno o más enlaces amida. La amina que comprende un anión latente se usa como agente depurador. Preferiblemente, el anión latente en la amina depuradora porta un grupo protector temporal que puede retirarse de forma selectiva en presencia de cualquier grupo protector permanente unido al péptido en desarrollo. En una realización particularmente preferida, el grupo protector del anión latente en la amina depuradora muestra una labilidad similar a la del grupo protector temporal presente en el extremo N del péptido en desarrollo. Esto permite que la desprotección del agente depurador que produce el anión y la desprotección N-terminal del péptido en desarrollo tengan lugar en una única etapa del procedimiento. Se prefiere especialmente el procedimiento de la invención, en el que los grupos protectores temporales, presente en el extremo N del péptido en desarrollo y opcionalmente presentes en el agente depurador, sean grupos que puedan retirarse mediante hidrogenólisis, mientras que los grupos protectores permanentes son grupos que pueden retirarse mediante acidólisis. Preferiblemente, dichos grupos protectores temporales son de tipo bencilo, por ejemplo grupos bencilo y benciloxicarbonilo (sustituidos). Un agente depurador 2 E02077875 26-12-2011   preferido es una amina primaria que comprende un anión latente, y en particular un derivado de aminoácido protegido en el extremo C. Además de carboxilato, la amina depuradora puede comprender otras funciones aniónicas tales como - aunque sin limitarse a - sulfonato, sulfato, fosfonato, fosfato o fenolato. Un aminoácido altamente preferido para su uso como agente depurador es ß-alanina o un derivado de la misma (por ejemplo, un derivado de éster o éster silílico). El agente depurador más preferido es ß-alaninato de bencilo o una sal del mismo. Un tiol que comprende un latente también puede usarse como agente depurador en lugar de una amina que comprende un anión latente de acuerdo con el procedimiento de esta invención. El agente depurador se usa preferiblemente en un exceso molar de dos a seis veces con respecto al componente activo residual que es necesario depurar. El uso de un agente depurador de acuerdo con la presente invención conduce a compuestos hidrófilos depurados que pueden extraerse de forma activa en una fase acuosa básica después de la etapa de desprotección: después de la desprotección (si fuera aplicable), la hidrofilia se potencia mediante la presencia tanto de una función amino libre como de una función carboxílica libre en las especies depuradas. Por lo tanto, el procedimiento de esta invención da como resultado una purificación intermitente muy eficaz debido a la posibilidad de extraer de forma activa un compuesto hidrófilo. Además, un exceso de componente carboxílico posiblemente presente que no estaba activado y cuyo grupo protector temporal también se retiraba durante la desprotección, se extrae de la mezcla de reacción al mismo tiempo. El nuevo procedimiento de esta invención puede usarse convenientemente en la preparación de oligo- y polipéptidos y, de forma más general, en la preparación de compuestos que contienen uno o más enlaces amida. Un procedimiento adecuado de acuerdo con la presente invención es el acoplamiento de un exceso de un componente carboxílico a un componente amino, en el que la función carboxílica se preactiva o se activa in situ usando un reactivo de acoplamiento y, si se desea, un aditivo. Después de la etapa de acoplamiento, las funciones carboxílicas activadas residuales se depuran añadiendo el agente depurador a la mezcla de reacción. Posteriormente, los grupos protectores temporales se retiran usando métodos adecuados conocidos en la técnica, seguidos de la retirada del compuesto depurado mediante extracción acuosa básica. Al mismo tiempo, un exceso de componente carboxílico posiblemente presente que no estaba activado y cuyo grupo protector temporal también se retiró durante la desprotección, se extrae de la mezcla de reacción. La expresión componente amino... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la preparación de compuestos que contienen uno o más enlaces amida usando un exceso de un compuesto carboxílico activado para acilar un componente amino, en el que, después de la acilación, una amina que comprende un anión latente, es decir, un anión que se forma después de la desprotección, se usa como agente depurador (scavenger) de funciones carboxílicas activadas residuales, portando el anión latente un grupo protector temporal que puede retirarse de forma selectiva en presencia de cualesquiera grupos protectores permanentes unidos al compuesto que contiene uno o más enlaces amida, seguido de una etapa de desprotección que da como resultado compuesto hidrófilos depurados que pueden extraerse de forma activa en una fase acuosa básica. 2. El procedimiento de la reivindicación 1, siendo el compuesto que contiene uno o más enlaces amida un péptido. 3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que el anión latente en la amina depuradora porta un grupo protector temporal que muestra una labilidad similar a la del grupo protector temporal presente en el extremo N del péptido en desarrollo. 4. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 3, en el que los grupos protectores temporales son grupos que pueden retirarse mediante hidrogenólisis, mientras que los grupos protectores permanentes son grupos que pueden retirarse mediante acidólisis. 5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que los grupos protectores temporales son de tipo bencilo. 6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el agente depurador es una amina primaria. 7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la amina primaria es un derivado de aminoácido protegido en el extremo C. 8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que el aminoácido es ß-alanina o un derivado de la misma. 9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el agente depurador es ß-alaninato de bencilo o una sal del mismo. 10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que un tiol que comprende un anión latente se usa como agente depurador (scavenger) en lugar de una amina que comprende un anión latente. 11. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el procedimiento se realiza en solución. 6 E02077875 26-12-2011