Péptidos de chi-conotoxina que tienen un ácido piroglutámico N-terminal.

Composición que comprende, al menos en un soporte fisiológicamente aceptable,

un sistema filtrante, caracterizada porque comprende:

(a) al menos un filtro UV del tipo derivado del dibenzoilmetano, y

(b) al menos un filtro UV de tipo 1,3,5-triazina fotosensible en presencia de un derivado del dibenzoilmetano, y

(c) al menos un compuesto s-triazina siliciada sustituida por dos grupos aminobenzoatos o aminobenzamidas de fórmula (I) siguiente, o una de sus formas tautoméricas:

en la que

- R, idénticos o diferentes, representan un radical alquilo de C1-C30, lineal o ramificado, y eventualmente halogenado

o insaturado, un radical arilo de C6-C12, un radical alcoxi de C1-C10 o el grupo trimetilsililoxi; - a ≥ 0 a 3;

- el grupo D designa un compuesto s-triazina de fórmula (II) siguiente:

en la que

- X representa -O- o -NR3-, con R3 que representa el hidrógeno o un radical alquilo de C1-C5,

- R1 representa un radical alquilo de C1-C20, lineal o ramificado y eventualmente insaturado, y que puede tener un átomo de silicio, un grupo cicloalquilo de C5-C20, eventualmente sustituido con 1 a 3 radicales alquilos de C1-C4,

lineales o ramificados, el grupo -(CH2CHR4-O)mR5 o el grupo -CH2-CH(OH)-CH2-O-R6,

- R4 representa hidrógeno o metilo; pudiendo estar el grupo (C≥O)XR1 en la posición orto, meta o para del grupo amino,

- R5 representa el hidrógeno o un grupo alquilo de C1-C8,

- R6 representa el hidrógeno o un grupo alquilo de C4-C8,

- m es un número entero comprendido entre 2 y 20,

- n ≥ 0 a 2,

- R2, idénticos o diferentes, representan un radical hidroxi, un radical alquilo de C1.C8, lineal o ramificado, un radical alcoxi de C1-C8, pudiendo formar juntos dos R2 adyacentes de un mismo núcleo aromático un grupo alquiliden-dioxi en el que el grupo alquilideno contiene 1 ó 2 átomos de carbono.

- A es un radical divalente seleccionado de entre metileno, -[CH(Si(CH3)3]-, etileno o un grupo que responde a una de las fórmulas (III), (IV) ó (V) siguientes:

en las que:

- Z es un diradical alquileno de C1-C10, lineal o ramificado, saturado o insaturado, eventualmente sustituido con un radical hidroxilo o unos oxígenos y que puede eventualmente contener un grupo amino,

- W representa un átomo de hidrógeno, un radical hidroxilo o un radical alquilo de C1-C8, lineal o ramificado, saturado o insaturado.

Péptidos de chi-conotoxina que tienen un ácido piroglutámico N-terminal.

La presente invención se refiere a péptidos -conotoxinas novedosos útiles como inhibidores de transportadores de aminas neuronales de neurotransmisores tales como noradrenalina, serotonina, dopamina, ácido glutámico y glicina.

La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que comprenden estos péptidos y el uso de estos péptidos en la prevención o tratamiento de afecciones, tales como pero no limitadas a, dolor, inflamación, incontinencia, trastornos cardiovasculares y trastornos del humor.

Los caracoles marinos del género Conus (caracones cónicos) usan una estrategia bioquímica sofisticada para capturar su presa. Como predadores de bien pescado, bien gusanos o bien otros moluscos, los caracoles cónicos inyectan a su presa con veneno que contiene un cóctel de péptidos bioactivos pequeños. Estas moléculas de toxina, que se refieren como conotoxinas, interfieren con la neurotransmisión usando como objetivo una diversidad de receptores y canales iónicos. El veneno de cualquier especie de Conus individual puede contener más de 100 péptidos diferentes. Las conotoxinas se dividen en clases en base a sus objetivos fisiológicos. La clase de péptidos -conotoxina usa como objetivo y bloquea canales de Ca2+ sensibles a voltaje que inhiben liberación de neurotransmisores. Las -conotoxinas y las -conotoxinas usan como objetivo y bloquean receptores ACh nicotínicos, causando bloqueo gangliónico y neuromuscular. Los péptidos de la clase -conotoxina actúan para bloquear canales de Na+ sensibles a voltaje que inhiben potenciales de acción musculares y nerviosos. Las conotoxinas usan como objetivo y retardan la inactivación de canales de Na+ sensibles a voltaje, potenciando excitabilidad neuronal. La clase de péptidos -conotoxina marcan como objetivo y bloquean canales de K+ sensibles a voltaje y estos péptidos causan también excitabilidad neuronal potenciada. Las conopresinas son antagonistas de receptores de vasopresinas y las conantocinas son agonistas de receptores de NMDA. La clase -conotoxinas usa como objetivo un canal catiónico no específico sensible a voltaje. La clase de σ-conotoxinas antagoniza el receptor de 5HT33 y la clase de -conotoxinas inhibe transportadores de aminas neuronales.

La clase de péptidos -conotoxinas se describió primero en el documento WO 00/20444 (Universidad de Queensland) , aunque dos miembros de la clase se refirieron posteriormente en el documento WO 00/44769 (Universidad de Utah Research Foundation) . Los péptidos -conotoxinas particulares identificados en el documento WO 00/20444 fueron MrIA y MrIB a partir de la caza de moluscos C. marmoreus que tienen las siguientes secuencias:

- MrIA Asn Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 1

- MrIB Val Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 2

En estas y las siguientes secuencias las Xaa3 se refieren a 4-hidroxiprolina (Hyp) . En la naturaleza, este residuo aminoacídico resulta de la modificación postraduccional del péptido codificado y no está directamente codificado por la secuencia nucleotídica.

Diversos péptidos -conotoxinas y variantes y usos, de los mismos se describen en los documentos WO 2004/050688; WO 02/064740; Jones y cols. (2001) , Exp. Opin. Ther. Patents, 11 (4) : 603-623; y Harvey (2002) , TRENDS in Pharmacological Sciences, 23 (5) : 201-203.

Los compuestos que inhiben la recaptación de neurotransmisores se ha encontrado que son útiles en el tratamiento de dolor agudo, crónico y/o neuropático, migraña o inflamación. Tales compuestos se pueden administrar también con otros agentes útiles en estos tratamientos para proporcionar alivio de dolor/inflamación mejorado y/o para reducir la gravedad de efectos secundarios indeseados, tales cono náuseas y malestar estomacal. También se ha encontrado que son útiles en el tratamiento de trastornos del tracto urinario inferior, tales como incontinencia urinaria, inestabilidad del detrusor y cistitis intersticial. Un compuesto tal es "imipramina" que, además de inhibir la recaptación de noradrenalina, se ha mostrado que afecta el bloqueo de canales de calcio y que exhibe actividad anticolinérgica, anestésica local y un número de otros efectos. Otros compuestos capaces de inhibir la recaptación de noradrenalina, se describen en la patente de EE.UU. 5.441.985. Estos compuestos se ha dicho que tienen un efecto anticolinérgico reducido en relación con la imipramina.

45 En el caso de los péptidos de la presente invención esta inhibición de la recaptación de neurotransmisores se logra inhibiendo selectivamente el transportador de neurotransmisores neuronales, tal como el transportador de noradrenalina, que funciona para disipar rápidamente noradrenalina liberada desde la sinapsis de regreso dentro de las neuronas.

Como se describe en el documento WO 00/2044 el péptido -MrIA está compuesto de una cola, residuos 1-3, dos bucles, residuos 6-9 (bucle 1) y 11-12 (bucle 2) , respectivamente y tienen dos residuos de cisteína entre enlaces disulfuro 4 y 13 y 5 y 10, respectivamente. Mientras MrIA se parece a un péptido -conotoxina en términos del número de residuos de cisteína, la conectividad de disulfuros es diferente. A este respecto los péptidos -conotoxina se caracterizan por una conectividad A-C/B-D, más que la conectividad A-D/B-C de MrIA, donde A, B, C y D representan el primero, segundo, tercero y cuarto residuos de cisteína involucrados en la formación de enlaces disulfuro, respectivamente.

Ahora se ha encontrado sorprendentemente que la sustitución de un residuo de asparragina N-terminal de MrIA con un residuo de ácido piroglutámico o la adición de un residuo de piroglutamato al extremo N-terminal de MrIA 5 proporciona ventajas particulares sobre MrIA en términos de eficacia in vivo, duración del efecto, estabilidad y método de preparación.

De acuerdo con ello, en un primer aspecto la presente invención proporciona un péptido -conotoxina aislado, sintético o recombinante que comprende la siguiente secuencia de aminoácidos:

Xaa1 Xaa2 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Pro Cys SEC ID N.º: 3

donde Xaa1 es un residuo de pGlu o de DpGlu N-terminal; y Xaa2 es Asn o una deleción;

o una secuencia tal en la que uno o más Cys se reemplazan con su D-aminoácido correspondiente y/o Pro se reemplaza con 4-hidroxiprolina, y/o Tyr está sustituido con 4-metoxitirosina; o una sal, un éster o amida de la misma.

En un aspecto particular el péptido -conotoxina aislado, sintético o recombinante de la presente invención puede consistir en la secuencia de SEC ID N.º: 3 como anteriormente.

En las secuencias anteriores pGlu representa piroglutamato y DpGlu representa D-piroglutamato.

Los péptidos de acuerdo con la presente invención tienen un número de ventajas sorprendentes e inesperadas sobre MrIA. Los péptidos se ha encontrado también que son particularmente estables para el almacenamiento en el intervalo de pH de 4 a 7 y a 37 ºC, permitiendo administración a largo plazo en un dispositivo, por ejemplo una bomba de infusión, mantenida a temperatura ambiente a 37 ºC. Hay también ventajas en relación con la producción y separación de péptidos de subproductos de síntesis no deseados, permitiendo purificación directa a homogeneidad de > 99 %, en relación a MrIA usando un procedimiento similar en el que la pureza es típicamente < 93 %. Cuando se suministra i.t. en un modelo neuropático de rata de alodinia, un péptido de acuerdo con la presente invención se encuentra que tiene mayor eficacia máxima en relación con MrIA, sin influir en los efectos secundarios o reducir la ventana terapéutica en el modelo animal. La duración del efecto del péptido se encontró que se prolonga más allá de 48 horas después de que se da i.t. una dosis de 30 nmol de bolo. Los péptidos de acuerdo con la presente invención son particularmente útiles en el tratamiento de dolor neuropático y sus síntomas cuando se administran en una i.t. o epidural de tampón apropiado. Incluyendo tales afecciones de dolor neuropático dolor de cirugía (dolor postoperatorio) , de intestino, de cáncer, diabético, del miembro fantasma, de daño nervioso, inflamatorio y dolor asociado con nervios periféricos.

Preferentemente, el transportador de aminas neuronal inhibido por el péptido de -conotoxina es el transportador de 30 noradrenalina neuronal.

El péptido -conotoxina puede... [Seguir leyendo]

1. Un péptido -conotoxina aislado, sintético o recombinante que comprende la siguiente secuencia de aminoácidos:

Xaa1 Xaa2 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Pro Cys SEC ID N.º: 3

donde Xaal es un residuo de piroglutamato o de D-piroglutamato N-terminal; y Xaa2 es Asn o una deleción;

o una secuencia tal en la que uno o más Cys están reemplazados con su D-aminoácido correspondiente y/o Pro está reemplazado con 4-hidroxiprolina, y/o Tyr está reemplazado con 4-metoxitirosina; o una sal, éster o amida de la misma.

2. Un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la reivindicación 1 o una secuencia tal en la que uno o más Cys están reemplazados con su D-aminoácido correspondiente o una sal, éster o amida del mismo.

3. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que Pro se ha reemplazado con 4-hidroxiprolina.

4. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:

Xaa1 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 4

Xaa1 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Xaa5 SEC ID N.º: 5

Xaa1 Gly Val Cys Cys Gly Xaa4 Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 6

Xaa1 Asn Gly Val Cys Cys Gly Xaal4 Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 7

Xaa1 Asn Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 8

Xaa1 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys-OH SEC ID N.º: 9

donde Xaal se refiere a ácido piroglutámico, Xaa3 se refiere a 4-hidroxiprolina, Xaa4 se refiere a 4-metoxitirosina, Xaa5 se refiere a D-cisteína y -OH indica un ácido libre C terminal.

5. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:

Xaa1 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys-OH SEC ID N.º: 10

Xaa1 Gly Val Cys Cys Gly Tyr Lys Leu Cys His Xaa3 Cys SEC ID N.º: 11

donde Xaal se refiere a ácido D-piroglutámico, Xaa3 se refiere a 4-hidroxiprolina y -OH indica un ácido libre C terminal.

6. Una composición que comprende un péptido -conotoxina aislado, sintético o recombinante de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 conjuntamente con vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

7. La composición de la reivindicación 6, que comprende adicionalmente uno o más agentes activos diferentes.

8. Un péptido -conotoxina de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para usar como medicamento.

9. Un péptido -conotoxina de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para uso en tratar o prevenir enfermedades o afecciones de los sistemas urinario o cardiovascular, o trastornos del humor, o en el tratamiento o control de dolor agudo, crónico y/o neuropático, migraña o inflamación.

10. Un péptido -conotoxina de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para uso en tratar el dolor neuropático asociado con cirugía (dolor postoperatorio) , de intestino, de cáncer, diabético, del miembro fantasma, de daño nervioso, inflamatorio y dolor asociado con nervios periféricos.

11. Uso del péptido -conotoxina aislado, sintético o recombinante de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5,

en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de afecciones o enfermedades urinarias o cardiovasculares, o trastornos del humor, o para el tratamiento del dolor agudo, crónico y/o neuropático, migraña o inflamación.

12. Uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el dolor neuropático está asociado con cirugía (dolor postoperatorio) , de intestino, de cáncer, diabético, del miembro fantasma, de daño nervioso, inflamatorio y dolor 10 asociado con nervios periféricos.

13. El uso de la reivindicación 11 o 12, en el que dicho medicamento se formula para la administración de manera sustancialmente simultáneamente o secuencialmente con otros agentes útiles en el tratamiento de las afecciones, enfermedades o trastornos.