Utilización de un péptido que contiene una secuencia de aminoácidos del bucle C'-D de un miembro de la familiade la CD28,

a saber las SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 1, o 5 - 10, o de una proteína que contiene este péptido, perono de la CD28 humana, en un procedimiento de escrutinio para la identificación de unas sustancias que modulan deun modo superagonista la proliferación de células T de desde varios hasta todos los subconjuntos,realizándose que una sustancia o una mezcla de sustancias es sometida para esto a un ensayo de unión con elpéptido o la proteína,y siendo seleccionadas las sustancias que se unen al péptido o a la proteína.

Péptido o proteína que contiene un bucle C'-D de la familia de receptores de la CD28.

Sector del invento

El invento se refiere a una proteína o un péptido que contiene una secuencia parcial de un miembro de la familia de la CD28, a un ácido nucleico que codifica un tal péptido, a un plásmido que contiene un tal ácido nucleico, a células de hibridoma, que producen anticuerpos monoclonales (mAB's) , que se unen a un tal péptido, a unos mAb's obtenibles a partir de tales células de hibridoma así como a unas utilizaciones del péptido y de los mAb’s.

Definiciones:

Por el concepto de "anticuerpos monoclonales" se designa a unos anticuerpos, que son producidos por linajes de células híbridas (los denominados hibridomas) , que han resultado típicamente mediante una fusión de una célula B que produce anticuerpos, de procedencia animal o humana, con una adecuada célula tumoral de mieloma.

La secuencia de aminoácidos de una CD28 humana se conoce bajo el n° de acceso (en inglés "Accession No.") NM_006139.

La secuencia de aminoácidos de una CTLA-4 humana se conoce bajo el n° de acceso L15006.

La secuencia de aminoácidos de una ICOS humana se conoce bajo el n° de acceso AJ277832.

La secuencia de aminoácidos de una PD-1 humana se conoce bajo el n° de acceso U64863.

El bucle (del inglés loop) C'-D de una C28 abarca los aminoácidos 52 hasta 66 de la precedente secuencia de la CD28 (numeración de acuerdo con la Fig. 7, véase también la cita de Ostrov, D.A., y colaboradores; Science (2000) , 290:816-819) . Por el concepto del "bucle C'-D" se han de entender en lo sucesivo también unas arbitrarias secuencias parciales de éste.

Un bucle o respectivamente un sitio de unión dispuesto dentro de éste es libremente accesible cuando para un partícipe definido en la unión no se presenta ningún impedimento estérico para el sitio de unión en el bucle por medio de las secuencias o moléculas que siguen al bucle.

Por el concepto de "activación de linfocitos T" se designa a la multiplicación de la actividad metabólica, al aumento del volumen celular, a la síntesis de moléculas importantes inmunológicamente y a la entrada en la división celular (proliferación) de linfocitos T al recibir una incitación externa. Una inhibición constituye el proceso opuesto a esto. Por ejemplo, tales procesos son provocados por ocupación de la molécula de CD28 en células T por medio de unos anticuerpos monoclonales especiales específicos para una CD28. La activación de linfocitos T con los fenómenos acompañantes descritos es una parte de la reacción inmunitaria fisiológica, pero ésta puede quedar allí fuera de control en situaciones patológicas (enfermedades linfoproliferativas) , o ser insuficiente (inmunodeficiencia) .

Por el concepto de "modulación de la proliferación de células T" se entiende o bien el refuerzo de la activación (en el caso de una activación patológicamente insuficiente) o un debilitamiento o respectivamente una inhibición de la activación (en el caso de enfermedades patológicamente linfoproliferativas) .

Por el concepto de "varios subconjuntos de células T" se entienden por lo menos los subconjuntos de células T CD4 y CD8.

Un péptido análogo es un péptido, cuya secuencia de aminoácidos se desvía de la del péptido, con respecto del que él es análogo, pero que une a un partícipe definido en la unión con una afinidad por lo menos igual. Unas desviaciones en la secuencia pueden ser supresiones, sustituciones, inserciones y elongaciones. Un péptido análogo tendrá por regla general una estructura (parcial) terciaria y/o una exposición dentro del marco de una proteína (de la superficie celular) muy similares a las del péptido, y por lo demás sólo necesita tener un sitio de unión para el partícipe definido en la unión, en la región análoga a la región de unión inmediata del péptido, o formar a éste.

Un compuesto mimético de un mAb es una estructura química natural o sintética, que en un ensayo de unión se comporta como un mAb definido, que es mimetizado por el compuesto mimético.

Un compuesto mimético de un bucle C'-D es una estructura química natural o sintética, a la que se unen específicamente unos mAb's superagonistas y que son específicos para un miembro de la familia de la CD28.

El concepto de los "mAb’s" abarca, junto a las estructuras con la constitución Fab/Fc usual, también unas estructuras que se componen exclusivamente del fragmento Fab. También es posible aprovechar solamente la región variable, estando unido el fragmento de las cadenas pesadas con el fragmento de la cadena ligera de un modo adecuado, por ejemplo también mediante unas moléculas de puente sintéticas, de tal manera que las regiones de unión de las cadenas formen el sitio de unión de los anticuerpos. El concepto de los "anticuerpos" abarca también unos anticuerpos quiméricos (completos) así como humanizados.

Por el concepto de "la modulación superagonista de la proliferación de células T" se entiende que no es necesaria ninguna estimulación concomitante, es decir que, junto a una unión de un mAb o de un compuesto mimético con un miembro de la familia de la CD28, no es necesario ningún otro suceso adicional de unión para la estimulación o inhibición de la proliferación.

Un procedimiento de escrutinio (en inglés screening) abarca el empleo de una diana (en inglés target) , por ejemplo de una secuencia parcial procedente de la CD28, siendo puestas en contacto con la diana una o varias sustancias conocidas o desconocidas, y siendo comprobado o no un suceso de unión. En el caso de la comprobación de un suceso de unión, se selecciona la sustancia. En el caso del empleo de una mezcla de sustancias, a una selección de la mezcla le sigue típicamente una desconvolución con el fin de efectuar la determinación de los componentes que se unen en la mezcla seleccionada.

Por el concepto de "familia de la CD28" se designa a un conjunto de receptores de la superficie de células T, quetienen una actividad inmunoreguladora. Ésta puede ser o bien estimuladora, tal como en el caso de la CD28 o inhibidora, tal como en el caso de la CTLA-4. A la familia de la CD28 pertenecen la CD28, la CTLA-4, la PD-1 e ICOS.

Un substrato puede ser soluble, insoluble y/o estar inmovilizado. Un substrato puede estar formado a base de arbitrarias moléculas naturales o sintéticas, entre otras cosas, a base de cadenas de aminoácidos. Por lo tanto, una proteína o un péptido en la terminología de este texto no tiene que ser necesariamente una proteína o un péptido en la definición usual. Por regla general, una proteína o un péptido, de acuerdo con la terminología aquí utilizada, es no obstante también una proteína o un péptido en la terminología usual en la especialidad.

Antecedentes del invento y estado de la técnica

Para la comprensión del invento son importantes en primer lugar los siguientes antecedentes tecnológicos. La activación de células T en reposo para la proliferación y la diferenciación funcional requiere primeramente la ocupación de dos estructuras superficiales, de los denominados receptores: 1. del receptor de antígenos, que posee una especificidad diferente de una célula a otra, y que es necesario para el reconocimiento de antígenos, p.ej. de productos víricos de disociación; así como de la molécula de CD28 expresada de igual manera en todas las células T en reposo con la excepción de un subconjunto de las células T de CD8 de un ser humano, la cual se une de un modo natural a unos ligandos situados sobre la superficie de otras células del sistema inmunitario. Se habla de la estimulación concomitante de la reacción inmunológica específica para antígenos por medio de la CD28. En un cultivo de células se pueden recrear estos procesos mediante la ocupación del receptor de antígenos así como de la molécula de CD28 con unos mAb's adecuados. En el sistema clásico de la estimulación concomitante, ni la ocupación del receptor de antígenos ni la de la molécula de CD28 a solas conducen a la proliferación de células T, pero es efectiva la ocupación de los dos receptores. Esta observación se realizó en células T de un ser humano, de un ratón y de una rata.

Por el contrario, se conocen también unos mAb's, que a solas pueden inducir la proliferación de células T. Una tal activación superagonista,... [Seguir leyendo]

1. Utilización de un péptido que contiene una secuencia de aminoácidos del bucle C'-D de un miembro de la familia de la CD28, a saber las SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 1, .

5. 10, o de una proteína que contiene este péptido, pero no de la CD28 humana, en un procedimiento de escrutinio para la identificación de unas sustancias que modulan de un modo superagonista la proliferación de células T de desde varios hasta todos los subconjuntos,

realizándose que una sustancia o una mezcla de sustancias es sometida para esto a un ensayo de unión con el péptido o la proteína,

y siendo seleccionadas las sustancias que se unen al péptido o a la proteína.

2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, siendo la sustancia un anticuerpo monoclonal.

3. Células de hibridoma, que producen anticuerpos monoclonales que se unen a un péptido o a una proteína de acuerdo con las secuencias de aminoácidos SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 1, .

5. 10.

4. Células de hibridoma de acuerdo con la reivindicación 3, como las que se han depositado bajo los números de DSM DSM ACC2531 o DSM ACC2530.

5. Anticuerpos monoclonales, que son obtenibles a partir de las células de hibridoma de acuerdo con la reivindicación 3 o 4, que son codificados por lo menos parcialmente por una o varias de las secuencias SEQ ID NO: 33, 35, 37 y/o 39, o unos anticuerpos monoclonales que contienen o se componen de una o varias de las secuencias SEQ ID NO: 34, 36, 38 y/o 40.

6. Utilización de un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 5 para la producción de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de un SIDA, o para el tratamiento después de trasplantes de células madre como continuación de una quimio-o radioterapia en el caso de enfermedades leucémicas, o para la potenciación y/o la influencia cualitativa sobre reacciones inmunitarias en el caso de vacunas protectoras o para el tratamiento de enfermedades inflamatorias autoinmunitarias.

Nombre de archivo: VLC 5.11 humanizado

Fig. 10 a

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