Un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero,

en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos y menos de 0,5 % de bromo libre.

Procedimiento para la preparación de mezclas de acetato de trifluoroacetilglatirámero usando ácido bromhídrico purificado.

A lo largo de esta solicitud se hace referencia a diversas publicaciones por sus citas completas. Las revelaciones de estas publicaciones en su totalidad se incorporan en esta solicitud por referencia con el fin de describir con más detalle el estado de la técnica al que pertenece esta invención.

Antecedentes de la invención

Una mezcla de polipéptidos que no tienen todos la misma secuencia de aminoácidos referidos como acetato de glatirámero (GA) se comercializa con el nombre comercial Copaxona® y comprende las sales de acetato de polipéptidos que contienen ácido L-glutámico, L-alanina, L-tirosina y L-lisina en fracciones molares promedio de 0, 141, 0, 427, 0, 095 y 0, 338, respectivamente. El peso molecular promedio de Copaxona® está entre 4.700 y 11.000 daltons. ("Copaxone", Physician's Desk Reference, (2000) , Medical Economics Co., Inc., (Montvale, NJ) , 3115) . Químicamente, acetato de glatirámero se designa polímero de ácido L-glutámico con L-alanina, L-lisina, L-tirosina, acetato (sal) . Su fórmula estructural es:

(Glu, Ala, Lys, Tyr) x ·XCH3COOH

(C5H9NO4 · C3H7NO2 · C6H14N2O2 · C9H11NO3) x · XC2H4O2

CAS - 147245-92-9

("Copaxone", Physician's Desk Reference, (2000) , Medical Economics Co., Inc., (Montvale, NJ) , 3115) .

El acetato de glatirámero está aprobado para reducción de la frecuencia de recaídas en pacientes con esclerosis múltiple remitente que provoca recaídas. La esclerosis múltiple se ha clasificado como una enfermedad autoinmune. El acetato de glatirámero también se ha descrito para usar en el tratamiento de otras enfermedades autoinmunes (documento WO-A-2003040809) , enfermedades no autoinmunes inflamatorias (Publicación N.º: US 2005/0014694 A1 por V. Wee Yong y cols., y Solicitud de Patente de los Estados Unidos N.º: 2002/0077278 A1, publicada el 20 de junio de 2002 (Young y cols.) ) y para promover la regeneración neural y/o para evitar o inhibir degeneración secundaria que puede seguir a daño principal del sistema nervioso (Publicación N.º: US 2003/0004099 A1 por M. Eisenbach-Schwartz y cols., y Solicitud de Patente de los Estados Unidos N.º: 2002/0037848 A1, publicada el 28 de marzo de 2002 (Eisenbach-Schwartz) ) . Además, el acetato de glatirámero se ha revelado como un tratamiento para enfermedades mediadas por el sistema inmune (por ejemplo, Patente de los Estados Unidos N.º: 6.514.938 B1, publicada el 4 de febrero de 2003 (Gad y cols.) ; Publicación Internacional PCT N.º WO 01/60392, publicada el 23 de agosto de 2001 (Gilbert y cols.) ; y Publicación Internacional PCT N.º: WO 00/27417, publicada el 19 de mayo de 2000 (Aharoni y cols.) , así como enfermedades asociadas con desmielinización (Publicación Internacional PCT N.º WO-1/97846, publicada el 27 de diciembre de 2001/ (Moses y cols.) . Otros documentos que hacen referencia a la preparación de glatirámero son los documentos WO-A-9632119 y WO-A-9531990.

El procedimiento de fabricación como se detalla en las patentes anteriores implica hacer reaccionar polipéptidos protegidos con ácido bromhídrico al 33 % en ácido acético. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . Esta reacción de desprotección elimina el grupo protector de bencilo en gamma del 5-carboxilato del residuo de glutamato y escinde el polímero a polipéptidos menores para formar un trifluoroacetilpolipéptido. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . El tiempo necesario para obtener GA del peso molecular promedio apropiado de entre 7.000 ± 2.000 daltons depende de la temperatura de reacción y del perfil de peso molecular del acetato de glatirámero protegido. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . La desprotección ocurre a una temperatura de entre 20 °C y 28 °C (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . Una prueba de la reacción se lleva a cabo en cada lote a diferentes periodos de tiempo para determinar el tiempo de reacción necesario a una temperatura dada para lograr trifluoroacetilpolipéptidos de un perfil de peso molecular apropiado. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.981.589, concedida el 9 de noviembre de 1999 a Konfino y cols.) La cantidad de tiempo necesaria para los intervalos de reacción, por ejemplo, entre 10 y 50 horas. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . Además, las Patentes de los Estados Unidos N.ºs: 5.981.589, 6.048.898, 6.054.430, 6.342.476, 6.362.161 y 6.620.847, también se refieren a composiciones y procedimientos para elaboración de mezclas de polipéptidos, incluyendo GA.

Esta invención proporciona un procedimiento de fabricación mejorado.

Sumario de la invención

La invención objeto proporciona un procedimiento para obtener una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos que no todos tienen la misma secuencia de aminoácidos, donde cada polipéptido consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y trifluoroacetil-lisina, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado y en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, y-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0, 5 % de bromo libre.

La invención objeto también proporciona un procedimiento para obtener una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos que no todos tienen la misma secuencia de aminoácidos, donde cada polipéptido consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y trifluoroacetil-lisina, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado y en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, y-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 1000 ppm de impurezas iónicas metálicas.

La invención objeto proporciona además procedimiento de producir una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos que no todos tienen la misma secuencia de aminoácidos, donde cada polipéptido consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y trifluoroacetil-lisina, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado que comprende desproteger una mezcla de polipéptidos que consta cada uno de alanina, y-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos.

La presente invención también proporciona una composición que comprende el producto de trifluoroacetilo producido por uno cualquiera de los procedimientos de la invención objeto y un vehículo.

La invención objeto proporciona adicionalmente una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos que no todos tienen la misma secuencia de aminoácidos, donde cada polipéptido consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y trifluoroacetil-lisina, en la que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado, no más de 0, 1% de tirosina bromada y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos. La invención objeto también proporciona una composición que comprende la mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos y un vehículo.

La presente invención también proporciona procedimiento para obtener una composición farmacéutica que contiene una mezcla de polipéptidos que no todos tienen la misma secuencia de aminoácidos, donde cada polipéptido consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y lisina y en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado, que comprende

a) polimerizar N-carboxianhídridos de tirosina, alanina, y-benzilglutamato y N- trifluoroacetil-lisina para formar una mezcla de polipéptidos protegidos;

b) desproteger los polipéptidos protegidos con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, la solución comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos para formar una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos;... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, y-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos y menos de 0, 5 % de bromo libre.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende menos de 0, 1 % de bromo libre, menos de 0, 05 % de bromo libre, menos de 0, 01 % de bromo libre, menos de 0, 001 % de bromo libre, o está exenta de bromo libre.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende menos de 500 ppm de impurezas de iones metálicos, menos de 100 ppm de impurezas de iones metálicos, menos de 10 ppm de impurezas de iones metálicos, o está exenta de impurezas de iones metálicos.

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la solución es ácido bromhídrico al 10-36 % en ácido acético.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que la solución es ácido bromhídrico al 33 % en ácido acético.

6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende adicionalmente una etapa de tratamiento previo de la solución con un aceptor de bromo con el fin de eliminar el bromo libre.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que el aceptor de bromo es fenol.

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que la solución se produce en un reactor no metálico.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la solución se prepara en un reactor revestido de vidrio o revestido de politetrafluoroetileno.

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el color del ácido bromhídrico en solución de ácido acético es menor de 2000 APHA, menor de 1000 APHA, menor de 700 APHA, o menor de 500 APHA.

11. Un producto de trifluoroacetilo producido por el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10.

12. Una composición que comprende el producto de trifluoroacetilo producido por el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-10 y un vehículo.

13. Un procedimiento para analizar el porcentaje de tirosina bromada en una muestra de acetato de glatirámero que comprende las etapas de: a ) hidrolizar el acetato de glatirámero para obtener un hidrolizado; b ) eluir el hidrolizado a través de una columna cromatográfica; c ) medir el nivel de bromotirosina en el hidrolizado; d ) preparar soluciones de muestra de los componentes aminoacídicos de acetato de glatirámero y de bromotirosina;

e ) eluir las soluciones de muestra a través de la columna de la etapa b) ; y f ) calcular el porcentaje de tirosina bromada en el acetato de glatirámero.