Un método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno,

comprendiendo el método:someter la célula presentadora de antígeno a pulsos conjuntamente con un bisfosfonato y un antígeno de enfermedad.

Método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno

5 Campo técnico

La presente invención se refiere a una célula presentadora de antígeno que se somete a pulsos conjuntamente con bisfosfonato y un antígeno de enfermedad. También la presente invención se refiere a una composición médica que comprende la célula presentadora de antígeno, un método de tratamiento y prevención que usa células dendríticas y

un método de inducción de un inmunocito que usa la célula presentadora de antígeno. Adicionalmente, la presente invención se refiere a un inmunocito que se induce mediante el método de inducción, a una composición médica que comprende el inmunocito y a un método de tratamiento y prevención que usa el inmunocito.

Antecedentes de la técnica

Como métodos para tratar el cáncer, existían la resección quirúrgica, la radioterapia y la quimioterapia usando un agente antitumoral. En los últimos años, se han estudiado y puesto en práctica otros diversos métodos terapéuticos distintos de estos. Uno de ellos es una terapia con inmunocélulas que utiliza inmunocitos. Por ejemplo, se describe la activación de linfocitos T γδ por un aminobisfosfonato mediante una célula presentadora de antígeno por

Miyagawa et al. en The Journal of Immunology 2001, 166, 5508 y Kunzmann et al. en Blood, 2003, 102 (11) , 39b. Se describe también la activación directa de linfocitos T γδ y su uso potencial en el tratamiento del cáncer por Kato et al. en The Journal of Immunology, 2001, 167, 5092, Wilhelm et al. en Blood, 2003, 102 (1) , 200, Kunzmann et al. en Blood, 2000, 96, 384 y Tanaka et al. en Bio Clinica, 2004, 19 (5) , 439.

La terapia inmunocelular incluye una terapia con LAK (linfocitos citolíticos activados por linfocinas) en que los linfocitos se activan in vitro por linfocinas y se transfieren entonces al cuerpo, una terapia con CTL (linfocitos T citotóxicos, de aquí en adelante designados como CTL) que usa CTL que reconocen y atacan específicamente una lesión, una terapia con células dendríticas y similares.

En la terapia con células dendríticas, que usa células dendríticas obtenidas permitiendo que esté presente un antígeno de enfermedad en el MHC (complejo antigénico principal de histocompatibilidad) directamente o después del procesamiento intracelular, se inducen in vivo para tratamiento CTL específicos de antígeno de enfermedad que atacan selectivamente un patógeno. El antígeno de enfermedad a presentar puede ser, por ejemplo, una proteína o péptido antigénico de cáncer, una proteína o péptido antigénico de enfermedad infecciosa o una parte de los mismos

(véanse los documentos no de patente 1 y 2, por ejemplo) .

Con el cultivo conjunto de las células dendríticas sometidas a pulsos con el antígeno de enfermedad y los linfocitos para estimular los linfocitos con las células dendríticas, es posible inducir CTL específicos de antígeno de enfermedad in vitro. Por ejemplo, en el caso de uso de células dendríticas sometidas a pulsos con la proteína o

péptido antigénico de cáncer o la proteína o péptido antigénico de enfermedad infecciosa, hay un aumento de los CTL específicos de antígeno de enfermedad inducidos en el cultivo conjunto de 5 a 20 veces del caso en que no se usen las células dendríticas anteriormente observadas.

En la terapia de células dendríticas que usa células dendríticas sometidas a pulsos con la proteína o péptido

45 antigénico de cáncer o la proteína o péptido antigénico de enfermedad infecciosa, la eficacia de la inducción de los CTL específicos de antígeno de enfermedad in vivo, a saber, la relación de CTL a todos los linfocitos, es conocida por aumentar por un factor de 2 a 14. La terapia con células dendríticas se da también a conocer en los documentos US 6.821.778, WO 2006/06638 y por Conti et al. en The Journal of Immunology, 2005, 174, 252-260.

50 Para potenciar la eficacia de la terapia de células dendríticas elevando la eficacia de la inducción de los CTL específicos de antígeno de enfermedad por células dendríticas, se realizan principalmente dos métodos actualmente.

En un método, además de someter a pulsos las células dendríticas con el antígeno de enfermedad, permitiendo a un

55 fármaco o similar que reaccione con un reactor de tipo Toll (de aquí en adelante designado como TLR) en las células dendríticas para que reaccione con las células dendríticas de modo que se potencie la capacidad presentadora de antígeno de las células dendríticas, aumenta directamente la eficacia de inducción de los CTL específicos de antígeno de enfermedad (un efecto coadyuvante por el TLR; véanse los documentos no de patente 3 y 4, por ejemplo) . En el otro método, además de someter a pulsos las células dendríticas con el antígeno de enfermedad,

60 permitiendo al glucolípido o similar estar presente en moléculas presentadoras de antígeno distintas de moléculas de MHC, por ejemplo, moléculas CD1d (diferenciación de agrupamiento 1d) en las células dendríticas de modo que activen los inmunocitos, incluyendo iNKT (linfocitos T citolíticos naturales invariantes) , etc., distintos de los CTL específicos de antígeno de enfermedad, aumenta indirectamente la eficacia de inducción de los CTL específicos de antígeno de enfermedad por estos inmunocitos activados (un efecto coadyuvante mediante inmunocitos distintos de

65 los CTL específicos de antígeno de enfermedad, véanse los documentos no de patente 5 y 6, por ejemplo) .

Sin embargo, el aumento en la inducción de CTL específicos de antígeno de enfermedad mediante el efecto coadyuvante directo por TLR o el efecto coadyuvante indirecto por inmunocitos distintos de los CTL específicos de antígeno de enfermedad es de aproximadamente 4 a 6 veces que en el caso en que estos coadyuvantes no se usen (in vitro) . Por consiguiente, se deseaba desarrollar una tecnología capaz de inducir CTL específicos de antígeno de

enfermedad más eficazmente.

Documento no de patente 1: Blood 2004, 103, 383-389

Documento no de patente 2: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 8809-8814

Documento no de patente 3: Nat. Rev. Immunol. 2004, 4, 449-511

Documento no de patente 4: Cancer Res. 2004, 64, 5461- 5470

Documento no de patente 5: J. Clin. Invest. 2004, 114, 1800-1811

Documento no de patente 6: J. Exp. Med. 2002, 195, 617-624

Divulgación de la invención

Problema a resolver por la invención

La presente invención se realizó considerando lo anterior y proporciona un método para un tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno (por ejemplo, una célula dendrítica o similar) para inducir eficazmente un 25 inmunocito que incluye de forma dominante un CTL CD8+ específico de antígeno de enfermedad y/o un linfocito T γδ in vivo y/o in vitro, una composición médica que comprende la célula presentadora de antígeno activada, un método de tratamiento y prevención que usa la célula presentadora de antígeno, un método de inducción de un inmunocito que incluye un CTL CD8+ específico de antígeno de enfermedad y/o un linfocito T γδ que usa la célula presentadora de antígeno activada, un inmunocito que es inducido por el método, una composición médica que comprende el

inmunocito y un método de tratamiento y prevención que usa el inmunocito.

Medios para resolver el problema

Para resolver el problema descrito anteriormente, los inventores de la presente invención realizaron estudios. Los

inventores encontraron entonces que, al someter células dendríticas a pulsos conjuntamente con bisfosfonato además del pulso con un antígeno de enfermedad, las relaciones de CTL específicos de antígeno de enfermedad y linfocitos T γδ a todos los linfocitos y los números de CTL específicos de antígeno de enfermedad y linfocitos T γδ aumentaban considerablemente en comparación con el caso de no añadir bisfosfonato, y completaron las presente invención. Por ejemplo, al añadir bisfosfonato, la relación de CTL específicos de antígeno de enfermedad a todos los

linfocitos puede aumentar por un factor de aproximadamente... [Seguir leyendo]

1. Un método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno, comprendiendo el método:

someter la célula presentadora de antígeno a pulsos conjuntamente con un bisfosfonato y un antígeno de 5 enfermedad.

2. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 1, en el que la célula presentadora de antígeno es al menos una seleccionada del grupo consistente en una célula dendrítica, una célula dendrítica inmadura y una célula presentadora de antígeno artificial.

3. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 1 o 2, en el que el bisfosfonato es un compuesto químico representado por la fórmula (I) , una sal del mismo o su hidrato:

Fórmula 1

en la que R es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo inferior, R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente entre sí del grupo consistente en un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo tiol, un grupo arilo o un grupo arilo sustituido, un grupo alquilo o un grupo alquilo

sustituido, un grupo alquilamino inferior, un grupo aralquilo, un grupo cicloalquilo y un grupo heterocíclico, o R1 y R2 forman parte de la misma estructura cíclica, y

un sustituyente en R1 y R2 se selecciona del grupo consistente en un átomo de halógeno, un grupo alquilo inferior, un grupo hidroxilo, un grupo tiol, un grupo amino, un grupo alcoxilo, un grupo arilo, un grupo ariltio, un grupo ariloxilo, 25 un grupo alquiltio, un grupo cicloalquilo y un grupo heterocíclico.

4. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el bisfosfonato es al menos uno seleccionado del grupo consistente en un ácido zoledrónico, un ácido pamidrónico, un ácido alendrónico, un ácido risedrónico, un ácido ibandrónico, un ácido

incadrónico, un ácido etidrónico, una sal de los mismos o su hidrato.

5. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la concentración del bisfosfonato en el pulso conjunto es de 0, 001 a 20 μM.

6. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 5, en el que la concentración de bisfosfonato en el pulso conjunto es de 0, 001 a 5 μM.

7. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el antígeno de enfermedad es al menos uno seleccionado del grupo consistente en

una proteína antigénica de cáncer, un péptido antigénico de cáncer, una proteína antigénica de enfermedad infecciosa o un péptido antigénico de enfermedad infecciosa, una célula de cáncer lisada o una célula de enfermedad infecciosa lisada y una célula apoptótica y una célula necrótica de una célula de cáncer o célula de enfermedad infecciosa, y un producto termotratado de los mismos.

45 8. El método para tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la concentración del antígeno de enfermedad en el pulso conjunto es de 0, 01 a 20 μg/ml.

9. El método para el tratamiento de activación de una célula presentadora de antígeno según la reivindicación 8, en 50 el que la concentración del antígeno de enfermedad en el pulso conjunto es de 0, 1 a 2 μg/ml.

10. Un método para la producción de una célula presentadora de antígeno activada, comprendiendo el método: tratar la célula presentadora de antígeno con el método para tratamiento de activación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

11. Un método para inducir un inmunocito, comprendiendo el método: (i) someter una célula presentadora de antígeno a pulsos conjuntamente con bisfosfonato y un antígeno de enfermedad, y

(ii) cultivar conjuntamente la célula presentadora de antígeno y un linfocito simultáneamente a o después del pulso conjunto.

12. El método para inducir un inmunocito según la reivindicación 11, en el que el inmunocito a inducir comprende al

menos uno de un CTL CD8+ específico de antígeno de enfermedad y/o un linfocito T γδ. 10

13. El método para inducir un inmunocito según la reivindicación 11 o 12, en el que la célula presentadora de antígeno es al menos una seleccionada del grupo consistente en una célula dendrítica, una célula dendrítica inmadura y una célula presentadora de antígeno artificial.

14. El método para inducir un inmunocito según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que el bisfosfonato es un compuesto químico representado por la fórmula (II) siguiente, una sal del mismo o su hidrato:

Fórmula 1

en la que R es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo inferior, R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente entre sí del grupo consistente en un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo tiol, un grupo arilo o un grupo arilo sustituido, un grupo alquilo o un grupo alquilo sustituido, un grupo alquilamino inferior, un grupo aralquilo, un grupo cicloalquilo y un grupo heterocíclico, o R1 y R2

forman parte de la misma estructura cíclica, y

un sustituyente en R1 y R2 se selecciona del grupo consistente en un átomo de halógeno, un grupo alquilo inferior, un grupo hidroxilo, un grupo tiol, un grupo amino, un grupo alcoxilo, un grupo arilo, un grupo ariltio, un grupo ariloxilo, un grupo alquiltio, un grupo cicloalquilo y un grupo heterocíclico.

15. El método para inducir un inmunocito según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en el que el bisfosfonato es al menos uno seleccionado del grupo consistente en ácido zoledrónico, ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido risedrónico, ácido ibandrónico, ácido incadrónico, ácido etidrónico, una sal de los mismos y su hidrato.

16. El método para inducir un inmunocito según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, en el que la concentración del bisfosfonato en el pulso conjunto es de 0, 001 a 20 μM.

17. El método para inducir un inmunocito según la reivindicación 16, en el que la concentración del bisfosfonato en el 40 pulso conjunto es de 0, 001 a 5 μM.

18. El método para inducir un inmunocito según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, en el que el antígeno de enfermedad es al menos uno seleccionado del grupo consistente en una proteína antigénica de cáncer, un péptido antigénico de cáncer, una proteína antigénica de enfermedad infecciosa o un péptido antigénico de

45 enfermedad infecciosa, una célula de cáncer lisada o una célula de enfermedad infecciosa lisada y una célula apoptótica y una célula necrótica de una célula de cáncer o célula de enfermedad infecciosa, y un producto termotratado de los mismos.

19. El método para inducir un inmunocito según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 18, en el que la 50 concentración del antígeno de enfermedad en el pulso conjunto es de 0, 01 a 20 μg/ml.

20. El método para inducir un inmunocito según la reivindicación 19, en el que la concentración del antígeno de enfermedad en el pulso conjunto es de 0, 1 a 2 μg/ml.

55 21. Un método para la producción de un inmunocito, comprendiendo el método: inducir el inmunocito mediante el método de inducción según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 20.

22. Uso de un bisfosfonato como componente eficaz en un acelerador de la activación en un método que comprende someter una célula presentadora de antígeno a pulsos con dicho acelerador de la activación en el momento del pulso con un antígeno de enfermedad.

23. El uso según la reivindicación 22, en el que la célula presentadora de antígeno es al menos una seleccionada del grupo consistente en una célula dendrítica, una célula dendrítica inmadura y una célula presentadora de antígeno artificial.

24. El uso según la reivindicación 22 o 23, en el que el bisfosfonato es un compuesto químico representado por la fórmula (I) siguiente, una sal del mismo o su hidrato:

Fórmula 1

en la que R es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo inferior, R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente entre sí del grupo consistente en un átomo de hidrógeno, un átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo tiol, un grupo arilo o un grupo arilo sustituido, un grupo alquilo o un grupo alquilo sustituido, un grupo alquilamino inferior, un grupo aralquilo, un grupo cicloalquilo y un grupo heterocíclico, o R1 y R2

forman parte de la misma estructura cíclica, y

un sustituyente en R1 y R2 se selecciona del grupo consistente en un átomo de halógeno, un grupo alquilo inferior, un grupo hidroxilo, un grupo tiol, un grupo amino, un grupo alcoxilo, un grupo arilo, un grupo ariltio, un grupo ariloxilo, un grupo alquiltio, un grupo cicloalquilo y un grupo heterocíclico.

25. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, en el que el bisfosfonato es al menos uno seleccionado del grupo consistente en ácido zoledrónico, ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido risedrónico, ácido ibandrónico, ácido incadrónico, ácido etidrónico, una sal de los mismos y su hidrato.