Método para distinguir la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn detectando la presencia de anticuerpos citoplasmáticos antineutrófilos (ANCA) fecales.

Un método para analizar una muestra fecal para ayudar en la diferenciación de la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn en una persona que se presenta con enfermedad inflamatoria intestinal;

comprendiendo el método: diluir una muestra fecal obtenida de una persona; determinar la presencia de anticuerpos citoplasmáticos antineutrófilos en la muestra tal que se pueda concluir un diagnóstico de colitis ulcerosa.

Metodo para distinguir la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn detectando la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos (ANCA) fecales Antecedentes de la invención Esta invención se refiere a metodos no invasivos para diferenciar subtipos clfnicos de la Enfermedad Inflamatoria Intestinal, a saber la Enfermedad de Crohn (EC) y la Colitis Ulcerosa (CU) . Mas específicamente, esta invención se refiere a un metodo para ayudar en la diferenciación de la enfermedad de Crohn de la colitis ulcerosa determinando la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos (ANCA, por sus siglas en ingles) , en el que la presencia de ANCA es indicativa de colitis ulcerosa, segun la reivindicación 1. La presencia de ANCA fecales se puede usar para diferenciar la colitis ulcerosa de otras enfermedades gastrointestinales tales como el Sfndrome del Intestino Irritable.

1 Millón estimado de americanos adolece de Enfermedad Inflamatoria Intestinal (EII) . La EII se caracteriza por una respuesta inflamatoria crónica que resulta en dano histológico para el revestimiento intestinal. La enfermedad de Crohn puede implicar a todo el tracto gastrointestinal e incluye inflamación que se extiende a la mucosa transmural, mientras que la colitis ulcerosa afecta solamente al intestino grueso e incluye inflamación del revestimiento mas interior. Estas dos enfermedades distintas requieren un diagnóstico diferencial rapido para el tratamiento óptimo. Los metodos convencionales que utilizan multiples examenes por endoscopia y analisis histológicos pueden llevar anos para confirmar un diagnóstico. La patente de Estados Unidos nO 6.218.120 describe un metodo de determinar la presencia de ANCA de suero como un marcador para diagnosticar la EII. No obstante, no describe un metodo para diagnosticar la colitis ulcerosa en un paciente diagnosticado con EII. Ademas, el metodo no describe analizar heces humanas en presencia de ANCA.

Existen otros metodos en los que se analizan muestras de suero para detectar la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos, tal como en el documento WO 99/60403. Ademas, hay metodos descritos que indican que la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos en sueros puede estar relacionada con colitis ulcerosa, tal como los descritos en el trabajo de Roozendaal C. et al., Clinical and Experimental Immunology, Oxford, GB, vol. 116, nO 2 (1999-2005) , paginas 206-213 y Database Biosis [en lfnea] Biosciences Information Service, Filadelfia, PA, US: 2002 Lecis Pierrenrico et al.: "[p-ANCA and ASCA antibodies and the differential diagnosis between ulcerative colitis and Crohn's desease]".

El documento EP 0615129 describe metodos y kits para detectar la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos para diagnosticar colitis ulcerosa en suero y tambien analiza el suero de pacientes para detectar la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos.

El documento US 5.932.429 describe un metodo para diagnosticar un subtipo clfnico de la enfermedad de Crohn determinando si el anticuerpo antineutrófilo perinuclear (pANCA, por sus siglas en ingles) esta presente en un paciente con enfermedad de Crohn obteniendo una muestra de suero de un paciente con enfermedad de Crohn.

En Med. Microbiol. vol. 39 (1993) , 408-415, C. A. Siddons y P. A. Chapman describen un estudio en el que el objetivo era comparar metodos para la detección de suero y anticuerpos fecales en colitis hemorragica (CH) producida por infección adquirida por cepas de E. coli que producen verocitotoxina.

Por consiguiente, persiste una necesidad en la industria del diagnóstico para un metodo no invasivo de diagnosticar diferencialmente la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn u otras enfermedades gastrointestinales.

Sumario de la invención Por consiguiente, se crean metodos no invasivos para diferenciar entre diagnósticos de colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn.

En particular, la presente invención se refiere a un metodo de analizar una muestra fecal para ayudar en la diferenciación de la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn como se reivindica mas adelante en esta. Las realizaciones preferidas de la invención se exponen en las reivindicaciones dependientes.

Tambien se describen metodos para diferenciar entre colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn en los que la presencia de ANCA fecales se usa como un marcador para la colitis ulcerosa.

Se describen inmunoensayos, e. g., inmunoensayos ligados a enzimas, que utilizan anticuerpos específicos para las inmunoglobulinas humanas para la medida de ANCA end6genos totales en heces humanas.

Tambien se describen metodos que diagnostican diferencialmente la colitis ulcerosa de otras enfermedades gastrointestinales, tales como el sfndrome del intestino irritable (SII) . Aun en otro de sus aspectos, la presente invención crea metodos para diagnosticar la colitis ulcerosa en los que la presencia de ANCA se usa como un marcador para la colitis ulcerosa, segun las reivindicaciones.

Segun la presente invención, los anteriores aspectos se consiguen mediante un metodo no invasivo para ayudar en la diferenciación de la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn en un paciente que se presente con EII. En el metodo de la presente invención, se usan ANCA fecales como un marcador y la presencia de ANCA indica un diagnóstico diferencial de la colitis ulcerosa. Este diagnóstico rapido se puede usar entonces por los profesionales de la atención sanitaria para prescribir el tratamiento apropiado.

Aspectos de la presente invención tambien se consiguen mediante inmunoensayos que utilizan anticuerpos específicos para las inmunoglobulinas humanas para la medida de ANCA end6genos totales en heces humanas.

Aspectos adicionales de la invención, junto con las ventajas y nuevas caracterfsticas accesorias a ellas, se expondran en parte en la descripción que sigue y en parte seran evidentes para los expertos en la tecnica tras el examen de lo siguiente o se pueden aprender de la practica de la invención. Los objetos y ventajas de la invención se pueden realizar y alcanzar por los medios, mediación y combinaciones particularmente senaladas en las reivindicaciones adjuntas.

Breve descripción de la vista del dibujo La Fig. 1 es una representación grafica de una curva patrón de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos de acuerdo con una realización de la presente invención.

Descripción detallada de la invención La presente invención se dirige a metodos no invasivos para diferenciar entre colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn usando la presencia de ANCA fecales como indicador de la colitis ulcerosa. Se describe un metodo para diferenciar entre colitis ulcerosa y otras enfermedades gastrointestinales tales como SII. Se describen inmunoensayos que utilizan anticuerpos específicos para las inmunoglobulinas humanas para la medida de ANCA end6genos totales en heces humanas. Las realizaciones particulares descritas en esta invención tienen la intención, a todos los respectos, de ser ilustrativas mas bien que restrictivas.

Se pueden usar inmunoensayos específicos de ANCA para diferenciar la colitis ulcerosa y la colitis indeterminada de la enfermedad de Crohn mediante la medida de la presencia de ANCA end6genos totales. Ademas de materia fecal, se puede analizar una muestra de sangre entera, suero, plasma u otro fluido o tejido corporal para detectar ANCA para diagnosticar colitis ulcerosa. Este diagnóstico diferencial se puede usar entonces por los profesionales de la atención sanitaria para determinar el tratamiento óptimo. Un inmunoensayo cualitativo, tal como una tira reactiva de flujo lateral, que utiliza anticuerpos tanto monoclonales como policlonales para ANCA humanos end6genos para indicar la presencia de colitis ulcerosa.

En el inmunoensayo cualitativo, la muestra fecal o corporal se diluye 10 veces y se anade a un pocillo que contiene antfgenos neutrófilos inmovilizados. Si estan presentes ANCA fecales end6genos, se uniran a los antfgenos neutrófilos durante una etapa de incubación a 37"C. A continuación de la incubación, se anaden anticuerpos para inmunoglobulina humana polivalentes acoplados a una enzima, tal como enzima peroxidasa de rabano picante, (conjugados) , y se dejan que se unan a los ANCA capturados. El conjugado no unido se lava despues del pocillo y se anade un sustrato componente (e. g., tetrametilbencideno y peróxido de hidr6geno) para el desarrollo del color. A continuación de la incubación del sustrato, se anade acido sulfurico 0, 1... [Seguir leyendo]

1. Un metodo para analizar una muestra fecal para ayudar en la diferenciación de la colitis ulcerosa de la enfermedad de Crohn en una persona que se presenta con enfermedad inflamatoria intestinalº comprendiendo el metodo: diluir una muestra fecal obtenida de una personaº determinar la presencia de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos en la muestra tal que se pueda concluir un diagnóstico de colitis ulcerosa.

2. El metodo como se expone en la reivindicación 1, que comprende ademas poner en contacto la muestra con antfgenos citoplasmaticos neutrófilos para crear una muestra tratada, poner en contacto la muestra tratada con anticuerpos polivalentes para la inmunoglobulina humana para crear una muestra legible y determinar una densidad óptica de la muestra legible a 450 nm, en el que la densidad óptica corresponde a un nivel de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos end6genos en la muestra y proporciona una medida de los ANCA end6genos totales en la muestra tal que se pueda concluir un diagnóstico de colitis ulcerosa.

3. El metodo como se expone en la reivindicación 1, que comprende ademas: poner en contacto la muestra con antfgenos citoplasmaticos neutrófilos para crear una muestra tratada.

4. El metodo como se expone en la reivindicación 3, que comprende ademas: poner en contacto la muestra con 15 anticuerpos polivalentes para la inmunoglobulina humana para crear una muestra legible.

5. El metodo como se expone en la reivindicación 4, que comprende ademas: determinar una densidad óptica de la muestra legible a 450 nm, en el que la densidad óptica corresponde a un nivel de anticuerpos citoplasmaticos antineutrófilos end6genos en la muestra.