Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico o el pronóstico del cáncer colorrectal.

La presente invención se encuadra dentro del campo de la biomedicina. Específicamente, se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, el pronóstico o la monitorización de la evolución de un cáncer colorrectal (CCR), a un método de diagnóstico de un CCR, a un método de pronóstico de un CCR ya un kit para llevar a cabo dichos métodos.

Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico o el pronóstico del cáncer colorrectal.

La presente invención se encuadra dentro del campo de la biomedicina. Específicamente, se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, el pronóstico o la monitorización de la evolución de un cáncer colorrectal (CCR), a un método de diagnóstico de un CCR, a un método de pronóstico de un CCR y a un kit para llevar a cabo dichos métodos.

Estado de la técnica anterior

El cáncer colorrectal (CCR) es el segundo cáncer más prevalente en el mundo occidental. El desarrollo de la enfermedad se produce durante décadas e involucra múltiples eventos genéticos. A pesar de que el CCR es uno de los tumores sólidos mejor caracterizados desde un punto de vista genético sigue siendo una de las principales causas de mortalidad en países desarrollados por el diagnóstico tardío de los pacientes debido al tiempo de espera que transcurre para realizar ciertas pruebas diagnósticas, como la colonoscopia.

Hoy en día, existen pocas proteínas que hayan sido descritas como biomarcadores eficaces de CCR (antígeno carcinoembrionario (CEA), CA19.9 y CA125) (Crawford et al. 2003. Journal of surgical oncology 84 (4), 239-248; Duffy et al. 2007 Eur J Cancer 43 (9), 1348-1360) y no son lo suficiente específicas para screenings clínicos con vistas a detectar CCR (Locker et al. 2006. J Clin Oncol 24 (33), 5313-5327).

Los análisis proteómicos están siendo activamente utilizados para la identificación de nuevos biomarcadores. En diferentes estudios proteómicos previos se han identificado mediante el uso de microarrays de anticuerpos y 2D-DIGE proteínas diferencialmente expresadas en tejido de CCR, incluyendo isoformas y modificaciones posttranslacionales responsables de modificaciones en rutas de señalización (Alfonso et al. 2005. Proteomics 5 (10), 2602-2611; Kopf et al. 2005. Proteomics 5(9), 2412-2416; Madoz-Gurpide et al. 2007. Mol Cell Proteomics 6 (12), 2150-2164; Alfonso et al. 2008. Journal of proteome research 7 (10), 4247-4255). Estas dos aproximaciones permitieron la identificación de una amplia colección de potenciales marcadores tumorales de tejido de CCR que actualmente están siendo investigados.

Sin embargo, la implementación de métodos diagnósticos no invasivos y más simples que permitan la detección temprana del CCR debería basarse en la identificación de proteínas o anticuerpos detectables en el suero o el plasma (Hanash et al. 2008. Nature 452 (7187), 571-579; Hudson et al. 2007. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of América 104 (44), 17494-17499). La existencia de una respuesta inmune a cáncer en humanos se ha demostrado por la presencia de autoanticuerpos en el suero de pacientes con cáncer. Así, diferentes proteínas humanas (autoantígenos) se pueden ver afectadas antes o durante la formación del tumor pudiendo producir una respuesta inmune una vez liberadas (Hudson et al. 2007. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of América 104 (44), 17494-17499; Wang et al. 2005. The New England journal of medicine 353 (12), 1224-1235; Sreekumar et al. 2004. J Natl Cancer Inst 96 (11), 834-843). Dichos autoanticuerpos se pueden detectar en estadios tempranos de la enfermedad e incluso antes de que el cáncer pueda ser detectado mediante otras técnicas indicando su elevado potencial como biomarcadores de la enfermedad (). Estas proteínas tumorales pueden verse afectadas por mutaciones puntuales, tener un plegamiento anómalo, sobreexpresión, glicosilación aberrante, estar truncadas o bien, sufrir una degradación aberrante como es el caso de p53, HER2, NY-ESO1 o MUC1, respectivamente (Chen et al. 1997. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of América 94 (5), 1914-1918; Schubert et al. 2000. Nature 404 (6779), 770-774; Ulanet et al. 2003. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of América 100 (21), 12361-12366). De hecho, autoantígenos asociados a tumores (AATs) han sido previamente caracterizados en cáncer CCR utilizando otras aproximaciones (Scanlan et al. 1998. International Journal of cancer 76 (5), 652-658). No obstante, la validez diagnóstica de los autoanticuerpos asociados con CCR identificados hasta la fecha requiere aún de una validación independiente para su uso generalizado en el diagnóstico/pronóstico del CCR.

Existe, por tanto, la necesidad de disponer de biomarcadores que permitan el diagnóstico del CCR, su clasificación en los diferentes estadios de la progresión tumoral, el pronóstico de la evolución de la enfermedad, la evaluación de su respuesta a un determinado tratamiento y la detección de la recurrencia o la diseminación del CCR, mediante un método sencillo, eficaz y no invasivo.

Explicación de la invención

La presente invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, el pronóstico o la monitorización de la evolución de cáncer colorrectal (CCR), a un método de diagnóstico de CCR, a un método de pronóstico de CCR y a un kit para llevar a cabo dichos métodos.

La presente invención proporciona, por tanto, una respuesta a la necesidad de disponer de biomarcadores que permitan el diagnóstico del CCR, su clasificación en los diferentes estadios de la progresión tumoral, el pronóstico de la evolución de la enfermedad, la evaluación de su respuesta a un determinado tratamiento y la detección de la recurrencia o la diseminación del CCR, mediante un método sencillo, eficaz y no invasivo.

La sangre es normalmente el fluido biológico óptimo basado en métodos no invasivos para el screening masivo con fines diagnósticos de grandes poblaciones de pacientes. Por un lado, el suero y el plasma son fáciles de obtener y por otra parte, la circulación sanguínea facilita el contacto de la sangre con todos los tejidos del cuerpo humano, incluyendo en el caso de pacientes con cáncer el contacto con tejido tumoral y sus antígenos representativos. La liberación de estos antígenos asociados a tumor probablemente ocurre a muy baja concentración en plasma y probablemente sufren proteólisis en un corto periodo de tiempo. Por el contrario, los anticuerpos son moléculas muy estables y que han sido usadas durante años en diferentes inmunoensayos en clínica, lo cual facilita la estandarización de los ensayos. El uso de los autoanticuerpos es también beneficioso en el sentido que el sistema inmune amplifica la respuesta facilitando su identificación y cuantificación.

En la presente invención se ha examinado el suero de pacientes con CCR y sueros control con el fin de identificar una firma de autoanticuerpos producidos por los pacientes en respuesta a CCR y sus respectivas proteínas reactivas. Sueros de pacientes de CCR y sueros de pacientes control se testaron utilizando microarrays de proteínas de alta densidad. Los microarrays de proteínas ofrecen una serie de ventajas con respecto a otras aproximaciones empleadas para la identificación de ATTs: i) las proteínas impresas en el array son conocidas a priori evitando una posterior identificación y eliminando la posible selección de mimótopos y ii) no hay predisposición a seleccionar ninguna proteína ya que todas ellas se imprimen a una concentración similar. Esta combinación de factores resulta en una elevada sensibilidad para la identificación de biomarcadores.

La firma de autoanticuerpos identificada permitió diferenciar entre sueros de pacientes control y con cáncer. En total, 43 proteínas se reconocían diferencialmente por los sueros de pacientes con CCR y los sueros de referencia (p valor <0,04) en el array de proteínas. La combinación de los 6 mejores antígenos inmunoreactivos: Pim1, MAPKAPK3, STK4, SRC, FGFR4 y ACVR2B fue capaz de detectar el CCR con un 100% de especificidad y sensibilidad usando los datos obtenidos del array de proteínas. Los niveles de expresión aumentados o disminuidos de dichas proteínas se confirmaron mediante inmunodetección en membrana e inmunohistoquímica utilizando tanto líneas celulares y tejido tumoral de CCR como microarrays de tejido.

Finalmente, el predictor formado por las proteínas purificadas Pim1, MAPKAPK3 y ACVR2B se testó mediante ELISA utilizando sueros de pacientes y sueros control. El ELISA es una técnica sensible, sencilla, rápida y económica, por lo que es una de las más empleadas... [Seguir leyendo]

1. Uso de los autoanticuerpos frente a, al menos, una de las proteínas seleccionada de la lista que comprende: Pim1, SRC, MAPKAPK3, FGFR4, STK4 o ACVR2B, como marcador de cáncer colorrectal.

2. Uso de los autoanticuerpos según la reivindicación 1, donde los autoanticuerpos son inmunoglobulinas G.

3. Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico, el pronóstico o el seguimiento de la evolución del cáncer colorrectal que comprende: