MEDIO DE CULTIVO PARA LA PRODUCCIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS.

Medio de cultivo para hongos filamentosos que comprende 60-65% de molasas,

10-15% de sacarosa, 10-15% de licor de maíz macerado y 10-15% de extracto de levadura

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2005/001262.

Solicitante: UREA CASALE S.A..

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: VIA GIULIO POCOBELLI, 6 6900 LUGANO-BESSO SUIZA.

Inventor/es: PANCHAUD-MIRABEL,ELISABETH.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 8 de Febrero de 2005.

Clasificación PCT:

  • C12N1/14 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › Microorganismos fúngicos (cultivo de setas A01G 1/04; como novedades vegetales A01H 15/00 ); Sus medios de cultivo.

Clasificación antigua:

  • C12N1/14 C12N 1/00 […] › Microorganismos fúngicos (cultivo de setas A01G 1/04; como novedades vegetales A01H 15/00 ); Sus medios de cultivo.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania.

PDF original: ES-2375200_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Medio de cultivo para la producción de hongos filamentosos Campo de la solicitud La presente invención se refiere al campo técnico de los agentes fitosanitarios. En particular, la invención se refiere a un medio de cultivo para hongos filamentosos, más específicamente de hongos nematófagos. Técnica anterior El uso de microorganismos y en particular de los hongos como agentes fitosanotarios constituye una práctica cada vez más común. Los productos a base de hongos ya están comercializados para la lucha contra insectos, hongos fitopatógenos y otros parásitos habituales de los cultivos agrícolas. 20 Por ejemplo, en la patente US 5 811 092 se describen unos agentes nematófagos para la lucha contra los nematodos del género Meloidogyne, Hetherodera y Ditylenchus, que consisten en unas cepas particulares de Arthprobotrys conoides Dreschesler, un hongo filamentoso. Los nematodos citados anteriormente son responsables de patologías vegetales y fúngicas graves y pueden causar grandes pérdidas económicas, puesto que hacen que el 50-70% de la cosecha se vea comprometida. El uso de hongos nematófagos, como alternativa a los productos antiparasitarios químicos convencionales (por ejemplo, bromuro de metilo, tricloronitrometano, dicloropropeno, etc.) para su aplicación en el suelo antes de la siembra o bien los carbamatos aplicados directamente a los cultivos, permite evitar problemas graves como son la esterilización del suelo, la destrucción del equilibrio ecológico y la toxicidad potencial para el hombre y para los animales. De este modo, los hongos nematófagos resultan particularmente adecuados para su uso en los cultivos orgánicos pero todavía tienen un coste bastante elevado, debido a las dificultades para producirlos industrialmente con unos rendimientos elevados. Existe, por consiguiente, una necesidad de que los hongos nematófagos estén disponibles a un coste más económico para el uso en la agricultura. 40 Bastos (Bastos CN, Summa Phytopathologica, volume 27, pages 73-77, November 2000) estudió el cultivo de hongos nematófagos de la especie Trichoderma nov. Sp y evaluó la formación de conidios en varios medios de cultivo. El problema de base de la presente invención era proporcionar un medio de cultivo de hongos filamentosos y en 45 particular para hongos nematófagos, que permita que dichos microorganismos se produzcan a nivel industrial con unos rendimientos elevados y en periodos cortos de tiempo, con la consecuente disminución en el coste del producto final.   Sumario de la invención Este problema se resolvió, según la invención, mediante un medio de cultivo para hongos filamentosos que comprende 60-65% de molasas, 10-15% de sacarosa, 10-15% de licor de maíz macerado y 10-15% de extracto de levadura. Ventajosamente, dicho medio de cultivo contiene, además del 5 al 8% de una fuente de nitrógeno mineral, en particular fosfato de hidrógeno diamónico. Descripción detallada de la invención La presente invención se describirá con mayor detalle haciendo referencia a los ejemplos de formas de realización 2 E05707264 09-01-2012 proporcionados con fines ilustrativos y no con fines limitativos Antes de proceder con la ilustración de los ejemplos, consideramos que es útil proporcionar algunas definiciones relacionadas con los componentes del medio de cultivo según la invención. Las molasas y la sacarosa se utilizan como fuentes de carbono. Las molasas constituyen un producto secundario de la industria azucarera y se encuentran en forma de líquido viscoso de un color negro-marrón, que contiene 10% de agua, 35% de sacarosa, 20% de otros azúcares y 15% de ceniza. El extracto de levadura y el licor de maíz macerado se usan como fuentes de nitrógeno orgánico. El extracto de levadura se obtiene por autolisis de Saccharomyces cerevisiae y se encuentra en forma de polvo fino 15 de color amarillo claro, fácilmente soluble en agua. El extracto de levadura contiene péptidos, aminoácidos libres, bases de purina y pirimidina así como vitaminadas hidrosolubles del grupo B. El extracto de levadura presenta un contenido total de nitrógeno del 10% y un contenido de nitrógeno -amínico del 5%. El licor de maíz macerado se obtiene mediante la maceración de los granos de maíz a una temperatura de 50 ºC 20 durante 24-48 horas en agua que contiene dióxido de sulfuro. Este reactivo permite que la matriz proteica que envuelve los granos de almidón se destruya y ofrece la ventaja de evitar el desarrollo de microorganismos indeseables durante la maceración. El licor de maíz macerado presenta un contenido total de nitrógeno del 7 % y un contenido de nitrógeno -amínico del 1,7% y también contiene 5% de azúcares, 4% de potasio, 3% de fósforo y 17% de diferentes minerales. Se han probado varios medios de cultivo a base de las fuentes de carbono y nitrógeno mencionadas anteriormente. El contenido en porcentaje de la fuente de nitrógeno orgánico del medio según la invención se puede reducir, sustituyendo parte de dicha fuente de nitrógeno orgánico por una fuente de nitrógeno inorgánico (nitratos de amonio o compuestos) que se añaden gradualmente y en pequeñas cantidades durante el cultivo. Esta adición de nitrógeno inorgánico durante el cultivo permite una nutrición mejor de los microorganismos, en el caso de los hongos filamentosos, estiramiento de los filamentos miceliales. 35 La sustitución de parte de la fuente de nitrógeno orgánico por una fuente de nitrógeno inorgánico también presenta la ventaja de reducir costes de producción, puesto que las fuentes de nitrógeno orgánico (extracto de levadura y licor de maíz macerado) constituyen los componentes más caros del medio de cultivo según la invención. El medio de cultivo según la invención resulta particularmente adecuado para su uso en la producción de hongos 40 filamentosos de la familia Moniliales. En particular, en los ejemplos indicados a continuación, se utilizan hongos filamentosos de Arthprobotrys conoides Dreschesler.   EJEMPLO 1 El cultivo de los hongos filamentosos se realizó en un recipiente Erlen de 300 ml, que contiene 150 ml de medio de cultivo. El medio consiste en 25 gr/l de molasas, 5 gr/l de de sacarosa, 5 gr/l de licor de maíz macerado y 5 gr/l de extracto de levadura y se esterilizó antes del cultivo con los conidios del hongo en cuestión. El cultivo se incubó durante 6 días desde la siembra a una temperatura de aproximadamente 27ºC. A partir del tercer día, se tomaron muestras del medio de cultivo para determinar la masa seca (gr/l) y el número de 55 propágulos (UFC/l). Para determinar la masa seca, se filtran 20 ml de medio de cultivo y después se secan en una estufa a una temperatura de 100 ºC durante 24 horas, El número de propágulos se determinó en 1 ml de medio de cultivo. En la tabla 3 se muestra un resumen de los resultados obtenidos, tal como sigue. 3 E05707264 09-01-2012 EJEMPLO 2 Tabla 3 Día pH Masa seca (gr/l) UFC /l 5,07 0,00 3 4,87 1,58 3,12 x 10 7 4 4,20 3,82 1,40 x 10 8 6,46 6,76 1,30 x 10 9 6 6,98 9,995 3,65 x 10 9 5 El ensayo llevado a cabo en el Ejemplo 1 se repitió en un minireactor de 2 litros como se describe en el Ejemplo 2, que contiene 1,2 litros del medio de cultivo como en el Ejemplo 1. Las condiciones experimentales fueron las mismas que en el ejemplo 1, con la única diferencia que el muestreo se inició el día después de la siembra de los conidios. En la tabla 1 se muestra un resumen de los resultados obtenidos, tal como sigue. Tabla 1 Día pH Masa seca (gr/l) UFC /l 5,07 0,00 1 5,04 2,675 9,90 x 10 7 2 5,01 3,9 3,00 x 10 8 3 5,44 5,125 5,00 x 10 8 4 6,11 8,295 8,20 x 10 8 6,69 2,75 1,07 x 10 9 6 7,32 3,485 2,10 x 10 9 7 7,65 10,164 3,77 x 10 9 Los resultados que se muestran a partir del quinto día en adelante pueden parecer anómalos pero esto sólo es debido a una concentración excesiva de hongos en el medio de cultivo, lo que hace que no sea posible tomar más muestras homogéneas. La última muestra se tomó directamente del reactor. En este caso, en siete días, se obtuvieron más de 10 gramos de hongo por litro de medio de cultivo con un propágulo de 3,77 x 10 9 . EJEMPLO 7 25 El medio de cultivo del ejemplo 1 se modificó como sigue, de modo que se reduce el contenido de las dos fuentes de nitrógeno orgánico, que constituyen los componentes más caros:   25 gr/l molasas; 5 gr/l de sacarosa; 2,5 gr/l de licor de maíz macerado; 2,5 gr/l de extracto de levadura, Con este medio de cultivo, se llevó a cabo un ensayo de cultivo (A), que utiliza los hongos mencionados anteriormente, para comparar con otras dos ensayos de cultivo (B y C), en os que se utilizó el mismo medio de cultivo y en el que se realizaron adiciones posteriores de una fuente de nitrógeno mineral desde el cuarto día hacia delante. En el ensayo B, se añadieron tres veces 0,21 gr de fosfato de hidrógeno diamónico a partir del cuarto día (más específicamente... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Medio de cultivo para hongos filamentosos que comprende 60-65% de molasas, 10-15% de sacarosa, 10-15% de licor de maíz macerado y 10-15% de extracto de levadura. 2. Medio de cultivo según la reivindicación 2, que comprende además del 5 al 8% de una fuente de nitrógeno mineral. 3. Medio de cultivo según la invención 2, en el que dicha fuente de nitrógeno mineral consiste en fosfato de hidrógeno diamónico. 4. Procedimiento para la producción de hongos filamentosos, en particular hongos nematófagos, a escala industrial, que comprende la etapa de siembra de los conidios de dicho hongo en un medio de cultivo según la reivindicación 1 y el mantenimiento de dicho cultivo a una temperatura de 23-30 ºC durante un periodo de 5 -10 días para determinar la reproducción y el crecimiento del hongo. 6 E05707264 09-01-2012

 

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