Uso de la presencia o de una cantidad del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa,

o anticuerpos contra dicha proteína, como marcador para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal.

Marcadores del rechazo de trasplante de riñón y daño renal

Campo de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos para la detección del rechazo al trasplante de riñón y otras formas de daño renal.

Antecedentes de la invención

El rechazo del aloinjerto constituye el impedimento principal para el éxito del trasplante de riñón. Actualmente el rechazo crónico es la causa más prevalente de fallo del trasplante de riñón. Clínicamente, el rechazo crónico se presenta mediante la disfunción crónica del trasplante, caracterizado por una lenta pérdida de la función, a menudo en combinación con proteinuria e hipertensión. El rechazo crónico se desarrolla en injertos que experimentan daño intermitente o persistente por las respuestas celulares y humorales que resultan del reconocimiento indirecto de los aloantígenos. La opción más eficaz para evitar el fallo renal por rechazo crónico es evitar la lesión del injerto tanto por mecanismos inmunitarios como no inmunitarios junto con la inmunosupresión de mantenimiento no nefrotóxica. Los procedimientos diagnósticos disponibles en la actualidad, incluyendo la presentación clínica y los parámetros bioquímicos de la función orgánica, a menudo no consiguen detectar el rechazo hasta las fases de progresión tardías.

Resumen de la invención

Los inventores han identificado biomarcadores para la detección del rechazo de aloinjerto renal y otras formas de daño renal. La invención se refiere al diagnóstico y tratamiento del daño renal, incluyendo el rechazo de aloinjerto en trasplante de riñón, usando estos biomarcadores. El uso de los biomarcadores incluye el uso o la detección de las proteínas identificadas o sus fragmentos, ácidos nucleicos que codifican dichas proteínas o sus partes complementarias, y anticuerpos que se unen a dichas proteínas.

Así, la invención proporciona el uso de la presencia o de una cantidad de precursor de la Nacetilmuramoil-L-alanina amidasa o uno de sus fragmentos, o anticuerpos contra dichas proteínas, o ácidos nucleicos que codifican dicha proteína o sus fragmentos, como marcador para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal. También se proporciona un procedimiento para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal, el procedimiento que comprende la determinación de la presencia o de una cantidad de precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o uno de sus fragmentos, o anticuerpos contra dicha proteína, o ácidos nucleicos que codifican dicha proteína o sus fragmentos en una muestra procedente de un paciente.

También se proporciona el uso del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa o uno de sus fragmentos, un anticuerpo contra dicha proteína, un ácido nucleico que codifica dicha proteína o uno de sus fragmentos, o un ácido nucleico que es el complemento de un ácido nucleico que codifica dicha proteína o uno de sus fragmentos, en un procedimiento de diagnóstico o pronóstico de daño renal.

En algunas formas de realización, el pronóstico y/o diagnóstico es el pronóstico y/o diagnóstico del rechazo crónico que sigue al trasplante de riñón, también conocido como nefropatía crónica del aloinjerto (NCA) . En otras formas de realización, el pronóstico y/o diagnóstico puede ser el pronóstico y/o diagnóstico de daño renal provocado, por ejemplo, por la enfermedad o toxicidad.

En una forma de realización, el procedimiento comprende las etapas de:

(a) la puesta en contacto de una muestra procedente de un paciente con un soporte sólido que presenta inmovilizado sobre él un agente de unión que tiene sitios de unión que son capaces de unirse específicamente a la proteína, anticuerpo o ácido nucleico marcadores con una muestra procedente de un paciente en condiciones en las que la proteína, anticuerpo o ácido nucleico marcadores se unen al agente de unión; y,

(b) la determinación de la presencia o de una cantidad de la proteína, anticuerpo o ácido nucleico marcadores unidos al agente de unión.

La etapa (b) puede comprender (i) la puesta en contacto del soporte sólido con un agente de revelado que sea capaz de unirse a sitios de unión ocupados, sitios de unión no ocupados o la proteína, anticuerpo o ácido nucleico marcadores, el agente de revelado que comprende un marcador químico y (ii) la detección del marcador químico para obtener un valor representativo de la presencia o de una cantidad de la proteína, anticuerpo o ácido nucleico marcadores en la muestra.

El marcador químico puede ser, por ejemplo, un marcador químico radiactivo, un fluoróforo, un fósforo, un colorante láser, un colorante cromógeno, una partícula coloidal macromolecular, una perla de látex que está coloreada, es magnética o paramagnética, una enzima que cataliza una reacción que produce un resultado detectable o el marcador químico es un indicador.

En algunas formas de realización, el agente de unión es el precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o uno de sus fragmentos. En otras formas de realización, el agente de unión es un anticuerpo que es capaz de unirse al precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o a uno de sus fragmentos. En otras formas de realización, el agente de unión puede ser un ácido nucleico que es complementario a la secuencia del ácido nucleico a detectar.

En una forma de realización alternativa, el procedimiento comprende la detección de una proteína marcadora o proteínas marcadoras en una muestra procedente de un paciente usando espectroscopía de masas. Las proteínas de la muestra pueden estar inmovilizadas sobre un soporte sólido. Opcionalmente, las proteínas se pueden someter a digestión proteolítica antes del análisis. Los procedimientos analíticos adecuados incluyen SELDI-TOF y MRM.

En algunas formas de realización, el procedimiento comprende la determinación de la presencia o de una cantidad de una pluralidad de proteínas, anticuerpos o ácidos nucleicos marcadores asociados a daño renal en una sola muestra. Por ejemplo, se pueden inmovilizar una pluralidad de agentes de unión como localizaciones predefinidas sobre el soporte sólido.

También se proporciona un kit para su uso en el diagnóstico o pronóstico de daño renal mediante la determinación de la presencia o de una cantidad de un analito seleccionado de una de las proteínas expuestas en la Tabla 4 o Tabla 5 o uno de sus fragmentos, un anticuerpo contra dicha proteína, y un ácido nucleico que codifica dicha proteína o uno de sus fragmentos, en una muestra procedente de un paciente, el kit que comprende:

(a) un soporte sólido que presenta un agente de unión capaz de unirse al analito inmovilizado sobre él;

(b) un agente de revelado que comprende un marcador químico; y,

(c) uno o más componentes seleccionados del grupo constituido por disoluciones de lavado, diluyentes y tampones. El agente de unión puede ser como se ha definido anteriormente. En particular, para la detección de un anticuerpo, el agente de unión puede ser una de las proteínas expuestas en la Tabla 4 o Tabla 5, o uno de sus fragmentos. Para la detección de una proteína, el agente de unión puede ser un anticuerpo que sea capaz de unirse al precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o a uno de sus fragmentos. Para la detección de un ácido nucleico, el agente de unión puede ser un ácido nucleico que sea complementario a la secuencia del ácido nucleico a detectar.

También se proporciona un kit para su uso en el diagnóstico o pronóstico de daño renal determinando la presencia o cantidad del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, en una muestra procedente de un paciente, el kit que comprende uno o más péptidos MRM, como se describe a continuación, en un formato compatible con el ensayo.

También se proporciona el uso del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o uno de sus fragmentos, o anticuerpos capaces de unirse específicamente a esta proteína, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de daño renal.

Además se proporciona el uso de la presencia o de una cantidad de un ácido nucleico que codifica al precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa o uno de sus fragmentos como marcador para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal.

En una forma de realización, la invención proporciona un procedimiento para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal, el procedimiento que comprende la determinación de la presencia o de una cantidad de un ácido nucleico que... [Seguir leyendo]

1. Uso de la presencia o de una cantidad del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o anticuerpos contra dicha proteína, como marcador para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal.

2. Uso de la presencia o de una cantidad de un ácido nucleico que codifica el precursor de la N-acetilmuramoil-Lalanina amidasa como marcador para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal.

3. Un procedimiento para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal, el procedimiento que comprende la determinación de la presencia o la cantidad del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o anticuerpos contra él, en una muestra procedente de un paciente.

4. Un procedimiento para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal, el procedimiento que comprende la determinación de la presencia o la cantidad de un ácido nucleico que codifica el precursor de la N-acetilmuramoil-Lalanina amidasa, en una muestra procedente de un paciente.

5. El procedimiento de la reivindicación 3 o de la reivindicación 4, donde la muestra es una muestra de tejido renal, una muestra de sangre, una muestra de suero, una muestra de plasma o una muestra de orina.

6. El uso de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2 o el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, donde el daño renal está provocado por un rechazo crónico del trasplante después del trasplante de riñón.

7. El uso o el procedimiento de la reivindicación 6, donde el daño renal está provocado por nefropatía crónica del aloinjerto.

8. El uso de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2 o el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, donde el daño renal está provocado por enfermedad o toxicidad.

9. El uso o el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende adicionalmente la detección de una cualquiera de la adiponectina, el precursor de la proteína AMBP (microglobulina a1) , el precursor de la cadena a de la proteína de unión a C4b, el precursor de la ceruloplasmina, el precursor C3 del complemento, el precursor C9 del componente del complemento, el precursor del factor D del complemento, la glicoproteína a1B, el precursor I de la glicoproteína º2, el precursor del cofactor II de la heparina, la proteína de la región C de la cadena Igμ, el precursor de la glicoproteína a2 rica en leucinas, el precursor del factor pigmentario derivado del epitelio, el precursor de la proteína plasmática de unión al retinol y la subunidad 10 del factor 3 de iniciación de la traducción.

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, donde el procedimiento comprende las etapas de:

(a) puesta en contacto de una muestra procedente de un paciente con un soporte sólido que presenta inmovilizado sobre él un agente de unión que tiene sitios de unión que son capaces de unirse específicamente a la proteína, anticuerpo o ácido nucleico con una muestra procedente de un paciente en condiciones en las que la proteína, anticuerpo o ácido nucleico se unen al agente de unión; y,

(b) la determinación de la presencia o la cantidad de la proteína, anticuerpo o ácido nucleico unido al agente de unión.

11. El procedimiento de la reivindicación 10, donde la etapa (b) comprende (i) la puesta en contacto del soporte sólido con un agente de revelado que es capaz de unirse a los sitios de unión ocupados, sitios de unión no ocupados o la proteína, anticuerpo o ácido nucleico, el agente de revelado que comprende un marcador químico y (ii) la detección del marcador químico para obtener un valor representativo de la presencia o la cantidad de la proteína, anticuerpo o ácido nucleico en la muestra.

12. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, donde el procedimiento comprende la detección de dicha proteína o proteínas marcadoras por espectroscopía de masas.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, donde la proteína está inmovilizada sobre un soporte sólido.

14. Un kit para el uso en el diagnóstico o pronóstico de daño renal mediante la determinación de la presencia o la

cantidad del precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o anticuerpos contra él, o un ácido nucleico que codifica el precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, en una muestra procedente de un paciente, el kit que comprende:

(a) un soporte sólido que presenta un agente de unión capaz de unirse al analito inmovilizado sobre él;

(b) un agente de revelado que comprende un marcador químico; y,

(c) uno o más componentes seleccionados del grupo constituido por disoluciones de lavado, diluyentes y tampones.

15. Un kit según la reivindicación 14 que sirve para el diagnóstico del rechazo crónico de trasplante después de trasplante de riñón.

16. Un kit según la reivindicación 15 que sirve para el diagnóstico de nefropatía crónica del aloinjerto.

17. Un kit según la reivindicación 14 que sirve para el diagnóstico de daño renal provocado por enfermedad o toxicidad.

18. El procedimiento de la reivindicación 11, o el kit de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, donde el marcador químico es un marcador químico radiactivo, un fluoróforo, un fósforo, un colorante láser, un colorante cromógeno, una partícula coloidal macromolecular, una perla de látex que está coloreada, es magnética o paramagnética, una enzima que cataliza una reacción que produce un resultado detectable o el marcador químico es un indicador.

19. El procedimiento de la reivindicación 10, de la reivindicación 11 o de la reivindicación 18, o el kit de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, donde el agente de unión inmovilizado sobre el soporte sólido es el precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o un fragmento del mismo.

20. El procedimiento de la reivindicación 10, de la reivindicación 11 o de la reivindicación 18, o el kit de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, donde el agente de unión inmovilizado sobre el soporte sólido es un anticuerpo capaz de unirse al precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o a un fragmento del mismo.

21. El procedimiento de la reivindicación 10, de la reivindicación 11 o de la reivindicación 18, o el kit de una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, donde el agente de unión inmovilizado sobre el soporte sólido es un ácido nucleico que codifica el precursor de la N-acetilmuramoil-L-alanina amidasa, o un fragmento del mismo.

22. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 10, 11 ó 18, donde el procedimiento comprende la determinación de la presencia o la cantidad de una pluralidad de proteínas marcadoras o anticuerpos asociados al rechazo crónico en una única muestra.

23. El procedimiento de la reivindicación 22, donde el procedimiento emplea una pluralidad de agentes de unión que están inmovilizados en localizaciones predefinidas sobre el soporte sólido.