Métodos de diagnóstico y pronóstico en relación con la enfermedad de Alzheimer.

Un método para ayudar al diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto,

que comprende proporcionar una muestra de un derivado de la sangre, donde dicho derivado de la sangre es suero o plasma, obtenido de dicho sujeto; determinar la cantidad de gelsolina presente en dicha muestra; comparar la cantidad de gelsolina presente en dicha muestra con una cantidad de referencia de gelsolina presente en una muestra de un sujeto sano, donde la detección de un nivel de gelsolina en la muestra de dicho sujeto que sea menor que el nivel de gelsolina en la muestra de referencia, indica una mayor probabilidad de enfermedad de Alzheimer en dicho sujeto.

Métodos de diagnóstico y pronóstico en relación con la enfermedad de Alzheimer

Campo de la invención La presente invención se refiere a métodos y composiciones relacionados con la enfermedad de Alzheimer. En particular, la presente invención proporciona métodos de diagnóstico y medición del pronóstico de la enfermedad de Alzheimer usando proteínas expresadas diferencialmente.

Antecedentes de la invención La enfermedad de Alzheimer (EA) , la causa más común de demencia en las personas mayores, es una enfermedad neurodegenerativa debilitante que actualmente no tiene cura. Destruye las neuronas en partes del cerebro, 15 principalmente en el hipocampo que es una región implicada en la codificación de los recuerdos. La enfermedad de Alzheimer da lugar a una pérdida progresiva e irreversible de las funciones cognitivas y de la autonomía funcional. Los primeros signos de la EA se pueden confundir con simples olvidos, pero en las personas a las que finalmente se les diagnostica la enfermedad, estos signos iniciales inexorablemente evolucionarán hasta síntomas más graves de deterioro mental. Si bien el tiempo que demora la EA en progresar variará de persona a persona, los signos 20 avanzados incluyen deterioro grave de la memoria, confusión, trastornos del lenguaje, cambios de personalidad y comportamiento, y deterioro del juicio. Las personas con enfermedad de Alzheimer pueden volverse hostiles y poco comunicativas. Como la enfermedad termina en demencia profunda, los pacientes son incapaces de cuidar de sí mismos y a menudo requieren institucionalización o atención profesional en su hogar. Aunque algunos pacientes pueden vivir durante años después de habérseles diagnosticado la enfermedad de Alzheimer, la esperanza media de vida después del diagnóstico es de ocho años.

En el pasado, la EA solo podía ser diagnosticada definitivamente por biopsia cerebral o en la autopsia después de la muerte de un paciente. Estos métodos, que demuestran la presencia de las características lesiones de placa y lesiones de ovillo en el cerebro, aún se consideran el estándar de oro para el diagnóstico de la patología de la EA.

Sin embargo, en el escenario clínico raramente se realiza una biopsia de cerebro y el diagnóstico depende de una batería de pruebas neurológicas, psicométricas y bioquímicas, que incluyen la medición de marcadores bioquímicos como las proteínas ApoE y tau o el péptido beta-amiloide en el líquido cefalorraquídeo y la sangre.

Son necesarios mejores biomarcadores para el diagnóstico de la EA y otras demencias. Un marcador biológico que cumpla los requisitos para la prueba de diagnóstico de la EA tendría varias ventajas. Un marcador biológico ideal será aquel que identifique los casos de EA en una etapa muy temprana de la enfermedad, antes de que se observe degeneración en las pruebas de imagenología y neuropatológicas del cerebro. La detección de un biomarcador o un grupo de biomarcadores podría ser el primer indicador para iniciar el tratamiento tan pronto como fuera posible y también de mucho valor para evaluar la eficacia de nuevas terapias, particularmente las que se centran en la prevención de cambios neuropatológicos. Un marcador biológico también sería útil en el seguimiento del avance de la enfermedad.

Los marcadores relacionados con las características patológicas de la EA, como placas y ovillos (Aº y tau) , han sido los más ampliamente estudiados. Los más prometedores han sido los de los estudios de concentración en el LCR de 45 Aº (1-40) , Aº (1-42) y tau, o la combinación de ambas proteínas, en la EA. Muchos estudios han informado de una disminución de Aº (1-42) en el LCR, mientras que la concentración total de proteína Aº o Aº (1-40) permanece inalterada (Ida, Hartmann et al., 1996; Kanai, Matsubara et al., 1998; Andreasen, Hesse et al. 1999) .

Si bien los niveles de Aº y tau en el líquido cefalorraquídeo (LCR) son biomarcadores prometedores para el

diagnóstico de la EA no muestran dicha utilidad de diagnóstico en líquidos corporales más accesibles. El líquido cefalorraquídeo es difícil de obtener de los pacientes humanos. Su extracción implica generalmente una técnica invasiva seria como punción lumbar que se realiza bajo sedación. Este es un procedimiento altamente especializado y complejo, que requiere personal médico calificado y especialmente entrenado. Además, consume tiempo y puede requerir anestesia, así como extensa cooperación del paciente. Por otra parte, la extracción de líquido 55 cefalorraquídeo es un procedimiento incómodo y a menudo doloroso, siendo el dolor de cabeza prolongado un síntoma común, a lo que se suma el riesgo para el paciente de infección y posible parálisis.

A la luz de las limitaciones del líquido cefalorraquídeo como una muestra clínica de rutina, se afirma un considerable interés en el plasma como fuente de biomarcadores para enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de 60 Alzheimer. WO 06/035237 describe estudios proteómicos que identificaron una serie de proteínas expresadas diferencialmente y describe ciertos métodos para el diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer.

Otros estudios se describen en WO 2006/134390, US 2008/206737 y WO 02/46767.

Sin embargo, sigue siendo el caso que los biomarcadores conocidos en el área como asociados a la enfermedad de Alzheimer han tenido un valor pronóstico limitado o insignificante. Aunque el diagnóstico clínico actual de la enfermedad de Alzheimer basado en los síntomas neurológicos generales y en pruebas de función cognitiva imprecisas es razonablemente sólido, sigue siendo un problema describir y en particular predecir la evolución probable de la enfermedad en pacientes vivos. Por lo tanto, el pronóstico, así como el diagnóstico, sigue siendo un problema en el área, en relación con los pacientes vivos.

La presente invención busca superar los problemas asociados al estado anterior de la técnica.

Resumen de la invención En términos generales la divulgación actual apunta a métodos, reactivos y kits para el diagnóstico y el seguimiento del pronóstico de los pacientes que corren riesgo de padecer, o padecen, la enfermedad de Alzheimer. Más específicamente la divulgación actual describe tres marcadores proteicos cuyos niveles plasmáticos varían, donde el

nivel de cada proteína proporciona información sobre un cierto aspecto del riesgo del paciente de padecer la enfermedad, o de la velocidad de avance de una enfermedad de ese tipo. La presente invención se define en las reivindicaciones y se refiere a la determinación del marcador proteico gelsolina.

Se describe un método de determinación de la naturaleza o el grado de avance del deterioro cognitivo en la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano o animal, que comprende detectar el nivel de una proteína expresada diferencialmente, identificada por los métodos descritos en este documento, en una muestra de tejido o líquido corporal de dicho sujeto.

Se describe un método para determinar la edad aproximada de inicio de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano o animal que corre el riesgo de padecer la enfermedad, que comprende detectar el nivel de un marcador proteico expresado diferencialmente, identificado por los métodos descritos en este documento, en una muestra de tejido o líquido corporal de dicho sujeto.

Se describe un método para determinar el riesgo de un individuo de padecer la enfermedad de Alzheimer, que comprende detectar el nivel de un marcador proteico expresado diferencialmente, identificado por los métodos descritos en este documento, en una muestra de tejido o líquido corporal de dicho sujeto.

Se describe un método para predecir y/o seguir la respuesta al tratamiento de un sujeto con EA, que comprende detectar el nivel de un marcador proteico expresado diferencialmente, identificado por los métodos descritos en este documento, en una muestra de tejido o líquido corporal de dicho sujeto. En este contexto se entiende que el sujeto puede ser un sujeto humano o no humano. Los sujetos no humanos incluyen modelos no vertebrados y vertebrados de la EA por ejemplo modelos de amplificación de genes, knockdown de genes (reducción de su expresión) y transgénicos.

En ciertas realizaciones es preferible medir los niveles del biomarcador de la presente invención en muestras para diagnóstico tomadas en serie del mismo paciente. Los cambios en el tiempo en los niveles de los biomarcadores pueden proporcionar información adicional, clínicamente útil, en cuanto a la aparición, la velocidad constante de avance o la respuesta del paciente al tratamiento para la EA.

Se describen reactivos y kits útiles en la realización de los métodos.... [Seguir leyendo]

1. Un método para ayudar al diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto, que comprende proporcionar una muestra de un derivado de la sangre, donde dicho derivado de la sangre es suero o plasma, obtenido de dicho sujeto; determinar la cantidad de gelsolina presente en dicha muestra; comparar la cantidad de gelsolina presente en dicha muestra con una cantidad de referencia de gelsolina presente en una muestra de un sujeto sano, donde la detección de un nivel de gelsolina en la muestra de dicho sujeto que sea menor que el nivel de gelsolina en la muestra de referencia, indica una mayor probabilidad de enfermedad de Alzheimer en dicho sujeto.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 donde dicha muestra consiste en plasma sanguíneo.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2 donde a dicho plasma sanguíneo se le puede reducir al mínimo el contenido de una o más de las proteínas siguientes: albúmina; transferrina; IgG; IgA; antitripsina o haptoglobina.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 3, donde a dicho plasma sanguíneo se le puede reducir al mínimo el contenido de cada una de: albúmina; transferrina; IgG; IgA; antitripsina o haptoglobina.

5. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde la proteína se detecta por inmunotransferencia tipo western.

6. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde la proteína se detecta mediante arreglo de microesferas en suspensión.

7. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde la proteína se detecta mediante arreglo planar.

8. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde la proteína se detecta por etiquetado isobárico de proteínas o por etiquetado isotópico de proteínas.

9. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o la reivindicación 8 donde la proteína se detecta por un análisis que utiliza un espectrómetro de masas.

10. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, u 8 o 9 donde la proteína gelsolina se detecta por referencia a uno o más de los péptidos siguientes de la tabla B: SEC. ID Nº: 30, SEC. ID Nº: 31, SEC. ID Nº: 32.