La proteina Anosmina-1 como biomarcador para la clasificación histopatológica de lesiones de un sujeto con enfermedad desmielinizante del Sistema Nervioso Central.

La proteína Anosmina-1 como biomarcador para la clasificación histopatológica de lesiones de un sujeto con enfermedad desmielinizante del Sistema Nervioso Central.

Uso de las proteínas FGF-2 y Anosmina-1 para predecir la histopatología de las lesiones de un sujeto con una enfermedad desmielinizante del Sistema Nervioso Central (SNC) mediante la detección de la cantidad de dichas proteínas en una muestra de fluido biológico aislado. Además, la presente invención se refiere a un método para conocer las características histopatológicas de las lesiones de un sujeto con una enfermedad desmielinizante del SNC a un kit para llevar a cabo dicho método. Preferiblemente, la enfermedad desmielinizante del SNC es la esclerosis múltiple, y el fluido biológico es líquido cefalorraquídeo (LCR).

La proteína Anosmina-1 como biomarcador para la clasificación histopatológica de lesiones de un sujeto con enfermedad desmielinizante del Sistema Nervioso Central.

La presente invención se encuadra dentro del campo de la biomedicina. Específicamente, se refiere al uso de las proteínas FGF-2 y Anosmina-1 para predecir la histopatología de las lesiones de un sujeto con una enfermedad desmielinizante del Sistema Nervioso Central (SNC) mediante la detección de la cantidad de dicha proteína en una muestra de fluido biológico aislado. Además, la presente invención se refiere a un método para conocer las características histopatológicas de las lesiones de un sujeto con una enfermedad desmielinizante del SNC a un kit para llevar a cabo dicho método. Preferiblemente, la enfermedad desmielinizante del SNC es la esclerosis múltiple, y el fluido biológico es líquido cefalorraquídeo (LCR) .

Estado de la técnica anterior

Las enfermedades desmielinizantes son un grave problema clínico y social. Se trata de un conjunto de enfermedades neurológicas en las que, por diversas causas, se daña la vaina de mielina que recubre los axones de las neuronas, que actúa protegiendo y facilitando la conducción del impulso nervioso. La más importante de estas enfermedades es la esclerosis múltiple.

En muchos casos, la esclerosis múltiple comienza como una enfermedad que cursa con brotes (o fases agudas) en los cuales se experimentan las alteraciones neurológicas típicas de esta enfermedad. Cada brote se sigue de una fase de remisión tras la que el paciente puede quedar, o no, con secuelas que producen distinto grado de afectación. En la mayor parte de los casos, tras una fase de la esclerosis múltiple en brotes, la enfermedad deriva hacia una forma secundaria progresiva en el que el paciente experimenta los déficits neurológicos de manera continuada, aumenta la discapacidad de manera continua y progresiva (cfr. Confavreux y cols., N. Eng. J. Med. 2000, vol. 343, pp. 14301438) .

En el caso de la esclerosis múltiple, los oligodendrocitos, células productoras de la mielina en el SNC, mueren en las zonas de lesión, también conocidas como placas de desmielinización. Los oligodendrocitos se originan durante el desarrollo pre-y postnatal a partir de precursores oligodendrogliales, células que también existen en el cerebro adulto de todos los mamíferos. En respuesta a una lesión, los precursores de oligodendrocitos se movilizan hacia la zona del cerebro lesionada, aunque, dependiendo de la fase de evolución de la lesión pueden entrar dentro de la misma y reparar las vainas de mielina o no (cfr. Wolswijk, J. Neurosci. 1998, vol. 18, pp. 601-609; Chang y cols., J. Neurosci. 2000, vol. 20, pp. 6404-6412; Chang y cols., N. Engl. J. Med. 2002, vol. 346, pp. 165-173; Reynolds y cols., J. Neurocytol. 2002, vol. 31, pp. 523-536; Chandran y cols., Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008, vol. 363, pp. 171-183) .

En los últimos años, las terapias existentes para paliar (que no curar) la esclerosis múltiple, tratan de rebajar el nivel de inflamación existente en el SNC, pero no están encaminadas a la movilización de los precursores de oligodendrocitos hacia el área a reparar. Por ello, la terapia celular, bien con células madre, con células mesenquimales

o con los propios precursores de oligodendrocitos, es un futuro esperanzador para el tratamiento de la esclerosis múltiple. Por tanto, es muy importante conocer en cada paciente de esclerosis múltiple el balance entre las lesiones en las que la remielinización es posible y aquellas en que no lo es a la hora de elegir el tipo de tratamiento (mitigador de los efectos inflamatorios versus terapia celular reparadora) .

Las lesiones desmielinizantes que se observan en el SNC de un paciente de esclerosis múltiple se pueden clasificar histopatológicamente en tres tipos atendiendo a la distribución de las células destructoras de la mielina (linfocitos, macrófagos y microglía) y con el grado de destrucción de la mielina (cfr. Trapp y cols., J. Neuroimmunol., 1999, vol. 98, pp. 49-56; Benito y cols., J. Neurosci., 2007, vol. 27, pp. 2396-2402) :

1. Lesiones activas: lesiones en las que la desmielinización puede ser completa o incompleta y cuyo interior está lleno de células destructoras de la mielina, distribuidas de manera homogénea por toda el área de lesión. En estas lesiones, la remielinización es posible, presentan precursores de oligodendrocitos en su interior (pueden, por tanto, entrar) y son consideradas desde un punto de vista cronológico como las primeras en aparecer.

2. Lesiones crónicas: lesiones en las que la desmielinización es completa, cuyo interior está desprovisto de células destructoras de la mielina, las cuales se acumulan en la periferia del área de lesión. En estas lesiones la remieliniación (reparación de la vaina de mielina) es muy poco probable, no presentan precursores de oligodendrocitos en su interior (no entran o, si han entrado, han muerto) y son consideradas el siguiente paso a las lesiones activas.

3. Lesiones inactivas: lesiones en las que la desmielinización es total y las células destructoras de mielina ya no están presentes ni en el interior ni en la periferia de la lesión. En estas lesiones la remielinización no es factible, careciendo también de precursores de oligodendrocitos en su interior y se consideran el paso final para una lesión desmielinizante.

Debido a que el ambiente inflamatorio de la esclerosis múltiple es continuo durante toda la enfermedad, a la hora de realizar una terapia celular, las posibilidades de éxito serán mayores en aquellos pacientes cuyas lesiones sean exclusivamente de tipo Activo (y por tanto, susceptibles de reparación) . Sin embargo, la única prueba fiable del tipo de lesión que está presente en el SNC de un paciente de esclerosis múltiple es el análisis histopatológico. Por razones evidentes, es el método más invasivo y en la práctica totalidad de los casos es factible (y por tanto útil) sólo post mortem. La imagen obtenida mediante resonancia magnética nuclear, aun siendo hasta la fecha el método existente menos invasivo y más sensible, no permite concretar el tipo de lesiones que presenta un paciente de esclerosis múltiple, el estado de desarrollo en el que se encuentra o su posible evolución, no sólo en la sustancia blanca (donde se encuentran la gran mayoría de las vainas de mielina) sino también en la sustancia gris, donde podría desencadenarse daño en las propias neuronas (Brex y cols., N. Eng. J. Med. 2002, vol. 346, pp. 158-164; Sepulcre y cols., Arch. Neurol., 2009, vol. 66, pp. 173-179; Weiner, Ann. Neurol., 2009, vol. 65, pp. 239-248) . Aunque el anteriormente citado trabajo de Sepulcre y cols. (Sepulcre y cols., Arch. Neurol., 2009, vol. 66, pp. 173-179) es un paso importante en el establecimiento de una relación causal entre la presencia de lesiones en la sustancia blanca y la atrofia de la sustancia gris en pacientes con esclerosis múltiple, en el editorial firmado por Reichert y cols. (Reichert y cols., Arch. Neurol., 2009, vol. 66, pp. 159-160) y aparecido en el mismo volumen de Archives of Neurology en el que se analizan dichas relaciones, se dice claramente como conclusión que “hasta que no se consiga mediante resonancia magnética nuclear medidas más sensibles de las lesiones cerebrales, el interesante trabajo de Sepulcre y cols, deberá ser corroborado mediante el análisis de tejido post-mortem de cerebros de pacientes con esclerosis múltiple”. Por ello, es necesario encontrar, mediante el uso de técnicas no invasivas, bio-marcadores (presentes en el LCR o el suero de los pacientes de esclerosis múltiple) que nos sirvan para determinar el tipo de lesiones presentes en el SNC, el tipo de tratamiento más eficiente a realizar para la reparación de dichas lesiones (incluyendo el diseño de ensayos clínicos) o la posible evolución de la enfermedad, tanto en la sustancia blanca como en la sustancia gris.

Descripción de la invención

Los autores de esta invención proporcionan una nueva herramienta que permite conocer a través de los niveles de FGF-2 y/o Anosmina-1 en el LCR del paciente, el grado en el que se encuentran sus lesiones cerebrales, el ambiente favorecedor o inhibidor de la migración de los precursores de oligodendrocitos, células reparadoras de la vaina de mielina, el pronóstico de la posible evolución de la enfermedad hacia el daño neuronal en la sustancia gris, así como la asignación de un tratamiento u otro para las mismas (incluyendo el diseño de ensayos clínicos) .... [Seguir leyendo]

1. Método para obtener datos útiles para predecir la histopatología de las lesiones de un paciente con una enfermedad desmielinizante del SNC que comprende los siguientes pasos:

a) detectar la cantidad de la proteína Anosmina-1 en una muestra de fluido biológico aislado, y

b) comparar la cantidad detectada en el paso (a) con una cantidad de referencia.

2. Método para predecir la histopatología de las lesiones de un paciente con una enfermedad desmielinizante del SNC que comprende los pasos (a) - (b) según el método descrito en la reivindicación 1, y que además comprende un paso:

c) predecir la presencia de al menos una lesión crónica o inactiva en la sustancia blanca y/o de la existencia de alteración en la barrera hematoencefálica de la sustancia gris en el sujeto.

3. Método para predecir la histopatología de las lesiones de un paciente según la reivindicación 2, donde en el paso

(c) una cantidad de la proteína Anosmina-1 detectada en el paso (a) mayor que la cantidad de referencia con la que se compara en el paso (b) es indicativa de la presencia de al menos una lesión crónica o inactiva en la sustancia blanca y/o de la existencia de alteración en la barrera hematoencefálica de la sustancia gris.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde la cantidad de referencia del paso (b) es 200 pg/ml.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones1a4 donde la muestra de fluido biológico aislado del paso (a) se selecciona de la lista que comprende: líquido cefalorraquídeo, sangre, suero sanguíneo o plasma sanguíneo.

6. Método según la reivindicación 5 donde la muestra de fluido biológico aislado del paso (a) es líquido cefalorraquídeo.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde la enfermedad desmielinizante del SNC se selecciona de la lista que comprende: esclerosis múltiple, neuromielitis óptica de Devic, encefalitis diseminada aguda, mielitis transversa aguda, leucoencefalitis hemorrágica aguda o subaguda, desmielinización diseminada aguda, esclerosis difusa, diesmielinización central del cuerpo calloso, mielinólisis central pontica, mielitis necrotizante subaguda, esclerosis concéntrica, adrenoleucodistrofia, enfermedad de Alexander, enfermedad de Canavan, enfermedad de Krabbe o síndrome de Zellweger.

8. Método según la reivindicación 7 donde la enfermedad desmielinizante del SNC es esclerosis múltiple.

9. Método según la reivindicación 8 donde la enfermedad desmielinizante del SNC es esclerosis múltiple primaria progresiva o esclerosis múltiple secundaria progresiva.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde la detección de la cantidad de la proteína Anosmina-1 se lleva a cabo mediante un inmunoensayo.

11. Método según la reivindicación 10 donde el inmunoensayo es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) .

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones1a11 caracterizado porque también se detecta el nivel de FGF-2 y se comprara con una cantidad de referencia en un muestra de fluido biológico aislado del sujeto, que puede ser la misma o distinta a la muestra utilizada para la detección de Anosmina-1.

13. Uso de la proteína Anosmina-1 para predecir la histopatología de las lesiones de un sujeto con una enfermedad desmielinizante del SNC mediante la detección de la cantidad de dicha proteína en una muestra de fluido biológico aislado.

14. Uso de la proteína Anosmina-1 según la reivindicación 13 donde la muestra de fluido biológico aislado se selecciona de la lista que comprende: líquido cefalorraquídeo (LCR) , sangre, suero sanguíneo o plasma sanguíneo.

15. Uso de la proteína Anosmina-1 según la reivindicación 14 donde la muestra de fluido biológico aislado es líquido cefalorraquídeo.

16. Uso de la proteína Anosmina-1 según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 donde la enfermedad desmielinizante del SNC se selecciona de la lista que comprende: esclerosis múltiple, neuromielitis óptica de Devic, encefalitis diseminada aguda, mielitis transversa aguda, leucoencefalitis hemorrágica aguda o subaguda, desmielinización diseminada aguda, esclerosis difusa, diesmielinización central del cuerpo calloso, mielinólísis central pontica, mielitis necrotizante subaguda, esclerosis concéntrica, adrenoleucodistrofia, enfermedad de Alexander, enfermedad de Canavan, enfermedad de Krabbe o síndrome de Zellweger.

17. Uso de la proteína Anosmina-1 según la reivindicación 16 donde la enfermedad desmielinizante del SNC es esclerosis múltiple.

18. Uso de la proteína Anosmina-1 según la reivindicación 17 donde la enfermedad desmielinizante del SNC es esclerosis múltiple primaria progresiva o esclerosis múltiple secundaria progresiva.

19. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 18 combinado con el uso de la proteína de FGF-2 en una muestra de fluido biológico aislado.

20. Kit para obtener datos útiles para predecir la histopatología de las lesiones de un paciente con una enfermedad desmielinizante del SNC que comprende los elementos necesarios para:

a) detectar la cantidad de la proteína Anosmina-1 en una muestra de fluido biológico aislado de un sujeto, y b) comparar la cantidad detectada en el paso (a) con una cantidad de referencia.

21. Kit para predecir la histopatología de las lesiones de un paciente con una enfermedad desmielinizante del SNC que comprende los elementos necesarios para: a) detectar la cantidad de la proteína Anosmina-1 en una muestra de fluido biológico aislado de un sujeto, b) comparar la cantidad detectada en el paso (a) con una cantidad de referencia, y

c) predecir la presencia de al menos una lesión crónica o inactiva en la sustancia blanca y/o de la existencia de alteración en la barrera hematoencefálica de la sustancia gris en el sujeto.

22. Kit para predecir la histopatología de las lesiones de un paciente con una enfermedad desmielinizante del SNC según la cualquiera de las reivindicaciones 20 o 21, caracterizado porque también comprende los elementos necesarios para detectar la cantidad de la proteína FGF-2 en el paso (a) .