Extracción de pravastatina.

Un método para purificar la pravastatina que comprende extraer una solución que comprende pravastatina en un disolvente inmiscible en agua con agua o una solución acuosa,

caracterizado por que dicha extracción se lleva a cabo a un pH comprendido entre 5.0 y 6.5 y por que dicho disolvente inmiscible en agua es una acetato o una cetona.

Extracción de pravastatina Campo de la invención La presente invención se refiere a la extracción del inhibidor de la HMG-CoA reductasa pravastatina y la eliminación concominante de impurezas.

Fundamentos de la invención La pravastatina es un inhibidor de la enzima (3S) -hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A (HMG-CoA) reductasa. La sal sódica de pravastatina, pravastatina sódica (1) , es un potente hipocolesterolemiante comercializado para el 10 tratamiento de la hiperlipidemia. La pravastatina se puede preparar mediante oxidación microbiana del precursor compactina obtenido por fermentación, cuya sal sódica tiene la estructura (2) , como se describe, por ejemplo, en US

4.346.227. Recientemente, se ha descrito un método mejorado en WO 2007/147827, en el que la pravastatina se prepara directamente en una célula huésped dotada de gentes para la biosíntesis de la compactina y de un gen para convertir la compactina en pravastatina.

Pese al progreso conseguido hasta la fecha en los procesos de producción de pravastatina, siguen existiendo inconvenientes que se deben superar. Uno de los inconvenientes de los métodos de la técnica anterior es que puede haber trazas de compactina (2) , ya sea como ácido libre, como sal ionizada o en forma de lactona, en el producto final. Debido a que esta impureza es estructuralmente muy similar a la pravastatina, su separación de la pravastatina es tediosa.

Debido a que la pureza de un intermedio farmacéutico activo es importante para la producción de un medicamento seguro y eficaz, la purificación de la pravastatina es un tema abordado con frecuencia en la técnica anterior.

En WO 92/16276 se describe un método que utiliza cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) . Aunque se mencione una pureza de pravastatina superior al 99.5%, no se menciona cómo esta metodología se relaciona con la compactina como impureza. Es más, la HPLC presenta varios inconvenientes, a saber, la necesidad de reciclar la resina, el uso de cantidades excesivas de disolventes y la limitada aplicación a escala industrial. De hecho, no se menciona la purificación de pravastatina a gran escala en WO 92/16276.

En WO 99/42601 se describe un proceso de purificación en el que una solución acuosa de pravastatina se acidifica y se extrae posteriormente con acetato de etilo, después de lo cual se llevan a cabo varios pasos de cristalización. Aunque este procedimiento se describe en una escala relativamente grande (partiendo de 30 litros de un caldo de fermentación) , no existen indicios que apunten a la aplicabilidad del método para purificar pravastatina que contenga compactina.

En WO 00/17182 se describe un proceso de aislamiento/purificación basado en cromatografía de desplazamiento. Se describe la purificación de muestras a escala de laboratorio (es decir, menores o iguales a un 1 gramo) de pravastatina mediante cromatografía de desplazamiento. Aunque se mencionen purezas de pravastatina sódica del 99.7% y el 99.8%, estas purezas se refieren a la pravastatina en solución. No se menciona la pravastatina sódica aislada, ni tampoco existen indicios que apunten al efecto del método sobre la eliminación de la compactina.

La solicitud de patente US 2003/0216596 describe la descomposición de impurezas con ácidos inorgánicos (tales como HBr, HCl, H2SO4, HClO4, H3PO4 y HNO3) o bases (tales como carbonatos, bicarbonatos, hidruros, hidróxidos y alcóxidos de metales alcalinos) . Se describe la pravastatina sódica aislada purificada a escala semigrande (es decir, muestras de hasta 32 gramos) con purezas de hasta un 99.67% y la solicitud se centra en la eliminación de 6-epipravastatina y no menciona la compactina ni sugiere la posible idoneidad del método para reducir la presencia de compactina.

Se han descrito además otros procesos de aislamiento/purificación en EP 877089, US 2003/199047, US 2004/138294, WO 00/46175 y WO 01/39768 aunque en ninguno de estos métodos se menciona una reducción eficaz de las cantidades de compactina en el producto de pravastatina final.

Por consiguiente, se puede mejorar aún más el método de purificación para la pravastatina, más específicamente con respecto a la presencia de la impureza compactina.

Descripción detallada de la invención El primer aspecto de la presente invención es proporcionar un método para purificar la pravastatina o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Se ha descubierto que la extracción de una solución que contiene pravastatina y compactina en un disolvente inmiscible en agua con agua o una solución acuosa a un pH comprendido entre 5.0 y 6.5 produce una solución acuosa en la que la proporción de pravastatina:compactatina se ha incrementado. La extracción de pravastatina de una fase orgánica a una acuosa a un pH comprendido entre 5.0 y 6.5 no tiene precedentes, ya que la técnica anterior recomienda la realización de este tipo de extracciones a un pH mayor de 7.0, en el que los coeficientes de distribución son favorables, como sería habitual con las extracciones de otros ácidos orgánicos. Es más, sobre la base de la alta similitud entre las estructuras moleculares de la pravastatina y la compactina, no cabría esperar de antemano que hubiera una diferencia significativa entre los coeficientes de distribución. Sin embargo, se descubrió que, utilizando el método de la presente invención, la proporción de pravastatina:compactina se podía incrementar de 3:1 en la mezcla de partida hasta 100:1 después de la extracción.

En el contexto de la presente invención, un disolvente inmiscible en agua es un disolvente cuya solubilidad en agua a 20 ± 2 oC es inferior a un 15%, preferentemente inferior a un 10%, más preferentemente inferior a un 8% y aún más preferentemente está comprendida entre un 0.5% y un 5%. Los ejemplos específicos de disolventes inmiscibles en agua que se pueden utilizar en la presente invención incluyen ésteres inmiscibles en agua tales como acetato de etilo, acetato de isopropilo, acetato de metilo, acetato de n-propilo, acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, isobutirato de isobutilo, acetato de 2-etilhexilo y diacetato de etilenglicol; cetonas inmiscibles en agua tales como cetona etil metílica, cetona isobutil metílica, cetona isoamil metílica, cetona n-amil metílica, cetona diisobutílica, ciclohexanona e isoforona; ésteres de éteres inmiscibles en agua tales como 3-etoxipropionato de etilo; hidrocarburos aromáticos inmiscibles en agua tales como tolueno y xileno; halohidrocarburos inmiscibles en agua tales como cloroformo, diclorometano y 1, 1, 1-tricloroetano; y ésteres de éteres glicólicos inmiscibles en agua tales como acetato de éter monometil propilenglicólico, acetato de éter etilenglicol monoetílico, acetato de éter etilenglicol monobutílico y acetato de éter dietilenglicol monobutílico.

El rango de pH para extraer pravastatina de una fase orgánica a una acuosa es de 5.5 a 6.5, más preferentemente de 5.7 a 6.0. Se puede obtener el pH deseado utilizando ácidos y bases con los cuales estará familiarizado un experto y/o que se sabe que son adecuados para extraer la pravastatina tales como, por ejemplo, bases como hidróxido de amonio, hidróxido de potasio, hidróxido de sodio y similares, y, cuando proceda, ácidos tales como HBr, HCl, H2SO4, HClO4, H3PO4, HNO3 y similares.

En una realización, el método de la presente invención es particularmente útil para purificar la pravastatina obtenida mediante procesos biotecnológicos, por ejemplo, fermentación para la cual existen métodos alternativos. En un método, la pravastatina se produce en dos fermentaciones secuenciales. En primer lugar, la Penicillium citrinum produce compactina y el anillo lactona de esta se hidroliza químicamente con hidróxido sódico. Posteriormente, se introduce en un cultivo de Streptomyces carbophilus, que la hidroxila a pravastatina (Metkinen News, marzo de 2000, Metkinen Oy, Finlandia; revisado por Manzoni y Rollini, 2002, Appl. Microbiol. Biotechnol. 58:555-564) . En otro método, también se describe un proceso de fermentación de un único paso para la pravastatina en un transformante de Penicillium chr y sogenum (WO 2007/147827) . Por ende, de acuerdo con la presente invención, se puede obtener una solución de pravastatina en un disolvente inmiscible en agua extrayendo un caldo de fermentación acuoso, que se puede obtener, por ejemplo, mediante cualquiera de los procesos de fermentación descritos anteriormente, con dicho disolvente inmiscible en agua preferentemente a un pH bajo tal como de 1 a 5, preferentemente de 2 a 4.5, más preferentemente... [Seguir leyendo]

1. Un método para purificar la pravastatina que comprende extraer una solución que comprende pravastatina en un disolvente inmiscible en agua con agua o una solución acuosa, caracterizado por que dicha extracción se lleva a cabo a un pH comprendido entre 5.0 y 6.5 y por que dicho disolvente inmiscible en agua es una acetato o una cetona.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende además aislar la pravastatina de la fase acuosa obtenida después de dicha extracción.

3. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 donde dicho pH está comprendido entre

5.5 y 6.5.

4. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde dicho acetato se selecciona entre la lista compuesta por acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de metilo y acetato de propilo, y dicha cetona es cetona isobutil metílica.

5. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde dicha extracción se lleva a cabo 15 en un modo a contracorriente o en un modo de corriente cruzada.