Procedimiento para eliminar tiramina de diferentes fuentes. El procedimiento se basa en las reacciones catalizadas por los genes presentes en las agrupaciones génicas tyn y hpa de Pseudomonas putida U,

partiendo de transformar tiramina y dopamina en 4-hidroxifenilacetaldehído y 3,4-dihidroxifenilacetaldehído, reacción que puede continuarse a los ácidos 4-hidroxifenilacético y 3,4-dihidroxifenilacético respectivamente, mediante las enzimas del cluster tyn y que, si se complementa con las enzimas del cluster hpa, permite la degradación y tiramina y dopamina en ácido pirúvico y ácido succínico. La invención se refiere además a las enzimas que catalizan el proceso, moléculas de ácido nucleico que las codifican, vectores que permitan su expresión y, especialmente a microorganismos recombinantes transformados con dichos vectores. Además, la invención se refiere al uso de microorganismos que posean los genes adecuados para expresar las proteínas implicadas en el proceso para reducir la tiramina y dopamina de alimentos.

Procedimiento para eliminar tiramina de diferentes fuentes.

Campo técnico de la invención El campo técnico de la invención pertenece a la Biotecnología. La invención consiste se refiere a un nuevo procedimiento para disminuir el contenido de tiramina y/o dopamina en una muestra que se basa en una vía de degradación bacteriana de estos compuestos desconocida hasta ahora que lleva a cabo la transformación de tiramina y de dopamina en los ácidos 4-hidroxifenilacético y 3, 4-dihidroxifenilacético respectivamente, compuestos que, al ser degradados por las enzimas de otro cluster complementario, son finalmente degradados en ácido pirúvico y ácido succínico: La invención se refiere al procedimiento basado en las enzimas que catalizan las reacciones de dicha vía, así como a las proteínas que intervienen en la vía, las secuencias que las codifican, los vectores a partir de los cuales pueden expresarse y los microorganismos recombinantes en los que se expresen las proteínas implicadas en la ruta, así como en el uso de estos microorganismos recombinantes y los que expresen las enzimas de la ruta de forma natural para disminuir el contenido de tiramina y/o dopamina en muestras que las contengan, preferentemente alimentos y bebidas.

Estado de la técnica

Aminas biogénicas. Aspectos generales Las aminas son compuestos químicos derivados del amoniaco que resultan de la sustitución de los hidrógenos de esa molécula por radicales alquilo. Según se sustituyan uno, dos o tres hidrógenos, las aminas serán primarias, secundarias o terciarias. Cuando son originadas como consecuencia de la actividad de organismos vivos y poseen actividad biológica (cumplen importantes funciones en las células) reciben el nombre de aminas biogénicas o biogénicas. En función del número de grupos amino presentes en la molécula podemos diferenciar, monoaminas, diaminas y poliaminas. Las monoaminas alifáticas están muy extendidas en la naturaleza donde también es abundante la diamina putrescina, mientras que las poliamidas espermidina y espermina son producidas por animales, por plantas y por la mayoría de las bacterias (1) .

Las aminas aromáticas, originadas por descarboxilación de aminoácidos, son las aminas más comunes en los alimentos (histamina, 2-feniletilamina, tiramina, etc.) y también tienen gran importancia como transmisores dentro del sistema nervioso central (dopamina, noradrenalina, epinefrina, serotonina, etc.) .

Podemos hacer una distinción entre aminas biogénicas endógenas, que son aquellas que son sintetizadas en diferentes tejidos de los organismos superiores (como por ejemplo la adrenalina producida en la médula adrenal o la histamina en los mastocitos) y aminas biogénicas exógenas, que son las ingeridas en la dieta. Estas aminas biogénicas exógenas pueden estar presentes en los alimentos de origen vegetal (frutas y hortalizas) , o bien pueden aparecer en los alimentos como consecuencia de la actividad microbiana durante el procesado (cura de carnes y quesos) o durante el almacenaje de los mismos. Debido a que pueden provocar efectos nocivos tanto en el hombre como en los animales, son consideradas sustancias tóxicas.

Las aminas biogénicas más importantes que pueden encontrarse en los alimentos son la histamina, la putrescina, la cadaverina, la tiramina, la triptamina, la feniletilamina, la espermina y la espermidina; y los alimentos que las contienen pueden ser muy variados (pescado, carne, huevos, quesos, bebidas fermentadas, etc.) (2) .

Afortunadamente, los organismos cuentan con diferentes sistemas naturales de destoxificación (monoaminooxidasa -MAO-o la diaminooxidasa -DAO-) que les permiten eliminar las aminas biogénicas, evitando los efectos perjudiciales causados por estos compuestos. Sin embargo, puede haber casos en que estos sistemas no funcionan correctamente, o se encuentran inhibidos por la acción de determinados fármacos, por lo que la presencia de aminas biogénicas en los alimentos puede suponer un grave problema para la salud.

Por todas estas razones es muy interesante seleccionar microorganismos que al ser utilizados en los procesos de elaboración de alimentos (curados, fermentaciones, etc.) , no acumulen aminas biogénicas, o que lo hagan en concentraciones que no sean peligrosas para la salud. La Ingeniería Genética y la Ingeniería Metabólica podrían contribuir a obtener este tipo de cepas asegurando, además, que se conserven otra serie de propiedades y características que son necesarias para mantener los estándares de identidad y calidad de los alimentos.

Las aminas biogénicas como neurotransmisores Desde hace décadas se tiene constancia de que la transmisión catecolaminérgica está mediada por aminas biogénicas entre las que se incluyen las catecolaminas (dopamina, noradrenalina y adrenalina) derivadas del aminoácido tirosina; la indolamina serotonina, sintetizada a partir del triptófano; y la histamina, producida a partir del aminoácido histidina.

Catecolaminas Bajo el término catecolaminas se engloban todas aquellas aminas biogénicas derivadas de la tirosina que contienen un grupo catecol y un grupo amino en su molécula. El primer paso en la síntesis de catecolaminas está catalizado por la enzima tirosinahidroxilasa mediante una reacción que requiere oxígeno como substrato y tetrahidrobiopterina como cofactor, y permite obtener como producto final dihidroxifenilalanina (DOPA) (Figura 1) . Por lo tanto, la tasa de tirosinahidroxilasa va a ser el factor limitante para la síntesis de las tres aminas neurotransmisoras catecolaminérgicas (dopamina, noradrenalina y adrenalina) .

La dopamina se produce por la descarboxilación de L-DOPA. Esta reacción se lleva a cabo por la enzima DOPA descarboxilasa. El área del cerebro donde se encuentra en mayor abundancia es en el corpus estriatum, jugando un papel esencial en la coordinación de los movimientos corporales (3) . En pacientes que padecen la enfermedad de Parkinson, por ejemplo, se ha observado degeneración de las neuronas dopaminérgicas, lo que va a dar lugar a la característica disfunción motora asociada a esta enfermedad (4) .

La noradrenalina, también llamada norepinefrina, requiere para su síntesis, a partir de dopamina, la acción de la dopamina-β-hidroxilasa. Esta catecolamina se produce mayoritariamente en las neuronas de los ganglios simpáticos y su acción está relacionada con el sueño, la vigilia, la atención y la conducta.

La adrenalina, también llamada epinefrina, está presente en el cerebro en niveles más bajos que las otras dos catecolaminas. La enzima que sintetiza la adrenalina, la feniletanolamina-N-metiltransferasa, se localiza solo en las neuronas secretoras de esta catecolamina.

Las enzimas más importantes en el catabolismo de catecolaminas son la monoaminooxidasa (MAO) y la catecol O-metiltransferasa (COMT) (5) . Estas enzimas se encuentran respectivamente en las mitocondrias y en el citoplasma tanto de las células neuronales como de las gliales. Los inhibidores de estas enzimas se utilizan en clínica como antidepresivos (6) .

Histamina Esta amina biogénica neurotransmisora se produce por descarboxilación de la histidina debido a la acción de la histidinadescarboxilasa (Figura 2A) . En su metabolismo intervienen tanto la histidinametiltransferasa como la MAO. La mayor concentración de este neurotransmisor se encuentra en las neuronas del hipotálamo y su acción está relacionada con los procesos de alerta y atención. La histamina también es liberada por los macrófagos en respuesta a reacciones alérgicas o a daños en los tejidos.

Serotonina Esta indolamina, también llamada 5-hidroxitriptamina, se sintetiza en las neuronas a partir del triptófano ingerido con los alimentos tras ser hidroxilado a 5-hidroxitriptófano mediante una reacción catalizada por la enzima triptófano5-hidroxilasa. Posteriormente, el 5-hidroxitriptófano se descarboxila por medio de la acción de una 5-hidroxitriptofano descarboxilasa para dar lugar a la serotonina (Figura 2B) . La principal enzima encargada de su degradación es la MAO, al igual que sucede en las demás aminas biogénicas. La serotonina está implicada en la regulación del sueño y de la vigilia.

Además de las monoaminas neurotransmisoras, existen otras aminas biogénicas que poseen una estructura molecular parecida y que actúan como neuromoduladores o "falsos neurotransmisores". Estas aminas endógenas, también denominadas aminas "traza" o microaminas, se encuentran en pequeñas cantidades en el sistema nervioso central y su estudio está... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para transformar un compuesto de la Fórmula I

donde R1 es H (tiramina) , contenido en una muestra, en ácido pirúvico y ácido succínico, o alguna de sus sales, que comprende las siguientes etapas:

a) transformar el compuesto de Fórmula I en un compuesto de Fórmula II, donde R1 es H, por la acción catalítica de una tiramina oxidasa; b) transformar el compuesto de Fórmula II en un compuesto de Fórmula III, donde R1 es H, por la acción catalítica de una 4-hidroxifenilacetaldehído deshidrogenasa;

c) transformar del compuesto de Fórmula III en el que R1 es H, en el compuesto de Fórmula III en el que R1 es OH (ácido 3, 4-dihidroxifenilacético) , por la acción catalítica de una 4-hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa d) transformar el ácido 3, 4-dihidroxifenilacético en semialdehído 5-carboximetil-2-hidroximucónico, por la acción catalítica de una hidroxifenilacetaldehído dioxigenasa;

e) transformar el semialdehído 5-carboximetil-2-hidroximucónico en ácido 5-carboximetil-2-hidroximucónico, por la acción catalítica de una deshidrogenasa, f) transformar ácido 5-carboximetil-2-hidroximucónico en ácido 5-oxo-pent-3-ene-1, 2, 5-tricarboxílico, por la acción catalítica de una isomerasa, g) transformar el ácido 5-oxo-pent-3-ene-1, 2, 5-tricarboxílico en ácido 2-hidroxi-hept-2, 4-diene-1, 7-dioico, por la acción catalítica de una descarboxilasa, h) transformar el ácido 2-hidroxi-hept-2, 4-diene-1, 7-dioico en ácido 2-oxo-hept-3-ene-1, 7-dioico, por la acción catalítica de una descarboxilasa, i) transformar el ácido 2-oxo-hept-3-ene-1, 7-dioico en ácido 2, 4-hidroxi-hept-2-ene-1, 7-dioico, por la acción catalítica de una hidratasa, j) transformar el ácido 2, 4-hidroxi-hept-2-ene-1, 7-dioico en ácido pirúvico y ácido succínico o semialdehído succínico, por la acción catalítica de una aldolasa;

procedimiento donde cualquiera de los ácidos citados puede estar en forma de cualquiera de sus sales, caracterizado porque, adicionalmente a las enzimas que catalizan las etapas del procedimiento, están presentes en la muestra las proteínas cuyas secuencias polipeptídicas están representadas por SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42 y SEQ ID NO: 44.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la tiramina oxidasa que cataliza la etapa a) está codificada por una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo de:

i) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 3 y una segunda secuencia que es idéntica; al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 5;

ii) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con las secuencias de i) ;

iii) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 4 y una segunda secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 6;

iv) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4 y una segunda secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 6, donde la molécula de ácido nucleico hibrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende las secuencias mencionadas en i) , o secuencias complementarias a las mismas;

o es una tiramina oxidasa que comprende dos fragmentos de secuencia de aminoácidos, un primer fragmento cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a una primera secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 4 y un segundo fragmento cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a una segunda secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 6, tiramina oxidasa en la que el fragmento de secuencia idéntica al menos en un 60% a SEQ ID NO: 4 y el fragmento de secuencia idéntica al menos en un 60% a SEQ ID NO: 6 pueden formar parte de una única secuencia polipeptídica o pueden estar formando un complejo proteico, asociadas por enlaces distintos del enlace peptídico, tales como puentes de hidrógeno, puentes disulfuro o fuerzas de van der Waals.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que la tiramina oxidasa que cataliza la etapa a) está formada por dos subunidades, una de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 y la segunda de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.

4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la 4-hidroxifenilacetaldehído deshidrogenasa que cataliza la etapa b) está codificada para una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo

o es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica de SEQ ID NO: 8.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que la 4-hidroxifenilacetaldehído deshidrogenasa que cataliza la etapa b) es idéntica en su secuencia de aminoácidos a la secuencia polipeptítidca de SEQ ID NO: 8.

6. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la 4-hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa que cataliza la etapa c) comprende dos fragmentos de secuencia de aminoácidos, un primer fragmento cuya secuencia es idéntica, al menos en un 60%, a una primera secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 20 y un segundo fragmento cuya secuencia es idéntica al menos en un 60% a una segunda secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 22, hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa en la que dichos fragmentos de secuencia pueden formar parte de una única secuencia polipeptídica o pueden estar formando un complejo proteico, asociadas por enlaces distintos del enlace peptídico, tales como puentes de hidrógeno, puentes disulfuro o fuerzas de van der Waals.

7. Procedimiento según la reivindicación 6, en el que la 4-hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa que cataliza la etapa c) está formada por dos subunidades, una de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 20 y la segunda de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22.

8. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el la que la hidroxifenilacetaldehído dioxigenasa que cataliza la etapa d) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 24.

9. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que la hidroxifenilacetaldehído dioxigenasa que cataliza la etapa d) tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 24.

10. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la deshidrogenasa que cataliza la etapa e) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 26.

11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que la secuencia de la deshidrogenasa que cataliza la etapa e) es idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 26.

12. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la secuencia de la isomerasa que cataliza la etapa f) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 28.

13. Procedimiento según la reivindicación 12, en el que la secuencia de la isomerasa que cataliza la etapa f) es idéntica en su secuencia de aminoácidos a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 28.

14. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la descarboxilasa que cataliza la etapa g) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 30.

15. Procedimiento según la reivindicación 14, en el que el que la descarboxilasa que cataliza la etapa g) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 30.

16. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la descarboxilasa que cataliza la etapa h) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 32.

17. Procedimiento según la reivindicación 16, en el que la descarboxilasa que cataliza la etapa h) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 32.

18. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la hidratasa que cataliza la etapa i) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 34.

19. Procedimiento según la reivindicación 18, en el que la hidratasa que cataliza la etapa i) es idéntica en su secuencia de aminoácidos a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 34.

20. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la aldolasa que cataliza la etapa j) es idéntica en su secuencia de aminoácidos al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 36.

21. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que la aldolasa que cataliza la etapa j) es idéntica en su secuencia de aminoácidos a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 36. de: i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 7; ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ; iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 8; iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 8, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

22. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que:

a) la tiramina oxidasa que cataliza la etapa a) está formada por dos subunidades, una de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 y la segunda de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6, b) la 4-hidroxifenilacetaldehído deshidrogenasa que cataliza la etapa b) es idéntica en su secuencia de aminoácidos a la secuencia polipeptítidca de SEQ ID NO: 8;

c) la 4-hidroxifenilacetaldehído monoxigenasa que cataliza la etapa c) está formada por dos subunidades, una de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 20 y la segunda de las cuales tiene una secuencia polipeptídica idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22;

d) la hidroxifenilacetaldehído dioxigenasa que cataliza la etapa d) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 24, e) la deshidrogenasa que cataliza la etapa e) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 26, f) la isomerasa que cataliza la etapa f) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 28, g) la descarboxilasa que cataliza la etapa g) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 30, h) la descarboxilasa que cataliza la etapa h) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 32, i) la hidratasa que cataliza la etapa i) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 34, j) la aldolasa que cataliza la etapa j) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 36.

23. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en el que las enzimas que catalizan o regulan las etapas del procedimiento se sintetizan en la muestra a partir de un vector de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico que comprende las siguientes secuencias codificantes:

a) la secuencia codificante de una proteína o complejo proteico capaz de actuar como tiramina oxidasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 3 y una segunda secuencia que es idéntica; al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 5;

ii) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con las secuencias de i) ;

iii) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 4 y una segunda secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 6;

iv) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 4 y una segunda secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 6, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende las secuencias mencionadas en i) , o secuencias complementarias a las mismas;

b) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como 4-hidroxifenilacetaldehído deshidrogenasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 7;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 8;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 8, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma c) la secuencia codificante de una proteína o complejo proteico capaz de actuar como 4-hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia, que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 19 y una segunda secuencia que es idéntica; al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 21;

ii) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con las secuencias de a) ;

iii) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 20 y un segunda secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 22;

iv) una molécula de ácido nucleico que comprende una primera secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 20 y una segunda secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 22, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende las secuencias mencionadas en a) , o secuencias complementarias a las mismas;

d) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como hidroxifenilacetaldehído dioxigenasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 23;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 24;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 24, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una: secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

e) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como; deshidrogenasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 25;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 26;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 26, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

f) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como isomerasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 27;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 28;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 28, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

g) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como descarboxilasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 29;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 30;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 30, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

h) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como descarboxilasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 31;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 32;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 32, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

i) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como hidratasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 33;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 34;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 34, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

j) la secuencia codificante de una proteína capaz de actuar como aldolasa, seleccionada del grupo que consiste en:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 35;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia representada por SEQ ID NO: 36;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 36, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma;

k) la secuencia codificante de cada una de las proteínas cuya secuencia codificante cumple al menos una de las condiciones del grupo que consiste en ser:

i) una secuencia de ácido nucleico que es idéntica a la secuencia representada por SEQ ID NO: 9, SEQ ID:11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41 o SEQ ID NO: 43;

ii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que híbrida en condiciones estrictas con una secuencia de i) ;

iii) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos es idéntica a la secuencia representada por SEQ ID NO: 10, SEQ ID: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID: NO: 42 o SEQ ID NO: 44;

iv) una secuencia de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una variante alélica natural de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO: 10, SEQ ID:12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42 o SEQ ID NO: 44, donde la molécula de ácido nucleico híbrida, bajo condiciones estrictas, con una secuencia de DNA que comprende la secuencia mencionada en i) , o una secuencia complementaria a la misma.

24. Procedimiento según la reivindicación 23, en el que las secuencias codificantes son idénticas a las representadas por SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID:11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID N0.27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41 o SEQ ID NO: 43.

25. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 23 ó 24, en el que el vector de expresión es un plásmido.

26. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 23 a 25, en el que el vector de expresión está en un organismo hospedador recombinante transformado con el vector de expresión, organismo hospedador que está presente en la muestra o que se añade a la misma.

27. Procedimiento según la reivindicación 26, en el que el vector de expresión está insertado en el genoma del hospedador.

28. Procedimiento según la reivindicación 26, en el que el vector de expresión permanece como forma replicativa autónoma.

29. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, en el que las enzimas que catalizan o regulan las etapas de procedimiento son sintetizadas por un microorganismo presente en la muestra o que se añade a la misma.

30. Procedimiento según la reivindicación 29, en el que las secuencias codificantes de las enzimas sintetizadas por el microorganismo están presentes en su genoma de forma natural.

31. Procedimiento según la reivindicación 30, en el que el microorganismo es Pseudomonas putida U (CECT 4848) y el procedimiento es el de una cualquiera de las reivindicaciones1a8.

32. Procedimiento según las reivindicaciones 26 y 29, en el que el microorganismo es un microorganismo hospedador recombinante.

33. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 32, en el que la muestra en la que se quiere disminuir el contenido del compuesto de la Fórmula I en el que R1 es H es un alimento para seres humanos o animales, una bebida destinada al consumo de seres humanos o animales, una materia prima de partida en la obtención del alimento o bebida o un producto intermedio en la preparación del alimento o bebida.

34. Procedimiento según la reivindicación 33, en el que el alimento, materia prima o producto intermedio se selecciona entre un derivado lácteo, leche procedente de cualquier mamífero, mezcla de leches procedente de más de una especie de mamífero o un producto intermedio de la transformación de la leche o mezcla de leches.

35. Procedimiento según la reivindicación 34, en el que el alimento, materia prima o producto intermedio se selecciona entre queso, leche procedente de vaca, oveja o cabra, una mezcla de leche procedente de al menos dos de las especies anteriores; o un producto intermedio de la transformación de la leche o mezcla de leches en queso.

36. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 33 a 35, en el que en el que las enzimas que catalizan las etapas del procedimiento son sintetizadas por un microorganismo presente en la muestra o que se añade a la misma.

37. Procedimiento según las reivindicaciones 26 y 36, en el que el microorganismo es un organismo hospedador recombinante.

38. Procedimiento según la reivindicación 37, en el que el microorganismo recombinante es una bacteria capaz de transformar un azúcar en ácido láctico.

39. Procedimiento según la reivindicación 38, en el que la bacteria pertenece a un género que se selecciona entre Lactobacillus; Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus, Streptocuccus.

40. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 34 a 39, en el que el microorganismo actúa como iniciador (starter) de la transformación de la leche en derivado lácteo.

41. Procedimiento según la reivindicación 33, en el que la bebida, materia prima o producto intermedio se selecciona entre mosto, cebada, malta, vino, cerveza, un producto intermedio de la transformación de la cebada en cerveza, un producto intermedio de la transformación de mosto en vino, cualquier otra bebida alcohólica que requiera fermentación alcohólica por levaduras o cualquier producto intermedio de transformación de la misma

42. Procedimiento según la reivindicación 41, en el que en el que las enzimas que catalizan las etapas del procedimiento son sintetizadas por un microorganismo presente en la muestra o que se añade a la misma.

43. Procedimiento según la reivindicación 42, en el que el microorganismo es un organismo hospedador recombinante.

44. Procedimiento según la reivindicación 43, en el que la bebida es vino y el microorganismo se añade al vino durante la fermentación maloláctica.

45. Procedimiento según la reivindicación 33, en el que el alimento, materia prima o producto intermedio se selecciona entre un embutido; un producto intermedio de la transformación de la carne en el embutido o carne de vacuno; porcino o cérvido o mezclas de las mismas destinadas a la preparación de un embutido.

46. Procedimiento según la reivindicación 33, en el que el alimento, materia prima o producto intermedio se selecciona entre el chucrut; la materia prima del misma o un producto intermedio de la obtención del chucrut.

47. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 45 ó 46, en el que las enzimas que catalizan las etapas del procedimiento son sintetizadas por un microorganismo presente en la muestra o que se añade a la misma que es un organismo hospedador recombinante.

48. Procedimiento según la reivindicación 47, en el que el microorganismo actúa como iniciador (starter) de la transformación de la materia prima en el embutido o chucrut.

49. Uso de Pseudomonas putida U para disminuir el contenido de tiramina en un alimento o bebida destinada al consumo humano o animal, en la materia prima utilizada para su obtención o en un producto intermedio de la transformación de la materia prima en el alimento o bebida.

50. Uso de un organismo hospedador transformado con un vector de expresión que comprende las secuencias codificantes de las enzimas que catalizan las etapas del procedimiento de la reivindicación 2 y las de los polipéptidos representados por las secuencias SEQ ID NO: 10, SEQ ID:12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42 y SEQ ID NO: 44, para disminuir el contenido de tiramina en un alimento o bebida destinada consumo humano o animal, en la materia prima utilizada para su obtención o en un producto intermedio de la transformación de la materia prima en el alimento o bebida.

51. Uso según la reivindicación 50, en el que el organismo hospedador actúa como iniciador (starter) del proceso de transformación de la materia prima en el alimento o bebida destinada al consumo humano o animal.

52. Uso según la reivindicación 51, en el que el alimento es un derivado lácteo.

53. Uso según la reivindicación 52, en el que el derivado lácteo es un queso.

54. Uso según la reivindicación 51, en el que alimento es un embutido.

55. Uso según la reivindicación 51, en el que el alimento es un alimento en el que se produce fermentación en su proceso de elaboración, que se selecciona entre chucrut, pepinillos o aceitunas.

56. Una composición que comprende al menos los siguientes polipéptidos o complejos proteicos:

a) una tiramina oxidasa que comprende dos fragmentos de secuencia de aminoácidos, un primer fragmento cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a una primera secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 4 y un segundo fragmento cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a una segunda secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 6, tiramina oxidasa en la que el fragmento de secuencia idéntico al menos en un 60% a SEQ ID NO: 4 y el fragmento de secuencia idéntico al menos en un 60% a SEQ ID NO: 6 pueden formar parte de una única secuencia polipeptídica o pueden estar formando un complejo proteico, asociadas por enlaces distintos del enlace peptídico, tales como puentes de hidrógeno, puentes disulfuro o fuerzas de van der Waals;

b) una 4-hidroxifenilacetaldehído deshidrogenasa cuya secuencia es idéntica, al menos en un 60%, a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 8;

c) una 4-hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa que comprende dos fragmentos de secuencia de aminoácidos, un primer fragmento cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a una primera secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 20 y un segundo fragmento cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a una segunda secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 22, 4-hidroxifenilacetaldehído monooxigenasa en la que el fragmento de secuencia idéntico al menos en un 60% a SEQ ID NO: 20 y el fragmento de secuencia idéntico al menos en un 60% a SEQ ID NO: 22 pueden formar parte de una única secuencia polipeptídica o pueden estar formando un complejo proteico, asociadas por enlaces distintos del enlace peptídico, tales como puentes de hidrógeno, puentes disulfuro o fuerzas de van der Waals.

d) una hidroxifenilacetaldehído dioxigenasa, cuya secuencia es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 24, e) una deshidrogenasa cuya secuencia es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 26, f) una isomerasa cuya secuencia es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 28, g) una descarboxilasa cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 30;

h) una descarboxilasa cuya secuencia de aminoácidos es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 32, i) una hidratasa cuya secuencia es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 34, j) una aldolasa cuya secuencia es idéntica al menos en un 60% a la secuencia polipeptídica representada por SEQ ID NO: 36, k) las proteínas cuyas secuencias están representadas por SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42 y SEQ ID NO: 44.

57. Composición según la reivindicación 56, en la que el porcentaje de identidad de las proteínas citadas en los apartados a) a k) con la correspondiente secuencia representada por SEQ ID NO:4aSEQ ID NO: 44 es del 100%.

LISTA DE SECUENCIAS

<110> BIOGES STARTERS S.A.

<120> PROCEDIMIENTO PARA ELIMINAR TIRAMINA Y DOPAMINA DE DIFERENTES FUENTES

<130> P-100764

<160> 45

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 25132

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (25132)

<223> Secuencia que contiene los cluster tyn y hpa <400> 1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

<210> 2

<211> 12339

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (12339)

<223> Cluster tyn <400> 2

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

<210> 3

<211> 1296

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1296)

<223> Secuencia codificante de TynA

<400> 3

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

<210> 4

<211> 431

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 4 <210> 5

<211> 1140

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1140)

<223> TynB

ES 2 364 110 A1

<400> 5

ES 2 364 110 A1

<210> 6

<211> 379

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 6

ES 2 364 110 A1

<210> 7

<211> 1488

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1488)

<223> TynC

<400> 7

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

<210> 8

<211> 495

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 8

ES 2 364 110 A1

<210> 9

<211> 942

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (942)

<223> TynR

<400> 9 <210> 10

<211> 313

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 10 <210> 11

<211> 1335

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1335)

<223> TynD

<400> 11

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

<210> 12

<211> 444

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

ES 2 364 110 A1

<400> 12

<210> 13

<211> 1218

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1218)

ES 2 364 110 A1

<223> TynF

<400> 13

ES 2 364 110 A1

<210> 14

<211> 405

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

ES 2 364 110 A1

<400> 14

<210> 15

<211> 1311

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1311)

<223> TynE

<400> 15

ES 2 364 110 A1

<210> 16

<211> 436

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 16

ES 2 364 110 A1

<210> 17

<211> 1497

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1497)

<223> TynG

<400> 17

ES 2 364 110 A1

<210> 18

<211> 498

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 18

ES 2 364 110 A1

<210> 19

<211> 1170

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1170)

<223> HpaB

<400> 19

ES 2 364 110 A1

<210> 20

<211> 389

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 20 <210> 21

<211> 930

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (930)

<223> hpaC

<400> 21

ES 2 364 110 A1

<210> 22

<211> 309

ES 2 364 110 A1

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 22 <210> 23

<211> 924

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (924)

<223> hpaD

<400> 23 <210> 24

<211> 307

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 24 <210> 25

<211> 1461

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1461)

ES 2 364 110 A1

<223> hpaE

<400> 25

ES 2 364 110 A1

<210> 26

<211> 486

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 26 <210> 27

<211> 405

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (405)

<223> hpaF

<400> 27

<210> 28

<211> 134

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 28 <210> 29

<211> 660

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (660)

<223> hpaG1

<400> 29 <210> 30

<211> 219

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 30 <210> 31

<211> 765

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (765)

<223> hpaG2

<400> 31 <210> 32

<211> 254

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 32 <210> 33

<211> 804

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (804)

<223> hpaH

<400> 33

ES 2 364 110 A1

<210> 34

<211> 267

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 34

<210> 35

<211> 804

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

ES 2 364 110 A1

<222> (1) .. (804)

<223> hpaI

<400> 35 <210> 36

<211> 267

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 36 <210> 37

<211> 906

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (906)

<223> hpaA

<400> 37 <210> 38

<211> 301

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 38 <210> 39

<211> 1308

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (1308)

<223> hpaX

ES 2 364 110 A1

<400> 39

ES 2 364 110 A1

<210> 40

<211> 435

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

ES 2 364 110 A1

<400> 40

<210> 41

<211> 423

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (423)

<223> hpaR1

<400> 41 <210> 42

<211> 140

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 42

<210> 43

<211> 423

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> CDS

<222> (1) .. (423)

<223> hpaR2

<400> 43

<210> 44

<211> 140

<212> PRT

<213> Pseudomonas putida U

<400> 44 <210> 45

<211> 12722

<212> DNA

<213> Pseudomonas putida U

<220>

<221> misc_feature <222> (1) .. (12722)

<223> cluster hpa <400> 45

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1

ES 2 364 110 A1