Diagnóstica y terapéutica para enfermedades asociadas con el receptor acoplado de proteína G ADIPOR2 (ADIPOR2).

Un método para diagnosticar una enfermedad comprendida en un grupo de enfermedades consistente de cáncer,

en un mamífero que comprende las etapas de

i) determinar la cantidad de un polinucleótido de AdipoR2 en una muestra tomada de dicho mamífero,

ii) determinar la cantidad de polinucleótido de AdipoR2 en mamíferos saludables y/o enfermos.

Diagnóstica y terapéutica para enfermedades asociadas con el receptor acoplado de proteína G ADIPOR2 (ADIPOR2) .

Campo técnico de la invención

La presente invención está en el campo de la biología molecular, más particularmente la presente invención se relaciona con secuencias de ácidos nucleicos de una AdipoR2 humano y su regulación para el diagnóstico del cáncer en mamíferos.

Antecedentes de la invención

Receptores acoplados de proteína G

La AdipoR2 es un receptor acoplado de la proteínas G transmembrana de nivel siete (GPCR) [Yamauchi et al., (2003) , WO200190304, WO200157190]. Muchos procesos biológicos significativos médicamente son mediados por la transducción de rutas de señales que involucran proteínas G [Lefkowitz, (1991) ]. La familia de receptores acoplados de proteínas G (GPCR) incluyen receptores para hormonas, neurotransmisores, factores de crecimiento y virus. Ejemplos específicos de los GPCR incluyen receptores para agentes tan diversos como la dopamina, calcitonina, hormonas adrenérgicas, endotelina, cAMP, adenosina, acetilcolina, serotonina, histamina, trombina, kinina, hormona estimulante de los folículos, ópsinas, el gen 1 de diferenciación endotelial, rodopsinas, odorantes, citomegalovirus, proteínas G en sí mismas, proteínas efectoras tales como fosfolipasa C, adenilciclasa y fosfodiesterasa, y proteínas actuadoras tales como proteína quinasa A y proteína quinasa C.

Las GPCR poseen siete dominios de barrido de membrana conservados que conectan al menos ocho bucles hidrofílicos divergentes. Las GPCR también conocidas como receptores de transmembrana siete, 7TM, han sido caracterizadas por incluir estos siete alargamientos hidrofóbicos conservados de aproximadamente 20 a 30 aminoácidos, conectando al menos ocho bucles hidrofílicos divergentes. La mayor parte de las GPCR tienen residuos de cisteína sencillos conservados en cada uno de los dos primeros bucles extracelulares, los cuales forman puentes disulfuro que se cree estabilizan la estructura funcional de la proteína. Las siete regiones de la transmembrana se designan como TM1, TM2, TM3, TM4, TM5, TM6, y TM7. La TM3 ha sido implicada con la transducción de señales. La fosforilación y la lipidación (palmitilación o farnesilación) de los residuos de cisteína pueden influir en la transducción de señales de algunos GPCR. La mayor parte de las GPCR contienen sitios de fosforilación potencial dentro del tercer bucle citoplásmico y/o el término carboxi. Para varios GPCR, tales como el receptor beta-adrenérgico, la fosforilación por parte de la proteína quinasa A y/o quinasas receptoras específicas media la desensibilización del receptor.

Para algunos receptores, los sitios de enlazamiento del ligando de GPCR se cree que comprenden bolsillos hidrofílicos formados por varios dominios de transmembrana GPCR. Los bolsillos hidrofílicos están rodeados por residuos hidrófobos de la GPCR. El lado hidrofílico de cada hélice transmembrana de GPCR es postulado para mirar hacia dentro y formar un sitio de enlazamiento de ligando polar. La TM3 ha sido implicada con varios GPCR por tener sitios de enlazamiento de ligando, tales como el residuo aspartato TM3. Las TM5 serinas, una TM6 asparagina, y TM6 o TM7 fenilalaninas o tirosinas también están implicadas en el enlazamiento del ligandos.

Las GPCR están acopladas dentro de la célula por proteínas heterotriméricas G a diversas enzimas intracelulares, canales iónicos y transportadores. Diferentes subunidades alfa de proteína G estimulan preferencialmente efectores particulares para modular diversas funciones biológicas en una célula. La fosforilación de residuos citoplásmicos de GPCR es un mecanismo importante para la regulación de algunos GPCRs. Por ejemplo, en una forma de transducción de señal, el efecto del enlazamiento de la hormona es la activación de la enzima, adenilato ciclasa, dentro de la célula. La activación enzimática por hormonas depende de la presencia del nucleótido GTP. El GTP también influye en el enlazamiento de las hormonas. Una proteína G conecta el receptor de la hormona a la adenilato ciclasa. La proteínas G intercambia GTP para GDP de frontera cuando se activa por parte de un receptor hormonal. La forma de transporte de GTP enlaza entonces a la adenilato ciclasa. La hidrólisis de GTP a GDP, catalizada por la propia proteína G misma, hace regresar la proteína G a su forma basal inactiva. Así, la proteína G cumple un papel doble, como intermedio que regula la señal desde el receptor hasta el efector, y como un reloj que controla la duración de la señal.

Durante los últimos 15 años, se han introducido en el mercado exitosamente cerca de 350 agentes terapéuticos que apuntan a los receptores 7TM. Esto indica que estos receptores tienen una historia establecida y probada como objetivos terapéuticos. Claramente, hay necesidad para identificar y caracterizar receptores adicionales, que puedan jugar un papel en la prevención, mejora o corrección de disfunciones o enfermedades que incluyen, pero no se limitan a, enfermedades tales como infecciones bacterianas, fúngicas, protozoarias y virales, particularmente las causada por virus VIH, cánceres, alergias incluyendo asma, enfermedades cardiovasculares incluyendo fallo cardíaco agudo, hipotensión, hipertensión, angina pectoris, infarto del miocardio, enfermedades hematológicas, enfermedades genitourinarios incluyendo incontinencia urinaria e hiperplasia benigna de la próstata, osteoporosis, trastornos del sistema nervioso periférico y central incluyendo dolor, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson, enfermedades respiratorias, enfermedades metabólicas, enfermedades inflamatorias, enfermedades gastrointestinales, enfermedades del sistema endocrino, enfermedades dermatológicas, enfermedades de los músculos o el esqueleto, enfermedades inmunológicas, enfermedades del desarrollo o enfermedades del sistema reproductivo.

Tecnología TaqMan/perfil de expresión

El TaqMan es una técnica recientemente desarrollada, en la cual la liberación de un pigmento informador fluorescente a partir de una sonda de hibridación en tiempo real durante una reacción en cadena de polimerasa (PCR) es proporcional a la acumulación del producto de PCR. La cuantificación se basa en la parte temprana lineal de la reacción, y por la determinación del ciclo de umbral (CT) , en el cual se detecta primeramente la señal de fondo de fluorescencia anterior.

Las tecnologías de expresión genética pueden ser útiles en varias áreas del descubrimiento y desarrollo de fármacos, tales como identificación de objetivo, optimización de candidatos e identificación de mecanismos de acción. La tecnología TaqMan puede ser utilizada para comparar diferencias entre perfiles de expresión de tejidos normales y tejidos enfermos. Se ha utilizado los perfiles de expresión para identificar genes, los cuales están súper o subregulados en una variedad de enfermedades. Una aplicación interesante del perfil de expresión es el monitoreo temporal de cambios en la expresión genética durante la progresión de las enfermedades y el tratamiento con fármacos o en pacientes contra individuos saludables. La premisa en esta metodología es que los cambios en el patrón de expresión genética en respuesta a los estímulos fisiológicos o ambientales (por ejemplo fármacos) pueden servir como pista indirecta acerca de los genes que causan las enfermedades o de los objetivos de los fármacos. Adicionalmente, los efectos de los fármacos con eficacia establecida sobre patrones de expresión genética global pueden proveer una guía, o una firma genética, contra la cual puede compararse el nuevo candidato fármaco.

AdipoR2

La secuencia de nucleótidos de AdipoR2 está accesible en bases de datos públicos mediante el número de acceso NM_024551 y se da en SEQ ID NO: 1. La secuencia de aminoácidos de AdipoR2 está representada en SEQ ID NO:

2.

Los receptores de adiponectina, AdipoR1 y AdipoR2, sirven como receptores para la adiponectina globular y de longitud completa y media las actividades incrementadas de los ligandos AMPK y PPAR-alfa, así como la oxidación de los ácidos grasos y el consumo de glucosa por la adiponectina [Yamauchi et al., (2003) ]. Yamauchi et al. [Yamauchi et al., (2003) ] aisló ADIPOR1 y ADIPOR2 que codifican ADNc por clonación de expresión.

El receptor AdipoR2 está publicado en [Yamauchi et al., (2003) ] y en las patentes WO200190304 y WO200157190.

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1. Un método para diagnosticar una enfermedad comprendida en un grupo de enfermedades consistente de cáncer, en un mamífero que comprende las etapas de

i) determinar la cantidad de un polinucleótido de AdipoR2 en una muestra tomada de dicho mamífero, ii) determinar la cantidad de polinucleótido de AdipoR2 en mamíferos saludables y/o enfermos.

Fig. 1 Fig. 1 (continuación)