CONJUNTO DE MARCADORES PARA LA DETECCIÓN DE METÁSTASIS HEPÁTICA DE CÁNCER COLORRECTAL Y KIT PARA LA DETECCIÓN DE METÁSTASIS HEPÁTICA DE CÁNCER COLORRECTAL.
Conjunto de marcadores para la detección de metástasis hepática de cáncer colorrectal y kit para la detección de metástasis hepática de cáncer colorrectal.
La presente invención hace referencia a un conjunto de marcadores para la detección de metástasis hepática en pacientes con cáncer colorrectal. Este conjunto, que incluye el marcador DCC (18q21.3) ya conocido en la literatura, comprende además los marcadores ASAPl (8q24.1-q24.2), ZMYM2 (13qll-q12), MYBL2 (20q13.1), TDP52L2 (20qtel) y SMAD4 (18q21.1). Opcionalmente también comprende los marcadores MSRI (8p22), TNKS (8p23.1), CYP24A1 (20q13) y/o AURKA (20q13.2-13.3). Este conjunto de marcadores fue elegido a partir de resultados obtenidos mediante varios métodos como el CGHa de baja y alta densidad, el Q-PCR y el FISH, donde los resultados del Q-PCR fueron analizados enfrentando el método absoluto y relativo de éste análisis. Se presenta también un kit para la detección de metástasis hepática en pacientes con cáncer colorrectal que comprende este conjunto de marcadores.
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201000462.
Solicitante: DOMINION PHARMAKINE, SL.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: DE LA HOZ RASTROLLO,ANA BELEN, TOME GARCIA,JESSICA.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
Fragmento de la descripción:
Conjunto de marcadores para la detección de metástasis hepática de cáncer colorrectal y kit para la detección de metástasis hepática de cáncer colorrectal.
Objeto de la invención
La presente invención hace referencia a un conjunto de marcadores para la detección de metástasis hepática en pacientes con cáncer colorrectal.
Este conjunto de marcadores fue elegido a partir de resultados obtenidos mediante varios métodos aplicados a tejidos, y ADN extraído de los mismos, de pacientes con metástasis hepática de cáncer colorrectal, comparado con personas sanas.
Un primer screening mediante arrays de Hibridación Genómica Comparada (CGHa) de baja (287 sondas) y alta densidad (44.000 sondas) proporcionó varias alteraciones numéricas que fueron analizadas posteriormente mediante la reacción en cadena de la DNA polimerasa cuantitativa a tiempo real (Q-PCR) . Los datos de la Q-PCR fueron analizados enfrentando el método absoluto y relativo de éste análisis.
Además los resultados obtenidos mediante las metodologías anteriores fueron validados mediante la técnica de Hibridación In Situ con fluorescencia.
El conjunto de marcadores, que incluye el marcador DCC (18q21.3) ya conocido como un marcador para la detección de metástasis hepática de cáncer colorrectal, comprende además los marcadores MSR1 (8p22) , TNKS (8p23.1) , ASAP1 (8q24.1-q24.2) , ZMYM2 (13q11-q12) , SMAD4 (18q21.1) , TDP52L2 (20qtel) , MYBL2 (20q13.1) , CYP24A1 (20q13) y AURKA (20q13.2-13.3) .
Se presenta también un kit que comprende un conjunto de marcadores que comprende los marcadores MSR1 (8p22) , TNKS (8p23.1) , ASAP1 (8q24.1-q24.2) , ZMYM2 (13q11-q12) , SMAD4 (18q21.1) , DCC (18q21.3) , TDP52L2 (20qtel) , MYBL2 (20q13.1) , CYP24A1 (20q13) y AURKA (20q13.2-13.3) para la detección de alteraciones numéricas, indicando una metástasis hepática en pacientes con cáncer colorrectal mediante técnicas como la CGHa de baja y alta densidad, Q-PCR, FISH y métodos similares.
Antecedentes de la invención
El cáncer, es esencia un proceso genético. Debido a cambios o mutaciones en el ADN, la célula normal pasa a convertirse en una célula cancerosa, a veces, dichas células, mueren o son eliminadas en los ganglios linfáticos, pero, otras veces, siguen con vida y se reproducen de una manera anormal y desordenada. A su vez, debido a estas alteraciones, se ven comprometidos los mecanismos de reparación del ADN lo cual implica que las células cancerosas sean más susceptibles de sufrir nuevas mutaciones.
En algunos casos, las células cancerosas tienden a emigrar a otras regiones, a través de la sangre o de la linfa, y son capaces de sobrevivir en el medio sanguíneo y producir un nuevo crecimiento en un lugar diferente del organismo. A este proceso de propagación de un foco canceroso a un órgano distinto de aquel en que se inició, con capacidad de penetrar en los vasos sanguíneos y linfáticos, diseminarse a través de la circulación sanguínea, y después crecer en tejidos normales del cuerpo se le conoce como metástasis, término denominado así por vez primera por el médico francés Joseph Claude Recamier en 1823. Son las metástasis las responsables de la muerte de los enfermos de cáncer.
El cáncer no es solo una enfermedad sino muchas enfermedades, el término cáncer engloba a más de 200 enfermedades con distintas características genéticas y diferente evolución, incluso se podría decir que un mismo cáncer es distinto en cada individuo. A su vez se trata de una enfermedad multigénica, lo cual complica más el pronóstico y el tratamiento de la enfermedad, ya que cada individuo puede responder de forma distinta a los tratamientos establecidos. La heterogeneidad es la principal característica del cáncer y lo que hace que sea tan complicado curarlo, a la heterogeneidad genética hay que sumarle la influencia del microambiente tumoral. Debido a todos estos factores resulta muy complicado aplicar tratamientos efectivos.
En España, sólo un 54% de los pacientes que sufren un cáncer de colon sobreviven más de 5 años. El cáncer de colon se trata de uno de los que muestran mayor mortalidad, por delante incluso del de pulmón. Entre un 20 y un 30% de los pacientes a los que se diagnostica cáncer de colon presentan metástasis hepática sincrónicas clínicamente demostrables, y entre un 40 y 50% de los pacientes presentan recidiva hepática una vez resecado el tumor primario (Adam et al., 2001) . Actualmente, la resección hepática constituye la única opción terapéutica con intención curativa de los pacientes con metástasis hepática de cáncer de colon, con Indices de supervivencia entre 26 y 45% a los 5 años (Fong et al., 1997; Figueras et al., 2001) . A pesar de ello, la mitad de estos pacientes presentan una recidiva después de la cirugía, que en la mayoría de los casos se produce en los 2 primeros años (Fortner et al., 1984) . En 2006 se cobró la vida de 98.046 personas en España aunque paradójicamente es uno de los más tratables, de forma que un diagnóstico precoz aumente enormemente la probabilidad de curación. Se calcula que hasta un 90% de los casos serian curables si se detectasen a tiempo (aecc) .
Existen diferentes tipos de cáncer colorrectal, por un lado el cáncer colorrectal familiar poliposo (FAP) , siendo entre el 10-12% de los casos, el cáncer colorrectal hereditario no poliposo (HNPCC) o síndrome de Lynch, que abarcan entre el5y8%delos casos y por último el cáncer de colon esporádico siendo este el 80-85% de los casos.
Existen dos vías de carcinogénesis con distinto origen en las neoplasias colorrectales. La primera y la más común, afectando al 85% de los casos se denomina modelo supresor o LOH, y se caracteriza por la acumulación progresiva de alteraciones genéticas que tienen lugar paralelamente a la evolución de la alteración histológica adenoma-cáncer (Fearon y Vogelstein, 1990. Incluye eventos característicos como la anulación funcional de genes supresores tumorales, como APC (5q21-22) , cuya mutación es uno de los eventos más tempranos en el desarrollo del cáncer de colon (Bodmer et al., 1989) .
La segunda vía alternativa (modelo mutador) se caracteriza por la aparición de mutaciones diseminadas por todo el genoma (Ilyas et al. 1996) . Algunas de estas mutaciones ocurren en regiones codificantes de genes implicados en el ciclo celular y en la progresión tumoral. La señal distintiva de esta vía es la alteración de la longitud y composición de pequeñas secuencias de bases del ADN (microsatélites) . Este fenómeno se conoce como inestabilidad de microsatélites (Lothe, 1997) y, aunque también participa en el 15% de los tumores esporádicos, es característico del síndrome de Cáncer Colorrectal Hereditario No Poliposo (CCHPN) los cuales se corresponden con el 2-5% de todos los carcinomas colorrectales.
La gran mayoría de los cánceres de colon se generan a partir de una serie de cambios genéticos, ilustrado esquemáticamente en la Figura 1, en los que están implicadas la activación de oncogenes RAS y la inactivación de genes supresores de tumores como el gen APC en 5q21, P53 en 17p13 así como en 18q (Kinzler y Vogelstein, 1996) . Por lo que debido a esta recurrencia común de mutaciones es asumible el papel de las mutaciones en estos genes como factores contribuyentes a la inestabilidad cromosómica en cáncer colorrectal. (Grady et al., 2008) . La inestabilidad cromosómica (CIN) es el tipo más común de inestabilidad genómica observada en el cáncer de colon, y ocurre en un 80-85% de los tumores colorrectales. A pesar de la alta frecuencia de la inestabilidad cromosómica en el cáncer de colon, y el hecho de que la aneuploidia está considerada como un suceso inherente al cáncer, hasta el momento la predicción del pronóstico de pacientes con metástasis hepática resecadas de cáncer colorrectal continúa siendo problemática. La identificación de sucesos específicos de ganancias y pérdidas de cromosomas que ocurren durante el desarrollo de adenoma a carcinoma y la demostración de que la inestabilidad cromosómica es un evento temprano en la formación del tumor que incrementa su progresión, sugiere que la inestabilidad cromosómica es un fenómeno patogenético en el cáncer de colon. (Grady et al., 2008) .
En cuanto a las deleciones cromosómicas descritas anteriormente para esta patología en concreto, no son útiles como marcadores moleculares ya que implican a grandes regiones del genoma. La gran cantidad de material genético implicado, hace que...
Reivindicaciones:
1. Método in vitro detectar metástasis hepática en pacientes con cáncer colorrectal que comprende:
a) recoger una muestra de tejido colorectal del sujeto
b) detectar y cuantificar en esa muestra de tejido el patrón de expresión de la combinación de marcadores DCC (18q21.3) , ASAP1 (8q24.1-q24.2) , ZMYM2 (13q11-q12) , MYBL2 (2 0q13.1) , TDP52L2 (20qtel) y SMAD4 (18q21.1)
c) comparar los resultados obtenidos en la etapa b) con los valores normales de referencia para dichos genes en dichos tejidos sin capacidad de metástasis hepática.
2. Kit para la detección de metástasis hepática en pacientes con cáncer colorrectal para llevar a cabo él método de la reivindicación 1 que comprende un set de sondas adecuado para la detección del patrón de expresión de la combinación de los marcadores DCC (18q21.3) , ASAP1 (8q24.1-q24.2) , ZMYM2 (13q11-q12) , MYBL2 (20q13.1) , TDP52L2 (20qtel) y SMAD4 (18q21.1) .
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