COMPUESTOS BASADOS EN PÉPTIDOS.

Compuesto que comprende un vector peptídico y al menos un tinte de cianina,

en el que el vector peptídico comprende la secuencia de aminoácidos X3-G-D, en el que el vector peptídico y el al menos un tinte de cianina están acoplados, y en el que el al menos un tinte de cianina comprende 2, 1 o ninguna fracción ácido sulfónico; y en el que

X3 representa arginina,

G representa glicina,

D representa ácido aspártico,

o una sal fisiológicamente aceptable del mismo.

Compuestos basados en péptidos La presente invención se refiere a nuevos compuestos basados en péptidos y a su uso en técnicas de obtención de imágenes para el diagnóstico o para el tratamiento de una enfermedad. Más específicamente, la invención se refiere al uso de dichos compuestos basados en péptidos como vectores direccionadores que se unen a receptores asociados con la angiogénesis. Los compuestos pueden ser usados como agentes de contraste en el diagnóstico de enfermedades relacionadas con la angiogénesis o para el tratamiento de las mismas.

En general, pueden formarse nuevos vasos sanguíneos por medio de dos mecanismos diferentes: vasculogénesis o angiogénesis. La angiogénesis es la formación de nuevos vasos sanguíneos por ramificación desde los vasos existentes. El principal estímulo para este proceso puede ser un suministro insuficiente de nutrientes y oxígeno (hipoxia) a las células en un tejido. Las células pueden responder secretando factores angiogénicos, de los cuales hay muchos; un ejemplo, al que se hace referencia con frecuencia, es el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) . Estos factores inician la secreción de enzimas proteolíticas que descomponen las proteínas de la membrana basal, así como inhibidores que limitan la acción de estas enzimas, potencialmente dañinas. El otro efecto importante de los factores angiogénicos es hacer que las células endoteliales migren y se dividan. Las células endoteliales que están unidas a la membrana basal, que forma una lámina continua alrededor de los vasos sanguíneos en la parte vasolateral, no son sometidas a mitosis. El efecto combinado de la pérdida de unión y señales desde los receptores para factores angiogénicos, es hacer que las células endoteliales se muevan, se multipliquen y se reorganicen ellas mismas, y finalmente, para sintetizar una membrana basal alrededor de los nuevos vasos.

La angiogénesis es importante en el crecimiento y la remodelación de tejidos, incluyendo la cicatrización de heridas y los procedimientos inflamatorios. La inhibición de la angiogénesis es considerada también como una estrategia prometedora para la terapia antitumoral. Las transformaciones que acompañan a la angiogénesis son también muy prometedoras para el diagnóstico, siendo un ejemplo obvio una enfermedad maligna, pero el concepto representa también una gran promesa en la inflamación y en una diversidad de enfermedades relacionadas con la inflamación, incluyendo la aterosclerosis, siendo los macrófagos de lesiones ateroscleróticas tempranas fuentes potenciales de factores angiogénicos. Estos factores están implicados también en la revascularización de partes infartadas del miocardio, que ocurre si una estenosis es liberada en un corto período de tiempo.

A continuación, se muestran ejemplos adicionales de afecciones no deseadas que están asociadas con la neovascularización o la angiogénesis, el desarrollo o la proliferación de nuevos vasos sanguíneos. También se hace referencia, en este sentido, al documento WO 98/47541.

Las enfermedades e indicaciones relacionadas con la angiogénesis son, por ejemplo, las diferentes formas de cáncer y metástasis, por ejemplo, cáncer de mama, de la piel, colorrectal, de páncreas, de próstata de pulmón o de ovario.

Otras enfermedades e indicaciones son inflamación (por ejemplo, crónica) , aterosclerosis, artritis reumatoide y gingivitis.

Enfermedades e indicaciones adicionales asociadas con la angiogénesis son malformaciones arteriovenosas, astrocitomas, coriocarcinomas, glioblastomas, gliomas, hemangiomas (capilar en la infancia) , hepatomas, hiperplasia de endometrio, miocardio isquémico, endometriosis, sarcoma de Kaposi, degeneración macular, melanoma, neuroblastomas, enfermedad arterial periférica oclusiva, artrosis, psoriasis, retinopatía (diabética, proliferativa) , esclerodermia, seminomas y colitis ulcerosa.

La angiogénesis implica receptores que son exclusivos de las células endoteliales y los tejidos circundantes. Estos marcadores incluyen receptores de factores de crecimiento, tales como receptores de la familia de las integrinas y VEGF. Los estudios inmunohistoquímicos han demostrado que una diversidad de integrinas, quizás de manera más importante, la clase av, son expresadas en la superficie apical de los vasos sanguíneos [Conforti, G., et al. (1992) Blood 80: 37-446] y están disponibles para ser direccionados por los ligandos circulantes [Pasqualini, R., et al. (1997) Nature Biotechnology 15: 542-546]. La a5º1 es también una integrina importante en la promoción del ensamblado de la matriz de fibronectina y el inicio de la adhesión celular a fibronectina. También desempeña un papel crucial en la migración celular.

La integrina avº3 es uno de los receptores que se sabe que está asociado con la angiogénesis. Las células endoteliales estimuladas parecen depender de este receptor para la supervivencia durante un período crítico del procedimiento de angiogénesis, ya que los antagonistas de la interacción ligando/receptor de integrina avº3 inducen apoptosis e inhiben el crecimiento de vasos sanguíneos.

Las integrinas son moléculas heterodiméricas en las que las sub-unidades a y º penetran en la bicapa lipídica de la membrana celular. La subunidad a tiene cuatro dominios de unión de Ca2+ en su cadena extracelular, y la subunidad º tiene un número de dominios extracelulares ricos en cisteína.

Muchos ligandos (por ejemplo, fibronectina) implicados en la adhesión celular contienen la secuencia tripeptídica arginina-glicina-ácido aspártico (RGD) . La secuencia RGD parece actuar como un sitio de reconocimiento primario entre los ligandos que presentan esta secuencia y los receptores en la superficie de las células. En general, se cree que las interacciones secundarias entre el ligando y el receptor mejoran la especificidad de la interacción. Estas interacciones secundarias podrían tener lugar entre fracciones del ligando y el receptor que están inmediatamente contiguas a la secuencia RGD o en sitios alejados de la secuencia RGD.

Se conoce que los péptidos RGD se unen a una serie de receptores de integrina y que tienen el potencial para regular una serie de eventos celulares de considerable aplicación en el ámbito clínico. Quizás, el efecto más estudiado de los péptidos RGD y sus miméticos se refiere a su uso como agentes antitrombóticos, donde están dirigidos a la integrina Gpllbllla de plaqueta.

La inhibición de la angiogénesis en los tejidos mediante la administración de cualquiera de entre un antagonista av 3 o av 5 ha sido descrita, por ejemplo, en los documentos WO 97/06791 y WO 95/25543, usando péptidos que contienen RGD o anticuerpos. El documento EP 578083 describe una serie de péptidos que contienen RGD mono-cíclico. Los péptidos RGD cíclicos, que contienen múltiples puentes, han sido descritos también en los documentos WO 98/54347 y WO 95/14714.

Ejemplos adicionales de compuestos basados en péptidos que comprenden RGD se encuentran en los documentos WO01/77145, WO02/26776 y WO 03/006491. El documento WO01/77145 divulga péptidos bicíclicos de tipo RGD conjugados con una fracción indicadora. El documento WO05/003466 divulga además péptidos de tipo RGD conjugados con fluoresceína, para su uso en técnicas de obtención de imágenes ópticas.

Existe una necesidad clínica para el desarrollo de técnicas de obtención de imágenes, no invasivas, más específicas, para enfermedades relacionadas con angiogénesis y para la terapia de dichas enfermedades. Dichas técnicas de obtención de imágenes desempeñarán un papel central en la evaluación de nuevas terapias anti-angiogénicas. La capacidad de evaluación del nivel real de la angiogénesis será clínicamente beneficiosa en el diagnóstico de enfermedades relacionadas con la angiogénesis en una etapa temprana. Pueden usarse técnicas de obtención de imágenes ópticas para evaluar el nivel de angiogénesis, y la invención proporciona nuevos compuestos útiles como agentes de contraste para técnicas de obtención de imágenes ópticas para este propósito.

En vista de las necesidades de la técnica, la invención proporciona compuestos basados en péptidos marcados con tintes de cianina, para su uso como agentes de contraste en un tratamiento terapéutico con técnicas de obtención de imágenes ópticas. La eficiente direccionamiento y obtención de imágenes de los receptores de integrina asociados con la angiogénesis in vivo exige un vector de tipo RGD, de alta afinidad, selectivo, que sea químicamente robusto... [Seguir leyendo]

1. Compuesto que comprende un vector peptídico y al menos un tinte de cianina, en el que el vector peptídico comprende la secuencia de aminoácidos X3-G-D, en el que el vector peptídico y el al menos un tinte de cianina están acoplados, y en el que el al menos un tinte de cianina comprende 2, 1 o ninguna fracción ácido sulfónico;

y en el que X3 representa arginina, G representa glicina, D representa ácido aspártico, o una sal fisiológicamente aceptable del mismo.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el al menos un tinte de cianina es seleccionado de entre los grupos de carbacianinas, oxacianinas, tiacianinas y azacianinas.

3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el al menos un tinte de cianina es un tinte de carbacianina.

4. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, identificado por la fórmula (VI a)

AZ (VI a) en la que A es identificado por la fórmula (VI b) Ra-C (=O) -X1-X2-X3-G-D-X4-X5-X6-X7 (VI b) y Z representa al menos un tinte de cianina, unido a uno o más de entre X1, X6 o X7 de A, comprendiendo el compuesto dos puentes de ciclado, en la que, X3, G y D son tal como se ha definido anteriormente; Ra representa un grupo - (CH2) n- o - (CH2) n-C6H4-, que forma parte de un puente que se une a cualquiera de entre X2, X4 o X6, en la que n representa un número entero positivo de 1 a 10;

X1 representa un enlace o 1, 2, 3, 4 o 5 residuos de aminoácidos, en el que al menos un residuo de aminoácido está funcionalizado opcionalmente con una fracción espaciadora o dicho residuo de aminoácido posee una cadena lateral funcional, tal como un ácido o un grupo amino, X2 y X4 representan, independientemente, residuos de aminoácidos capaces de formar un puente de ciclado, X5 representa un aminoácido hidrófobo o sus derivados, y X6 representa un residuo de aminoácido capaz de formar un puente de ciclado, X7 representa una fracción biomodificadora o espaciadora o está ausente 5. Compuesto según la reivindicación 4, seleccionado de entre una cualquiera de las fórmulas;

en las que Ra, X3, G, D, X5 y X7 son tal como se han definido en la reivindicación 5, y en las que X'1 comprende un residuo de aminoácido con una cadena lateral funcional, tal como un grupo ácido o amino, siendo seleccionado, preferentemente, el aminoácido de entre ácido aspártico o glutámico, homolisina o un ácido diaminoalcílico, tal como lisina o ácido diaminopropiónico, más preferentemente, ácido aspártico o lisina;

X'2, X'4 y X'6 representan residuos de aminoácidos que forman un enlace tioéter o disulfuro, W1 es una fracción espaciadora o está ausente, h es un entero positivo de 1 o 2, y en las que al menos uno de los grupos Z está presente, representando Z un tinte de cianina.

6. Compuesto de fórmula VII según la reivindicación 5, en el que Ra representa - (CH2) -.

25 7. Compuesto de fórmula VII según las reivindicaciones 5 ó 6, en el que X'1 representa un residuo de aminoácido con una cadena lateral funcional, tal como un grupo amino o ácido, siendo seleccionado el aminoácido de entre ácido aspártico, ácido glutámico, homolisina, lisina o ácido diaminopropiónico.

8. Compuesto de fórmula VII según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que X'2, X'4 y X'6 representan, independientemente, un residuo de cisteína o de homocisteína.

30 9. Compuesto de fórmula VII según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en el que X5 representa fenilalanina, tirosina 3-yodo-tirosina o naftialanina.

10. Compuesto de fórmula VII según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que X7 comprende 1-10 unidades de un bloque de construcción PEG monodispersado o está ausente.

11. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, en el que los tintes de cianina Z están unidos a 35 uno o más de entre X'1, W1, X6 o X7 a través de una amida, sulfonamida o un enlace tioéter.

12. Composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con uno o más adyuvantes, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

13. Compuestos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para su uso como un agente de contraste en técnicas de obtención de imágenes ópticas.

14. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la fabricación de un agente de contraste para técnicas de obtención de imágenes ópticas para su uso en un procedimiento de diagnóstico que implica la administración de dicho agente de contraste al cuerpo de un ser humano o un animal y la generación de una imagen de al menos parte de dicho cuerpo.

15. Procedimiento de generación de imágenes del cuerpo de un ser humano o un animal, que implica la generación de una imagen de al menos una parte de dicho cuerpo, al cual se ha administrado previamente un agente de contraste, caracterizado porque dicho agente de contraste comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.

18. Procedimiento de supervisión del efecto del tratamiento del cuerpo de un ser humano o un animal con un fármaco para combatir una afección asociada con la angiogénesis, implicando dicho procedimiento la detección de la captación, por parte de los receptores de las células, de una composición o compuesto administrado previamente según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, siendo realizadas dicha administración previa y dicha detección, opcionalmente, pero preferentemente, de manera repetida, por ejemplo, antes, durante y después del tratamiento con dicho compuesto o composición.