Compuesto que comprende un péptido autoantigénico y un portador con un motivo de unión a CMH.

Compuesto que consiste en (a) un péptido y (b) un portador, en el que

a.

dicho péptido tiene al menos un motivo seleccionado del grupo que consiste en A-G-F-K-G-E-A, A-A-A-K-A-A-A eI-A-G-F-K-G-E-Q-G-P-K-G, en el que al menos un residuo de aminoácido K que es hidroxilisina está glicosilado, y

b. dicho portador comprende al menos la región variable de una molécula de CMH de clase II que está unida a dichopéptido.

Compuesto que comprende un péptido autoantigénico y un portador con un motivo de unión a CMH.

Campo de invención

La invención se refiere a un compuesto que comprende (a) un péptido y (b) un portador, en el que dicho péptido tiene al menos el motivo indicado en las reivindicaciones, en el que al menos un residuo de lisina está glicosilado, estando unido dicho péptido a la proteína de unión a péptido y dicho portador comprende al menos una región variable de CMH de clase II que se une a dicho péptido así como composiciones farmacéuticas que comprenden dicho compuesto y el uso de dicho compuesto o composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad, tal como una enfermedad inflamatoria de las articulaciones.

El documento WO-A-01036448 (Cell-Sci. Corp.) da a conocer conjugados de CMH con diferentes péptidos relacionados con enfermedades autoinmunitarias y su uso en la terapia de dichas enfermedades autoinmunitarias.

Antecedentes de la invención

Hay una población creciente de seres humanos que padecen diferentes clases de enfermedades inflamatorias de las articulaciones. Enfermedades, que algunas veces son imposibles de curar, en las que el tratamiento es de por vida y en las que los síntomas a menudo empeoran durante los años. Hasta la fecha, el foco del tratamiento ha sido intentar encontrar compuestos que reduzcan los síntomas pero no curar la enfermedad o hacer que la enfermedad decaiga.

Un ejemplo de una enfermedad de este tipo es la artritis reumatoide (AR) , que se caracteriza por inflamación crónica de los tejidos sinoviales articulares iniciada por la infiltración de leucocitos (principalmente neutrófilos, macrófagos y células T) y la secreción de citocinas inflamatorias (TNF-alfa, IFN-gamma, IL-1, IL-6) , quimiocinas y enzimas destructoras tales como metaloproteinasas de la matriz. Se cree que la activación de células T es un factor patógeno importante en la enfermedad aunque no se ha identificado aún su papel exacto y su potencial como diana terapéutica. La activación anómala de células T, sin embargo, se produce lo más probablemente años antes del diagnóstico clínico de la enfermedad ya que los anticuerpos de IgG dependientes de células T específicos para Fc de inmunoglobulinas (es decir, factores reumatoides) y los epítopos proteicos citrulinados son altamente predictivos para la enfermedad (1, 2) . De manera importante, el riesgo de desarrollar artritis aumenta drásticamente en individuos que tanto tienen tales anticuerpos como expresan determinadas moléculas de CMH de clase II, que comparten un bolsillo peptídico específico, el denominado epítopo compartido del CMH (3, 4) . La región de CMH de clase II también es el factor genético conocido más fuerte asociado con AR. Conjuntamente, estos hallazgos sostienen un papel patógeno de células T autorreactivas restringidas por CMH de clase II. Sin embargo, ha sido difícil identificar una especificidad única de tales células T, aunque se ha notificado reactividad de células T frente a varios autoantígenos, tales como BiP, RA33 y GPI y también antígenos específicos de articulaciones tales como colágeno de tipo II (CII) (5-8) .

Puesto que no hay modo ninguno de curar enfermedades inflamatorias de las articulaciones en la actualidad, hay una necesidad de desarrollar un modo para curar la enfermedad.

Sumario de la invención

El objeto de la presente invención es solucionar el problema comentado anteriormente en relación con enfermedades inflamatorias de las articulaciones.

Se ha encontrado sorprendentemente que mediante el uso de un compuesto que comprende (a) un péptido y (b) un portador, en el que dicho péptido tiene al menos los motivos mostrados en las reivindicaciones, en el que al menos un residuo de lisina está glicosilado, estando unido dicho péptido a la proteína de unión a péptido y dicho portador comprende al menos una región variable de CMH de clase II variable que está unida a dicho péptido, es posible por primera vez reducir y/o eliminar una enfermedad inflamatoria de las articulaciones. De ese modo, un mamífero que padece una enfermedad de este tipo se curará o al menos se reducirá la enfermedad.

Adicionalmente, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto así como el uso de dicho compuesto para el tratamiento de un trastorno o enfermedad inflamatoria, tal como artritis, artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, artritis psoriásica, osteoartritis, policondritis recidivante y enfermedad de Menieres

En una realización específica, dicho compuesto se usa para vacunar a un mamífero y de ese modo curar o prevenir un trastorno o enfermedad inflamatoria.

Se describirán en más detalle ventajas y objetos adicionales con la presente invención, entre otros con referencia a los dibujos adjuntos.

Descripción de los dibujos

La figura 1 muestra que complejos de péptido/Aq activan hibridomas de células T específicos de antígeno. (A) hibridoma HCQ.3, específico para el epítopo GalOK264 CII259-273; (B) hibridoma HCQ.4, específico para el epítopo (K264) CII259-273 no modificado.

La figura 2 muestra una prueba cruzada de especificidades de hibridomas de células T para complejos de pépti-do/Aq. (A) Hibridoma HCQ.3, específico para el epítopo GalOK264 CII259-273; (B) Hibridoma HCQ.4, específico para el epítopo (K264) CII259-273 no modificado.

La figura 3 muestra que complejos de GalOK264/Aq suprimen el desarrollo de CIA. (A) Incidencia de artritis (porcentaje de ratones afectados) ; (B) puntuación clínica media de la gravedad de la artritis incluyendo ratones tanto artríticos como sanos; (C) niveles séricos de IgG anti-CII. Todos los datos representan la media ± D.E. de 10 ratones por grupo. *, p<0, 05; **, p<0, 01 y ***, p<0, 001.

La figura 4 muestra que complejos de GalOK264/Aq reducen la progresión de la artritis en un estadio crónico. (A) Puntuación de artritis media durante 202 días de los ratones crónicos elegidos para el tratamiento; (B) puntuación clínica media de ratones tratados con GalOK264/Aq tras la reinmunización; (C) niveles séricos de IgG anti-CII.

La figura 5 muestra que la transferencia de células T desde ratones tratados con GalOK264/Aq proporcionaba protección frente al desarrollo de CA. (A) Puntuación clínica media de artritis tras la transferencia de células T; (B) niveles séricos de IgG anti-CII.

La figura 6 muestra que el tratamiento con GalOK264/Aq bloqueaba la progresión de la artritis en ratones F1 H2q/r.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

En el contexto de la presente solicitud e invención, se aplican las siguientes definiciones:

El término “molécula de CMH de clase II” pretende significar una proteína que consiste en una cadena alfa y una beta, codificada a partir de dos genes distintos. Esta proteína normalmente está unida a la superficie celular sobre las denominadas células presentadoras de antígeno (APC) y sirve como receptor para péptidos. El péptido se une a un sitio específico, el sitio de unión a péptido, en la molécula de CMH y la estructura proteica resultante (el péptido unido a la molécula de CMH de clase II de dos cadenas) se reconoce por el receptor de células T. Esta interacción es el acontecimiento molecular y específico de antígeno crucial en la respuesta inmunitaria y se ha descrito bien. El término “motivo de unión a CMH” pretende significar los aminoácidos de la región variable, (es decir, polimórfica) de una molécula de CMH de clase II, que puede entrar en contacto y unirse al péptido de la invención en el sitio de unión a péptido. La región variable de una molécula de CMH de clase II se define como los primeros residuos de aminoácido 1-90 de la cadena alfa y la beta en la forma observada sobre la superficie celular. El término “región variable en la molécula de CMH” pretende significar el primer dominio de las cadenas tanto alfa como beta que abarcan cada una los aminoácidos 1-90.

El término “región constante en una molécula de Ig o CMH” pretende significar la parte de la molécula de CMH de clase II que no es parte de los dominios/regiones variables.

El término “portador” pretende significar un compuesto, tal como una proteína, que puede unirse al péptido... [Seguir leyendo]

1. Compuesto que consiste en (a) un péptido y (b) un portador, en el que

a. dicho péptido tiene al menos un motivo seleccionado del grupo que consiste en A-G-F-K-G-E-A, A-A-A-K-A-A-A e I-A-G-F-K-G-E-Q-G-P-K-G, en el que al menos un residuo de aminoácido K que es hidroxilisina está glicosilado, y

b. dicho portador comprende al menos la región variable de una molécula de CMH de clase II que está unida a dicho péptido.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho residuo de aminoácido K en dicho péptido se reemplaza por hidroxinorvalina.

3. Compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho al menos un residuo de aminoácido en dicho péptido está glicosilado O-unido.

4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el residuo de aminoácido F en dicho péptido se reemplaza por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en A, C, D, E, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W y Y.

5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el residuo de aminoácido E en dicho péptido se reemplaza por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en A, C, D, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W y Y.

6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el residuo de aminoácido Q en dicho péptido se reemplaza por E.

7. Compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho péptido (a) comprende 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 residuos de aminoácido.

8. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho portador comprende la región variable de una molécula de CMH de clase II seleccionada del grupo que consiste en DRB1*0401/DRA, DRB1*0402/DRA, DRB1*0403/DRA, DRB1*0404/DRA, DRB1*0405/DRA, DRB1*0406/DRA, DRB1*0407/DRA, DRB1*0408/DRA, DRB1*0409/DRA, DRB1*0410/DRA, DRB1*0101/DRA, DRB1*0102/DRA DRB1*1001/DRA y DRB1*1002/DRA.

9. Compuesto según la reivindicación 8, en el que dicha región variable comprende un péptido que tiene el 80%, preferiblemente el 90%, más preferiblemente el 95% de identidad con la secuencia polipeptídica en su longitud completa mostrada en SEQ ID NO 1 y un segundo polipéptido que tiene el 80%, preferiblemente el 90%, más preferiblemente el 95% de identidad en su longitud completa con la secuencia polipeptídica mostrada en SEQ ID NO 2.

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho péptido (a) está covalentemente unido a dicho portador (b) .

11. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho portador comprende una región constante que está unida a dicho motivo de unión a CMH.

12. Compuesto según la reivindicación 11, en el que dicha región constante se selecciona del grupo que consiste en la región constante de una molécula de CMH de clase II o una inmunoglobulina.

13. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicha región constante comprende un péptido que tiene el 80%, preferiblemente el 90%, más preferiblemente el 95% de identidad con la secuencia polipeptídica en su longitud completa mostrada en SEQ ID NO 3 y un segundo polipéptido que tiene el 80%, preferiblemente el 90%, más preferiblemente el 95% de identidad en su longitud completa con la secuencia polipeptídica mostrada en SEQ ID NO 4.

14. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores y un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.

15. Composición farmacéutica según la reivindicación 14, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria de las articulaciones.

16. Composición farmacéutica según la reivindicación 15, para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en artritis, artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, artritis psoriásica, osteoartritis, policondritis recidivante y enfermedad de Menieres.