Composiciones y métodos que utilizan ARN de interferencia de un gen del tipo OPR3 para el control de nematodos.

La invención se refiere al control de los nemátodos. Se divulgan aquí métodos para la producción de plantas transgénicas con mayor resistencia a los nemátodos, vectores de expresión que contienen polinucleótidos que confieren resistencia a los nemátodos, y plantas transgénicas y las semillas generadas de los mismas.

Los nemátodos son gusanos microscópicos que se alimentan de las raíces, las hojas y los tallos de más de 2.000 cultivos en hileras, vegetales, frutos y plantas ornamentales, causando un estimado de $ 100 mil millones en pérdidas de cultivos en todo el mundo. Una variedad de especies de nemátodos parásitos infectan a las plantas de cultivo, incluyendo los nemátodos agalladores (RKN) , nemátodos formadores de quistes y formadores de lesiones. Los nemátodos agalladores, que se caracterizan por causar la formación de agallas en la raíz en los sitios de alimentación, tienen una gama relativamente amplia de huéspedes y por tanto son patógenas en un gran número de especies de cultivo. Las especies de nemátodos formadores de lesiones y de quistes tienen una gama más limitada de huéspedes, pero aún así causan pérdidas considerables en los cultivos susceptibles.

Los nemátodos patógenos están presentes en todo Estados Unidos, presentándose las mayores concentraciones en las regiones húmedas y cálidas del Sur y el oeste y en suelos arenosos. Los nemátodos formadores de quistes de la soja (Heterodera glycines) , la plaga más grave de las plantas de soja, fue descubierta por primera vez en los Estados Unidos en Carolina del Norte en 1954. Algunas áreas están tan fuertemente infestadas por el nemátodo formador de quistes de la soya (SCN) que la producción de soja ya no es económicamente posible sin la utilización de medidas de control. Aunque la soja es el cultivo más importante económicamente que es atacado por SCN, SCN parasita a unos cincuenta huéspedes en total, incluidos cultivos de campo, vegetales, plantas ornamentales y malezas.

Los signos de daño causado por nemátodos incluyen retraso del crecimiento y amarillamiento de las hojas y el marchitamiento de las plantas durante los períodos cálidos. Sin embargo, la infestación por nemátodos puede causar pérdidas significativas de rendimiento sin ningún tipo de síntomas de la enfermedad obvias por encima del suelo. Las principales causas de reducción del rendimiento se deben a daño de las raíces por debajo del suelo. Las raíces infectadas por el SCN se ven empequeñecidas o atrofiadas. La infestación por nemátodos también puede disminuir el número de nódulos fijadores de nitrógeno en las raíces, y puede volver a las raíces más susceptibles a los ataques por parte de otros patógenos de las plantas transmitidos por el suelo.

El ciclo de vida de los nemátodos tiene tres grandes etapas: huevo, juvenil, y adulta. El ciclo de vida varía entre las especies de nemátodos. Por ejemplo, el ciclo de vida del SCN por lo general se puede completar en 24 a 30 días en condiciones óptimas mientras que otras especies pueden llegar a tardar hasta un año o más, para completar el ciclo de vida. Cuando los niveles de temperatura y humedad son favorables en la primavera, los gusanos eclosionan del huevo como jóvenes en el suelo. Sólo los nemátodos en la etapa de desarrollo juvenil son capaces de infectar las raíces de la soja.

El ciclo de vida del SCN ha sido objeto de muchos estudios, y como tales, son un ejemplo útil para comprender el ciclo de vida de los nemátodos. Después de penetrar las raíces de la soja, los SCN en etapa juvenil se mueven a través de la raíz hasta que se ponen en contacto con el tejido vascular, momento en el que dejan de migrar y comienzan a alimentarse. Con un estilete, el nemátodo inyecta secreciones que modifican ciertas células de la raíz y las transforman en sitios de alimentación especializados. Las células de la raíz se transforman morfológicamente en grandes sincitios multinucleados (o en células gigantes en el caso del RKN) , que se utilizan como fuente de nutrientes para los nemátodos. Los nemátodos se alimentan activamente robando así nutrientes esenciales de la planta lo que resulta en la pérdida de rendimiento. A medida que se alimentan los nemátodos hembra, se hinchan y eventualmente se hacen tan grandes que sus cuerpos romper el tejido de la raíz y quedan expuestos sobre la superficie de la raíz.

Después de un período de alimentación, los nemátodos SCN machos, que no están hinchados cuando son adultos, migrar fuera de la raíz hacia el suelo y fecundar a las hembras adultas agrandadas. Los machos mueren entonces, mientras que las hembras permanecen adheridas al sistema de raíces y continúan alimentándose. Los huevos en las hembras hinchadas comenzar a desarrollarse, en un principio en una masa o saco de huevos fuera del cuerpo, y luego dentro de la cavidad corporal del nemátodo. Eventualmente, toda la cavidad corporal de la hembra adulta está llena de huevos, y muere el nemátodo. Es el cuerpo lleno de huevo de la hembra muerta lo que se conoce como el quiste. Los quistes eventualmente desalojan y se encuentran libres en el suelo. Las paredes del quiste se hacen muy duros, proporcionando una excelente protección para los aproximadamente 200 a 400 huevos que contiene. Los huevos del SCN sobreviven dentro del quiste hasta que se presentan condiciones adecuadas para eclosionar. Aunque muchos de los huevos pueden eclosionar durante el primer año, muchos de ellos también sobreviven dentro de los quistes protectores durante varios años.

Un nemátodo puede moverse a través del suelo únicamente unas pocas pulgadas por año por sus propios medios. Sin embargo, la infestación por nemátodos se puede propagar a distancias significativas en una variedad de maneras. Cualquier cosa que pueda mover el suelo infestado es capaz de propagar la infestación, incluida la maquinaria agrícola, vehículos y herramientas, viento, agua, animales, y los trabajadores agrícolas. Partículas de suelo del tamaño de las semillas a menudo contaminan la semilla cosechada. En consecuencia, la infestación por nemátodos se puede propagar cuando la semilla contaminada de los campos infestados se siembra en campos no infestados. Incluso, existe evidencia de que ciertas especies de nemátodos pueden ser transmitidas por las aves. Sólo algunas de estas causas se pueden prevenir.

Las prácticas tradicionales de manejo de la infestación por nemátodos incluyen: el mantenimiento de los nutrientes adecuados del suelo y los niveles de pH del suelo infestado con nemátodos; el control de otras enfermedades de las plantas, así como de las plagas de insectos y de malezas; utilización de prácticas de saneamiento tales como el arado, la siembra y el cultivo de los campos infestados con nemátodos sólo después de trabajar los campos no infestados; limpieza a fondo de los equipos con agua a alta presión o vapor de agua después de trabajar en los campos infestados; no utilizar semillas cultivadas en tierras infestadas para la siembra de los campos no infestados a menos que la semilla haya sido adecuadamente limpiada; rotación de los campos infestados y alternando los cultivos hospederos con cultivos no hospederos; uso de nematicidas; y plantación de variedades de plantas resistentes.

Se han propuesto métodos para la transformación genética de las plantas a fin de conferirles mayor resistencia a los nemátodos que parasitan las plantas. Las patentes de los Estados Unidos Nos. 5.589.622 y 5.824.876 están dirigidas a la identificación de los genes de las plantas que se expresan específicamente en o en forma adyacente al sitio de alimentación de la planta después de la fijación por el nemátodo. Los promotores de estos genes objetivo de las plantas pueden entonces ser utilizados para dirigir la expresión específica de proteínas o enzimas perjudiciales, o la expresión de ARN antisentido al gen objetivo o a genes de la célula en general. Los promotores de la planta también pueden ser utilizados para conferir resistencia a los nemátodos específicamente en el sitio de alimentación mediante la transformación de la planta con un constructo que comprende al promotor del gen objetivo de la planta ligado a un gen cuyo producto induce letalidad en el nemátodo después de la ingestión.

Recientemente se ha propuesto al ARN de interferencia (ARNi) , también denominado como el silenciador de genes, como un método para controlar los nemátodos. Cuando el ARN bicatenario (ARN bicatenario) correspondiente esencialmente a la secuencia de... [Seguir leyendo]

1. El uso de una molécula de ARN bicatenario que comprende i) una primera cadena que contiene una secuencia al menos 80% idéntica a 20 o más nucleótidos contiguos de una porción de un gen tipo OPR3, y ii) una segunda cadena que contiene una secuencia complementaria al menos sobre el 80% de sus nucleótidos con la primera cadena, en donde la porción del gen tipo OPR3 es de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

para la generación de plantas transgénicas resistentes a la infestación por nemátodos.

2. El uso de una reserva de moléculas de ARN bicatenario que comprende una multiplicidad de moléculas de ARN cada una conteniendo una región bicatenaria que tiene una longitud de 19 a 24 nucleótidos, en donde dichas moléculas de ARN bicatenario se derivan de una porción de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29; y d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene 90% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

para la generación de plantas transgénicas resistentes a la infestación por nemátodos.

3. Una planta transgénica resistente a los nemátodos capaz de expresar un ARN bicatenario que es al menos 80% idéntico a 20 o más nucleótidos contiguos de una porción de un gen tipo OPR3, en donde la porción del gen tipo OPR3 es de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30.

4. La planta transgénica resistente a los nemátodos de la reivindicación 3, en donde el ARN bicatenario comprende una multiplicidad de moléculas de ARN cada una conteniendo una región bicatenaria que tiene una longitud de 19 a 24 nucleótidos, en donde dichas moléculas de ARN se derivan de una porción de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29; y d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30.

5. La planta transgénica de la reivindicación 3 ó 4, en donde la planta se selecciona entre el grupo que consiste de maíz, trigo, cebada, sorgo, centeno, triticale, arroz, caña de azúcar, árboles de cítricos, piña, coco, plátano, café, té, tabaco, girasol, guisantes, alfalfa, soja, zanahoria, apio, tomate, patata, algodón, tabaco, berenjena, pimiento, colza, canola, remolacha, col, coliflor, brócoli, lechuga, Lotus sp., Medicago truncatula, gramíneas perennes, raigrás, y Arabidopsis thaliana.

6. Un método para elaborar una planta transgénica resistente a los nemátodos capaz de expresar un ARN bicatenario que inhibe la expresión de un gen objetivo tipo OPR3 en la planta, dicho método comprende las etapas de i) preparar un ácido nucleico que tiene una región que es al menos 80% idéntica a 20 o más nucleótidos contiguos de una porción del tipo OPR3, en donde el ácido nucleico es capaz de formar una transcripción bicatenaria una vez expresada en la planta; ii) transformar una planta receptora con dicho ácido nucleico; iii) producir uno o más descendientes transgénicos de dicha planta receptora; y iv) seleccionar el descendiente para la expresión de dicha transcripción, en donde la porción del gen objetivo es de 19 a 500 nucleótidos de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30.

7. El método de la reivindicación 6, en donde el ARN bicatenario comprende una multiplicidad de moléculas de ARN cada una conteniendo una región bicatenaria que tiene una longitud de 19 a 24 nucleótidos, en donde dichas moléculas de ARN se derivan de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29; y d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30.

8. El método de la reivindicación 6 ó 7, en donde la planta se selecciona entre el grupo que consiste de soja, patata, tomate, maní, algodón, mandioca, café, coco, piña, árboles de cítricos, plátano, maíz, colza, remolacha, girasol, sorgo, trigo, avena, centeno, cebada, arroz, judías verdes, habas, guisantes, y tabaco.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde el ARN bicatenario se expresa en las raíces de la planta o en los sitios de alimentación del nemátodo.

10. Un método para conferir resistencia a los nemátodos a una planta, dicho método comprendiendo las etapas de:

a) preparar un ácido nucleico que codifica una molécula de ARN bicatenario que tiene una región que es al menos 80% idéntica a 20 o más nucleótidos contiguos de una porción de un gen tipo OPR3, en donde el ácido nucleico es capaz de formar una transcripción bicatenaria de una porción de un gen tipo OPR3 una vez expresado en la planta, en donde la porción del gen tipo OPR3 es de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

b) transformar una planta receptora con dicho ácido nucleico;

c) producir uno o más descendientes transgénicos de dicha planta receptora; y d) seleccionar la descendencia para resistencia a los nemátodos.

11. Un método para controlar la infección de una planta por un nemátodo parásito, que comprende las etapas de transformar la planta con un ácido nucleico que codifica una molécula de ARN bicatenario operativamente enlazada a un promotor preferido del sitio de alimentación del nemátodo, inducible por el nemátodo o preferido de la raíz, mediante el cual el ARN bicatenario que contiene una cadena que es al menos 80% idéntica a 20 o más nucleótidos contiguos de una porción de un ácido nucleico objetivo esencial para la formación, desarrollo o soporte del sitio de alimentación, en particular la formación, desarrollo o soporte de sincitios o células gigantes, controlando así la infección de la planta por parte del nemátodo removiendo o incapacitando funcionalmente el sitio de alimentación, los sincitios o las células gigantes, en donde al ácido nucleico objetivo es un gen del tipo OPR3, en donde la porción del gen tipo OPR3 es de un polinucleótido seleccionado entre el grupo que consiste de:

a) un polinucleótido que comprende una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

b) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30;

c) un polinucleótido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polinucleótido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 1, 2 ó 29;

d) un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad de secuencia con un polipéptido que tiene una secuencia como la expuesta en las SEQ ID NOs: 3 ó 30.

Figura 1

Nombre del gen Especie SEQ ID NO: ADNc parcial de 45174942 Glycine max Fragmento sentido de 45174942 Glycine max Traducción del ADN parcial de 45174942 Glycine max Promotor tipo TPP Arabidopsis thaliana Promotor At5g12170 Arabidopsis thaliana Promotor tipo MtN3 Glycine max ADN de tomate Q9FEW9 Lycopersicon esculentum Proteína de tomate Q9FEW9 Lycopersicon esculentum ADN de Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana Proteína de Arabidopsis At2g06050 Arabidopsis thaliana ADN de Hevea AAY27752 Hevea brasiliensis Proteína Hevea AAY27752 Hevea brasiliensis ADN de Or y za EAZ42984 Or y za sativa Proteína de Or y za EAZ42984 Or y za sativa ADN de Zea AAY26527 Zea mays Proteína de Zea AAY26527 Zea mays ADN de Zea AAY26528 Zea mays Proteína de Zea AAY26528 Zea mays ADN de Arachis EG030595 Arachis hypogaea Proteína de Arachis EG030595 Arachis hypogaea ADN de patata TA29350_4113 Solanum tuberosum Proteína de patata TA29350_4113 Solanum tuberosum ADN de Prunus TA4283_3760 Prunus persica Proteína de Prunus TA4283_3760 Prunus persica ADN de Gossypium TA23750_3635 Gossypium hirsutum Proteína de Gossypium TA23750_3635 Gossypium hirsutum ADN de Coffea TA7248_49390 Coffea canephora Proteína de Coffea TA7248_49390 Coffea canephora ADN tipo GmOPR3 de longitud completa Glycine max Proteína tipo GmOPR3 de longitud completa Glycine max

Figura 2a

Tipo GmOPR3 EG030595 Arachis AAY27752 Hevea At2g06050_Arabidopsis Q9FEW9_tomate TA29350 4113_patata TA23750_3635_Gossypium TA4283 - 3760- Prunus TA7248 - 49390- Coffea AAY26528 Zea AAY26527 Zea EAZ42984_0r y za Tipo GmOPR3 EG030595 Arachis AAY27752 Hevea At2g06050_Arabidopsis Q9FEW9_tomate TA29350_4113_patata TA23750 3635_Gossypium TA4283 3760 Prunus TA7248- 49390- Coffea AAY26528 Zea AAY26527 Zea EAZ42984_0r y za Tipo GmOPR3 EG030595 Arachis AAY27752 Hevea At2g06050_Arabidopsis Q9FEW9_tomate TA29350_4113_patata TA23750 3635_Gossypium TA4283 3760 Prunus TA7248 49390 Coffea AAY26528 Zea AAY26527 Zea EAZ42984_0r y za

(1) - -----------MADN-SISLFSPYNKMGKFNLSHRVVLAPMTRCRALNG (1) - -----------MADNESSSLFSAY-KMAKFSLSHRVVLAPMTRCRALNG (1) - ------MAETGTEGTGITTLFSPY-KMGKFSLSHRVVLAPMTRCRALNG (1) - --------MTAAQGNSNETLFSSY-KMGRFDLSHRVVLAPMTRCRALNG (1) - --------MASSAQDGNNPLFSPY-KMGKFNLSHRVVLAPMTRCRALNN (1) - ----MAKTTSSSAQDGSNPLFSPY-KMAKFNLSHRIVLAPMTRCRALNN (1) - --MEHGEKVKMADSQETPTLFSPY-KMGKFNLSHRVVLAPMTRCRALNG (1) - ---------MAEASSQGPTLFSPF-KMGKFNLSHRVVLAPMTRCRALNG (1) - -------MAETKSDQGSPSLFSPY-KMGKFNLSHRVVLAPMTRCRAINS (1) MASTDRSAPAEDQQQPQRPSLFSPY-QMPHFRLAHRVVLAPMTRCRAPDA (1) MASTDRSTPAEDEQQQKRPSLFSPY-QMPRFRLAHRVVLAPMTRCRAPDA (1) - ----MDRPPPDQQRQKQAPLFSPY-QMPRFRLNHRVVLAPMTRCRAIGG (38) TPLAAHAEYYAQRSTPGGFLITEGTLISPTSSGFPHVPGIYSDEQVEAWR (38) IPRAAHAEYYAQRSTPGGFLITEGTLISPTAPGFPHVPGIYSEEQVEAWR (43) IPNAALVDYYTQRSTPGGFLITEGTLVSPTAPGFPHVPGIYTEEQAEAWK (41) VPNAALAEYYAQRTTPGGFLISEGTMVSPGSAGFPHVPGIYSDEQVEAWK (41) IPQAALGEYYEQRATAGGFLITEGTMISPTSAGFPHVPGIFTKEQVREWK (45) IPSAALGEYYEQRATAGGFLITEGTMISPTSAGFPHVPGIFTKEQVEEWK (47) IPRPALAEYYTQRSTPGGFLITEGTLISDTGAGFPHVPGIYNEEQVEAWK (40) LPQPALAEYYTQRSTNGGFLITEGTLVSDTGAGFPHVPGIYNDEQVEAWK (42) IPQPAMAEYYAQRATNGGFLITEGTMISPSAAGFPHVPGIFTKEQVEAWK (50) LPGPALAEYYAQRSTEGGLLISEGTIISPAGPGFPRVPGIYNQEQTDAWK (50) VPGPALAEYYAQRSTDGGLLISEGTIISPSGPGFPRVPGIYNQEQTDAWR (45) VPGPALAEYYAQRTTQGGLLISEGTVVSPAGPGFPHVPGIYNQEQTDAWK (88) NVVDAVHANGSFIFCQLWHVGRASHPVYQPGGALPSSSTSKPIS-DKWKI (88) NVVDAVHAKGSFIFCQLWHAGRASHPVYQPGAAPPISSTNKAIS-SRWRI (93) RVVDAVHAKGSIIFCQLWHVGRASHQVYQPNGAAPISSTGKAIS-NRWRI (91) QVVEAVHAKGGFIFCQLWHVGRASHAVYQPNGGSPISSTNKPISENRWRV (91) KIVDVVHAKGAVIFCQLWHVGRASHEVYQPAGAAPISSTEKPIS-NRWRI (95) KIVDVVHAKGAVIFCQLWHVGRASHEVYQPAGAAPISSTEKPIS-KRWRI (97) MIVDAVHAKGGIIFCQLWHVGRASHTVYQPGGVAPISSTNKPIS-KRWRI (90) KVVDAVHAKGAIIFCQLWHVGRASHEVYQPGGGSPISSTDVPIS-RRWRI (92) QVVDAVHAKGAIIFCQLWHVGRASHEVYQPGGGAPISSTGKPIS-KRWRI (100) KVVDAVHAKGAIFFCQLWHVGRASHQVYQPGGSAPISSTDKPIS-SRWRI (100) KVVDAVHAKGAIFFCQLWHVGRASHQVYQPGAAAPISSTDKPIS-SRWRI (95) KVVDAVHAKGGIFFCQLWHVGRASHQVYQPNGAAPISSTDKPIS-ARWRI

Figura 2b

Tipo GmOPR3 (137) LMPDGSHGIYPEPRALTTS-EISEIVHHYRQAAINAIRAGFDGIEIHGAH EG030595 Arachis (137) LLPDQSYGVYPEPRPLDSS-EIPQIVDHYRQSAVNAIRAGFDGIEIHGAH AAY27752 Hevea (142) LMPDGSYGKYPTPRPLETP-EILEVVKNYRQSALNAIRAGFDGIEVHGAH At2g06050_Arabidopsis (141) LLPDGSHVKYPKPRALEAS-EIPRVVEDYCLSALNAIRAGFDGIEIHGAH Q9FEW9_tomate (140) LMPDGTHGIYPKPRAIGTY-EISQVVEDYRRSALNAIEAGFDGIEIHGAH TA29350 4113_patata (144) LMPDGTHGIYPKPRAIGTY-EISQVVEDYCRSALNAIEAGFDGIEIHGAH TA23750_3635_Gossypium (146) LMPDGSYGIYPKPRPLETS-EIQEVVEHYRKAALNAIRAGFDGIEIHGAH TA4283 3760 Prunus (139) LLPDASHATYPKPRRLETP-EILQVVEHYRQAALNAIRAGFDGIEIHGAH TA7248 - 49390 - Coffea (141) LMPDGSHGIYPKPRPLTTAHEIAQVVEDYRQSALNAIEAGFDGIEIHGAH AAY26528 Zea (149) LMPDGSYGKYPTPRRLATS-EIPEIVEQYRQAAINAIKAGFDGIEIHGAH AAY26527 Zea (149) LMPDGSYGKYPTPRRLATS-EIPEIVEQYRQAAVNAIKAGFDGIEIHGAH EAZ42984_0r y za (144) LMPDGSYGKYPKPRRLAAS-EIPEIVEQYRQAAINAIEAGFDGIEIHGAH Tipo GmOPR3 (186) GYLIDQFLKDAINDRTDEYGGPLENRCRFLMEVVEAVVSAIGAERVAIRI EG030595 Arachis (186) GYLIDQFLKDGINERRDEYGGSISNRCRFLMQVVKAVVSAIGAERVGVRI AAY27752 Hevea (191) GYLIDQFLKDGINDRTDEYGGSINNRCRFLMQVIQAVVAAIGADRVGFRM At2g06050_Arabidopsis (190) GYLIDQFLKDGINDRTDQYGGSIANRCRFLKQVVEGVVSAIGASKVGVRV Q9FEW9_tomate (189) GYLIDQFLKDGINDRTDEYGGSLANRCKFITQVVQAVVSAIGADRVGVRV TA29350_4113_patata (193) GYLIDQFLKDGINDRTDEYGGSLANRCKFITQVVQAVISAIGADRVGVRV TA23750_3635_Gossypium (195) GYLIDQFLKDGINDRTDEYGGSLANRCKFLMQIVQAVASAIGIDRVAVRM TA4283- 3760- Prunus (188) GYLIDQFLKDGINDRTDEYGGSLANRCKFLLQVVQAVVGAVGADRVGVRI TA7248- 49390- Coffea (191) GYLIDQFLKDGINDRTDEYGGSVANRCKFIVQVVQAVVSAIGADRVGVRI AAY26528 Zea (198) GYLIDQFLKDGINDRADEYGGSLSNRCRFLLEVTRAVVSAIGADRVAVRV AAY26527 Zea (198) GYLIDQFLKGGINDRTDEYGGSLSNRCRFLLEVTRAVVSAIGADRVAVRV EAZ42984_0r y za (193) GYIIDQFLKDGINDRTDEYGGSLSNRCRFLLEVTRAVVSAIGADRVAVRI Tipo GmOPR3 (236) SPAIDFNDAFDSDPLGLGLAVIERLNNLQKQVGTKLAYLHVTQPRFTLLA EG030595 Arachis (236) SPAIDHLDAMDSDPL----------------------------------AAY27752 Hevea (241) SPAIDHLDAIDSDPLNLGLAVIERLNKLQLNLGSKLTYLHVTQPRYTAYG At2g06050_Arabidopsis (240) SPAIDHLDATDSDPLSLGLAVVGMLNKLQGVNGSKLAYLHVTQPRYHAYG Q9FEW9_tomate (239) SPAIDHLDAMDSNPLSLGLAVVERLNKIQLHSGSKLAYLHVTQPRYVAYG TA29350_4113_patata (243) SPAIDHLDAMDSNPLSLGLAVVERLNKIQLHSGSKLAYLHVTQPRYVAYG TA23750_3635_Gossypium (245) SPAIDHLDATDSNPLNLGLAVIERLNKLQLQLGSKLAYLHVTQPRYHAYG TA4283_3760_Prunus (238) SPAIDHLDAVDSAPLTLSLGVIERLNKLQQDWGSKLTYLHVTQPRYAAYG TA7248 49390_Coffea (241) SPAIDHLDAMDSDPLSLGLAVIERLNELQLNSGSKLTYLHVTQPRYTAYG AAY26528_Zea (248) SPAIDHLDAYDSNPLQLGLAVVDRLNALQEETG-RLAYLHVTQPRYTAYG AAY26527_Zea (248) SPAIDHLDAYDSNPLQLGLAVVERLNALQQEAG-RLAYLHVTQPRYTAYG EAZ42984_0r y za (243) SPAIDHLDAYDSDPIKLGMAVVERLNALQQQSG-RLAYLHVTQPRYTAYG

Figura 2c

Tipo GmOPR3 (286) QTESV---SEKEEAHFMQKWREAYEGTFMCSGAFTRDSGMEAVAEGHADL EG030595 Arachis (251) ----------------------------------------------------------------------------------------------------AAY27752 Hevea (291) QTESGRHGTEEEEARLMRTWRRAYKGTFICSGGFTRELGMEAIAQDDADL At2g06050_Arabidopsis (290) QTESGRQGSDEEEAKLMKSLRMAYNGTFMSSGGFNKELGMQAVQQGDADL Q9FEW9_tomate (289) QTEAGRLGSEEEEARLMRTLRNAYQGTFICSGGYTRELGIEAVAQGDADL TA29350 4113_patata (293) QTEAGRLGSEEEEAHLMRTLRNAYQGTFICSGGYTRELGIEAVAQGDADL TA23750_3635_Gossypium (295) QTESGKHGNEDEEAYLLRALKRTYHGTFMCSGGFNRELGMQAVAEGDADL TA4283 3760 Prunus (288) QTESGKPGSDEEEAVFMRTLRNAYRGTFVASGGYTRELGIHAVASRDADL TA7248 - 49390 - Coffea (291) QTEAGRQGSEEEEAQLVRTLRKAYQGTFISSGGFTRELGVEAVAQGDADL AAY26528 Zea (297) QTESGQHGS~EEESRLMRALRGAYRGTFMCSGGYTRELGVEAVESWDADL AAY26527 Zea (297) QTESGQHGSAEEESRLMRAVRGAYRGTFMCSGGYTRELGVEAIESGDADL EAZ42984_0r y za (292) QTESGQHGSAEEESRLMRTLRGTYQGTFMCSGGYTRELGLEAVESGDADL Tipo GmOPR3 (333) VSYGRLFISNPDLVLRLKLNAPLTKYNRNTFYTQDPVIGYTDYPFFNGTT EG030595 Arachis (251) -----------------------------------------------------------------------------------------------AAY27752 Hevea (341) VSYGRLFISNPDLVLRFKLNAPLNKYVRKTFYTQDPVVGYTDYPFFRKVD At2g06050_Arabidopsis (340) VSYGRLFIANPDLVSRFKIDGELNKYNRKTFYTQDPVVGYTDYPFLAPF-Q9FEW9_tomate (339) VSYGRLFISNPDLVMRIKLNAPLNKYNRKTFYTQDPVVGYTDYPFLQGNG TA29350_4113_patata (343) VSYGRLFISNPDLVMRIKLNAPLNKYNRKTFYTQDPVVGYTDYPFLQGNG TA23750_3635_Gossypium (345) VSYGRLFISNPDLVFRLKVNAPLNRYIRKTFYTHDPVVGYTDYPFLNEEK TA4283- 3760- Prunus (338) VSYGRLFISNPDLVLRLKLNAPLTRYNRKTFYTQDPVVGYTDYPFLSNAN TA7248- 49390- Coffea (341) VSYGRLFISNPDLVLRFKLNAPLIRYNRSTFYTHDPVVGYTDYPFLSNGT AAY26528 Zea (347) VSYGRLFIANPDLVERFRRDAPLNRYVRKTFYTPDPVVGYTDYPFLGQ--AAY26527 Zea (347) VSYGRLFIANPDLVERFRRDAPLNKYVRKTFYTPDPVVGYTDYTFLGQ-- EAZ42984_0r y za (342) VSYGRLFISNPDLVERFRLNAGLNKYVRKTFYTPDPVVGYTDYPFLGQ--Tipo GmOPR3 (383) ET--KLSN-------------- EG030595 Arachis (251) ---------------------------AAY27752 Hevea (391) GSQEPRSRL--------At2g06050_Arabidopsis (389) ------SRL--------------Q9FEW9_tomate (389) SNG-PLSRL----------TA29350_4113_patata (393) SNG-PLSRL----------TA23750_3635_Gossypium (395) GRQV-LSRL-----------TA4283_3760_Prunus (388) GKEEPLSRL-----------TA7248 49390_Coffea (391) SGNVPQSRL---------AAY26528_Zea (395) ----PKARM------------- AAY26527_Zea (395) ----PKARM------------- EAZ42984_0r y za (390) ----PKSRM-------------

Figura 3: Porcentaje global de identidad de aminoácidos entre ejemplos de los genes tipo OPR3 Figura 4: Porcentaje global de identidad de nucleótidos entre ejemplos de genes tipo OPR3

Figura 5a

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 1 a 21 31 a 51 61 a 81 91 a 111 121 a 141 2 a 22 32 a 52 62 a 82 92 a 112 122 a 142 3 a 23 33 a 53 63 a 83 93 a 113 123 a 143 4 a 24 34 a 54 64 a 84 94 a 114 124 a 144 5 a 25 35 a 55 65 a 85 95 a 115 125 a 145 6 a 26 36 a 56 66 a 86 96 a 116 126 a 146 7 a 27 37 a 57 67 a 87 97 a 117 127 a 147 8 a 28 38 a 58 68 a 88 98 a 118 128 a 148 9 a 29 39 a 59 69 a 89 99 a 119 129 a 149 10 a 30 40 a 60 70 a 90 100 a 120 130 a 150 11 a 31 41 a 61 71 a 91 101 a 121 131 a 151 12 a 32 42 a 62 72 a 92 102 a 122 132 a 152 13 a 33 43 a 63 73 a 93 103 a 123 133 a 153 14 a 34 44 a 64 74 a 94 104 a 124 134 a 154 15 a 35 45 a 65 75 a 95 105 a 125 135 a 155 16 a 36 46 a 66 76 a 96 106 a 126 136 a 156 17 a 37 47 a 67 77 a 97 107 a 127 137 a 157 18 a 38 48 a 68 78 a 98 108 a 128 138 a 158 19 a 39 49 a 69 79 a 99 109 a 129 139 a 159 20 a 40 50 a 70 80 a 100 110 a 130 140 a 160 21 a 41 51 a 71 81 a 101 111 a 131 141 a 161 22 a 42 52 a 72 82 a 102 112 a 132 142 a 162 23 a 43 53 a 73 83 a 103 113 a 133 143 a 163 24 a 44 54 a 74 84 a 104 114 a 134 144 a 164 25 a 45 55 a 75 85 a 105 115 a 135 145 a 165 26 a 46 56 a 76 86 a 106 116 a 136 146 a 166 27 a 47 57 a 77 87 a 107 117 a 137 147 a 167 28 a 48 58 a 78 88 a 108 118 a 138 148 a 168 29 a 49 59 a 79 89 a 109 119 a 139 149 a 169 30 a 50 60 a 80 90 a 110 120 a 140 150 a 170

Figura 5b

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 151 a 171 181 a 201 211 a 231 241 a 261 271 a 291 152 a 172 182 a 202 212 a 232 242 a 262 272 a 292 153 a 173 183 a 203 213 a 233 243 a 263 273 a 293 154 a 174 184 a 204 214 a 234 244 a 264 274 a 294 155 a 175 185 a 205 215 a 235 245 a 265 275 a 295 156 a 176 186 a 206 216 a 236 246 a 266 276 a 296 157 a 177 187 a 207 217 a 237 247 a 267 277 a 297 158 a 178 188 a 208 218 a 238 248 a 268 278 a 298 159 a 179 189 a 209 219 a 239 249 a 269 279 a 299 160 a 180 190 a 210 220 a 240 250 a 270 280 a 300 161 a 181 191 a 211 221 a 241 251 a 271 281 a 301 162 a 182 192 a 212 222 a 242 252 a 272 282 a 302 163 a 183 193 a 213 223 a 243 253 a 273 283 a 303 164 a 184 194 a 214 224 a 244 254 a 274 284 a 304 165 a 185 195 a 215 225 a 245 255 a 275 285 a 305 166 a 186 196 a 216 226 a 246 256 a 276 286 a 306 167 a 187 197 a 217 227 a 247 257 a 277 287 a 307 168 a 188 198 a 218 228 a 248 258 a 278 288 a 308 169 a 189 199 a 219 229 a 249 259 a 279 289 a 309 170 a 190 200 a 220 230 a 250 260 a 280 290 a 310 171 a 191 201 a 221 231 a 251 261 a 281 291 a 311 172 a 192 202 a 222 232 a 252 262 a 282 292 a 312 173 a 193 203 a 223 233 a 253 263 a 283 293 a 313 174 a 194 204 a 224 234 a 254 264 a 284 294 a 314 175 a 195 205 a 225 235 a 255 265 a 285 295 a 315 176 a 196 206 a 226 236 a 256 266 a 286 296 a 316 177 a 197 207 a 227 237 a 257 267 a 287 297 a 317 178 a 198 208 a 228 238 a 258 268 a 288 298 a 318 179 a 199 209 a 229 239 a 259 269 a 289 299 a 319 180 a 200 210 a 230 240 a 260 270 a 290 300 a 320

Figura 5c

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 301 a 321 331 a 351 361 a 381 391 a 411 421 a 441 302 a 322 332 a 352 362 a 382 392 a 412 422 a 442 303 a 323 333 a 353 363 a 383 393 a 413 423 a 443 304 a 324 334 a 354 364 a 384 394 a 414 424 a 444 305 a 325 335 a 355 365 a 385 395 a 415 425 a 445 306 a 326 336 a 356 366 a 386 396 a 416 426 a 446 307 a 327 337 a 357 367 a 387 397 a 417 427 a 447 308 a 328 338 a 358 368 a 388 398 a 418 428 a 448 309 a 329 339 a 359 369 a 389 399 a 419 429 a 449 310 a 330 340 a 360 370 a 390 400 a 420 430 a 450 311 a 331 341 a 361 371 a 391 401 a 421 431 a 451 312 a 332 342 a 362 372 a 392 402 a 422 432 a 452 313 a 333 343 a 363 373 a 393 403 a 423 433 a 453 314 a 334 344 a 364 374 a 394 404 a 424 434 a 454 315 a 335 345 a 365 375 a 395 405 a 425 435 a 455 316 a 336 346 a 366 376 a 396 406 a 426 436 a 456 317 a 337 347 a 367 377 a 397 407 a 427 437 a 457 318 a 338 348 a 368 378 a 398 408 a 428 438 a 458 319 a 339 349 a 369 379 a 399 409 a 429 439 a 459 320 a 340 350 a 370 380 a 400 410 a 430 440 a 460 321 a 341 351 a 371 381 a 401 411 a 431 441 a 461 322 a 342 352 a 372 382 a 402 412 a 432 442 a 462 323 a 343 353 a 373 383 a 403 413 a 433 443 a 463 324 a 344 354 a 374 384 a 404 414 a 434 444 a 464 325 a 345 355 a 375 385 a 405 415 a 435 445 a 465 326 a 346 356 a 376 386 a 406 416 a 436 446 a 466 327 a 347 357 a 377 387 a 407 417 a 437 447 a 467 328 a 348 358 a 378 388 a 408 418 a 438 448 a 468 329 a 349 359 a 379 389 a 409 419 a 439 449 a 469 330 a 350 360 a 380 390 a 410 420 a 440 450 a 470

Figura 5d

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 451 a 471 481 a 501 511 a 531 541 a 561 571 a 591 452 a 472 482 a 502 512 a 532 542 a 562 572 a 592 453 a 473 483 a 503 513 a 533 543 a 563 573 a 593 454 a 474 484 a 504 514 a 534 544 a 564 574 a 594 455 a 475 485 a 505 515 a 535 545 a 565 575 a 595 456 a 476 486 a 506 516 a 536 546 a 566 576 a 596 457 a 477 487 a 507 517 a 537 547 a 567 577 a 597 458 a 478 488 a 508 518 a 538 548 a 568 578 a 598 459 a 479 489 a 509 519 a 539 549 a 569 579 a 599 460 a 480 490 a 510 520 a 540 550 a 570 580 a 600 461 a 481 491 a 511 521 a 541 551 a 571 581 a 601 462 a 482 492 a 512 522 a 542 552 a 572 582 a 602 463 a 483 493 a 513 523 a 543 553 a 573 583 a 603 464 a 484 494 a 514 524 a 544 554 a 574 584 a 604 465 a 485 495 a 515 525 a 545 555 a 575 585 a 605 466 a 486 496 a 516 526 a 546 556 a 576 586 a 606 467 a 487 497 a 517 527 a 547 557 a 577 587 a 607 468 a 488 498 a 518 528 a 548 558 a 578 588 a 608 469 a 489 499 a 519 529 a 549 559 a 579 589 a 609 470 a 490 500 a 520 530 a 550 560 a 580 590 a 610 471 a 491 501 a 521 531 a 551 561 a 581 591 a 611 472 a 492 502 a 522 532 a 552 562 a 582 592 a 612 473 a 493 503 a 523 533 a 553 563 a 583 593 a 613 474 a 494 504 a 524 534 a 554 564 a 584 594 a 614 475 a 495 505 a 525 535 a 555 565 a 585 595 a 615 476 a 496 506 a 526 536 a 556 566 a 586 596 a 616 477 a 497 507 a 527 537 a 557 567 a 587 597 a 617 478 a 498 508 a 528 538 a 558 568 a 588 598 a 618 479 a 499 509 a 529 539 a 559 569 a 589 599 a 619 480 a 500 510 a 530 540 a 560 570 a 590 600 a 620

Figura 5e

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 601 a 621 631 a 651 661 a 681 691 a 711 721 a 741 602 a 622 632 a 652 662 a 682 692 a 712 722 a 742 603 a 623 633 a 653 663 a 683 693 a 713 723 a 743 604 a 624 634 a 654 664 a 684 694 a 714 724 a 744 605 a 625 635 a 655 665 a 685 695 a 715 725 a 745 606 a 626 636 a 656 666 a 686 696 a 716 726 a 746 607 a 627 637 a 657 667 a 687 697 a 717 727 a 747 608 a 628 638 a 658 668 a 688 698 a 718 728 a 748 609 a 629 639 a 659 669 a 689 699 a 719 729 a 749 610 a 630 640 a 660 670 a 690 700 a 720 730 a 750 611 a 631 641 a 661 671 a 691 701 a 721 731 a 751 612 a 632 642 a 662 672 a 692 702 a 722 732 a 752 613 a 633 643 a 663 673 a 693 703 a 723 733 a 753 614 a 634 644 a 664 674 a 694 704 a 724 734 a 754 615 a 635 645 a 665 675 a 695 705 a 725 735 a 755 616 a 636 646 a 666 676 a 696 706 a 726 736 a 756 617 a 637 647 a 667 677 a 697 707 a 727 737 a 757 618 a 638 648 a 668 678 a 698 708 a 728 738 a 758 619 a 639 649 a 669 679 a 699 709 a 729 739 a 759 620 a 640 650 a 670 680 a 700 710 a 730 740 a 760 621 a 641 651 a 671 681 a 701 711 a 731 741 a 761 622 a 642 652 a 672 682 a 702 712 a 732 742 a 762 623 a 643 653 a 673 683 a 703 713 a 733 743 a 763 624 a 644 654 a 674 684 a 704 714 a 734 744 a 764 625 a 645 655 a 675 685 a 705 715 a 735 745 a 765 626 a 646 656 a 676 686 a 706 716 a 736 746 a 766 627 a 647 657 a 677 687 a 707 717 a 737 747 a 767 628 a 648 658 a 678 688 a 708 718 a 738 748 a 768 629 a 649 659 a 679 689 a 709 719 a 739 749 a 769 630 a 650 660 a 680 690 a 710 720 a 740 750 a 770

Figura 5f

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 751 a 771 781 a 801 811 a 831 841 a 861 871 a 891 752 a 772 782 a 802 812 a 832 842 a 862 872 a 892 753 a 773 783 a 803 813 a 833 843 a 863 873 a 893 754 a 774 784 a 804 814 a 834 844 a 864 874 a 894 755 a 775 785 a 805 815 a 835 845 a 865 875 a 895 756 a 776 786 a 806 816 a 836 846 a 866 876 a 896 757 a 777 787 a 807 817 a 837 847 a 867 877 a 897 758 a 778 788 a 808 818 a 838 848 a 868 878 a 898 759 a 779 789 a 809 819 a 839 849 a 869 879 a 899 760 a 780 790 a 810 820 a 840 850 a 870 880 a 900 761 a 781 791 a 811 821 a 841 851 a 871 881 a 901 762 a 782 792 a 812 822 a 842 852 a 872 882 a 902 763 a 783 793 a 813 823 a 843 853 a 873 883 a 903 764 a 784 794 a 814 824 a 844 854 a 874 884 a 904 765 a 785 795 a 815 825 a 845 855 a 875 885 a 905 766 a 786 796 a 816 826 a 846 856 a 876 886 a 906 767 a 787 797 a 817 827 a 847 857 a 877 887 a 907 768 a 788 798 a 818 828 a 848 858 a 878 888 a 908 769 a 789 799 a 819 829 a 849 859 a 879 889 a 909 770 a 790 800 a 820 830 a 850 860 a 880 890 a 910 771 a 791 801 a 821 831 a 851 861 a 881 891 a 911 772 a 792 802 a 822 832 a 852 862 a 882 892 a 912 773 a 793 803 a 823 833 a 853 863 a 883 893 a 913 774 a 794 804 a 824 834 a 854 864 a 884 894 a 914 775 a 795 805 a 825 835 a 855 865 a 885 895 a 915 776 a 796 806 a 826 836 a 856 866 a 886 896 a 916 777 a 797 807 a 827 837 a 857 867 a 887 897 a 917 778 a 798 808 a 828 838 a 858 868 a 888 898 a 918 779 a 799 809 a 829 839 a 859 869 a 889 899 a 919 780 a 800 810 a 830 840 a 860 870 a 890 900 a 920

Figura 5g

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 901 a 921 931 a 951 961 a 981 991 a 1011 1021 a 1041 902 a 922 932 a 952 962 a 982 992 a 1012 1022 a 1042 903 a 923 933 a 953 963 a 983 993 a 1013 1023 a 1043 904 a 924 934 a 954 964 a 984 994 a 1014 1024 a 1044 905 a 925 935 a 955 965 a 985 995 a 1015 1025 a 1045 906 a 926 936 a 956 966 a 986 996 a 1016 1026 a 1046 907 a 927 937 a 957 967 a 987 997 a 1017 1027 a 1047 908 a 928 938 a 958 968 a 988 998 a 1018 1028 a 1048 909 a 929 939 a 959 969 a 989 999 a 1019 1029 a 1049 910 a 930 940 a 960 970 a 990 1000 a 1020 1030 a 1050 911 a 931 941 a 961 971 a 991 1001 a 1021 1031 a 1051 912 a 932 942 a 962 972 a 992 1002 a 1022 1032 a 1052 913 a 933 943 a 963 973 a 993 1003 a 1023 1033 a 1053 914 a 934 944 a 964 974 a 994 1004 a 1024 1034 a 1054 915 a 935 945 a 965 975 a 995 1005 a 1025 1035 a 1055 916 a 936 946 a 966 976 a 996 1006 a 1026 1036 a 1056 917 a 937 947 a 967 977 a 997 1007 a 1027 1037 a 1057 918 a 938 948 a 968 978 a 998 1008 a 1028 1038 a 1058 919 a 939 949 a 969 979 a 999 1009 a 1029 1039 a 1059 920 a 940 950 a 970 980 a 1000 1010 a 1030 1040 a 1060 921 a 941 951 a 971 981 a 1001 1011 a 1031 1041 a 1061 922 a 942 952 a 972 982 a 1002 1012 a 1032 1042 a 1062 923 a 943 953 a 973 983 a 1003 1013 a 1033 1043 a 1063 924 a 944 954 a 974 984 a 1004 1014 a 1034 1044 a 1064 925 a 945 955 a 975 985 a 1005 1015 a 1035 1045 a 1065 926 a 946 956 a 976 986 a 1006 1016 a 1036 1046 a 1066 927 a 947 957 a 977 987 a 1007 1017 a 1037 1047 a 1067 928 a 948 958 a 978 988 a 1008 1018 a 1038 1048 a 1068 929 a 949 959 a 979 989 a 1009 1019 a 1039 1049 a 1069 930 a 950 960 a 980 990 a 1010 1020 a 1040 1050 a 1070

Figura 5h

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 1051 a 1071 1081 a 1101 1111 a 1131 1141 a 1161 1171 a 1191 1052 a 1072 1082 a 1102 1112 a 1132 1142 a 1162 1172 a 1192 1053 a 1073 1083 a 1103 1113 a 1133 1143 a 1163 1173 a 1193 1054 a 1074 1084 a 1104 1114 a 1134 1144 a 1164 1174 a 1194 1055 a 1075 1085 a 1105 1115 a 1135 1145 a 1165 1175 a 1195 1056 a 1076 1086 a 1106 1116 a 1136 1146 a 1166 1176 a 1196 1057 a 1077 1087 a 1107 1117 a 1137 1147 a 1167 1177 a 1197 1058 a 1078 1088 a 1108 1118 a 1138 1148 a 1168 1178 a 1198 1059 a 1079 1089 a 1109 1119 a 1139 1149 a 1169 1179 a 1199 1060 a 1080 1090 a 1110 1120 a 1140 1150 a 1170 1180 a 1200 1061 a 1081 1091 a 1111 1121 a 1141 1151 a 1171 1181 a 1201 1062 a 1082 1092 a 1112 1122 a 1142 1152 a 1172 1182 a 1202 1063 a 1083 1093 a 1113 1123 a 1143 1153 a 1173 1183 a 1203 1064 a 1084 1094 a 1114 1124 a 1144 1154 a 1174 1184 a 1204 1065 a 1085 1095 a 1115 1125 a 1145 1155 a 1175 1185 a 1205 1066 a 1086 1096 a 1116 1126 a 1146 1156 a 1176 1186 a 1206 1067 a 1087 1097 a 1117 1127 a 1147 1157 a 1177 1187 a 1207 1068 a 1088 1098 a 1118 1128 a 1148 1158 a 1178 1188 a 1208 1069 a 1089 1099 a 1119 1129 a 1149 1159 a 1179 1189 a 1209 1070 a 1090 1100 a 1120 1130 a 1150 1160 a 1180 1190 a 1210 1071 a 1091 1101 a 1121 1131 a 1151 1161 a 1181 1191 a 1211 1072 a 1092 1102 a 1122 1132 a 1152 1162 a 1182 1192 a 1212 1073 a 1093 1103 a 1123 1133 a 1153 1163 a 1183 1193 a 1213 1074 a 1094 1104 a 1124 1134 a 1154 1164 a 1184 1194 a 1214 1075 a 1095 1105 a 1125 1135 a 1155 1165 a 1185 1195 a 1215 1076 a 1096 1106 a 1126 1136 a 1156 1166 a 1186 1196 a 1216 1077 a 1097 1107 a 1127 1137 a 1157 1167 a 1187 1197 a 1217 1078 a 1098 1108 a 1128 1138 a 1158 1168 a 1188 1198 a 1218 1079 a 1099 1109 a 1129 1139 a 1159 1169 a 1189 1199 a 1219 1080 a 1100 1110 a 1130 1140 a 1160 1170 a 1190 1200 a 1220

Figura 5i

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, ó una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 1201 a 1221 1231 a 1251 1261 a 1281 1291 a 1311 1321 a 1341 1202 a 1222 1232 a 1252 1262 a 1282 1292 a 1312 1322 a 1342 1203 a 1223 1233 a 1253 1263 a 1283 1293 a 1313 1323 a 1343 1204 a 1224 1234 a 1254 1264 a 1284 1294 a 1314 1324 a 1344 1205 a 1225 1235 a 1255 1265 a 1285 1295 a 1315 1325 a 1345 1206 a 1226 1236 a 1256 1266 a 1286 1296 a 1316 1326 a 1346 1207 a 1227 1237 a 1257 1267 a 1287 1297 a 1317 1327 a 1347 1208 a 1228 1238 a 1258 1268 a 1288 1298 a 1318 1328 a 1348 1209 a 1229 1239 a 1259 1269 a 1289 1299 a 1319 1329 a 1349 1210 a 1230 1240 a 1260 1270 a 1290 1300 a 1320 1330 a 1350 1211 a 1231 1241 a 1261 1271 a 1291 1301 a 1321 1331 a 1351 1212 a 1232 1242 a 1262 1272 a 1292 1302 a 1322 1332 a 1352 1213 a 1233 1243 a 1263 1273 a 1293 1303 a 1323 1333 a 1353 1214 a 1234 1244 a 1264 1274 a 1294 1304 a 1324 1334 a 1354 1215 a 1235 1245 a 1265 1275 a 1295 1305 a 1325 1335 a 1355 1216 a 1236 1246 a 1266 1276 a 1296 1306 a 1326 1336 a 1356 1217 a 1237 1247 a 1267 1277 a 1297 1307 a 1327 1337 a 1357 1218 a 1238 1248 a 1268 1278 a 1298 1308 a 1328 1338 a 1358 1219 a 1239 1249 a 1269 1279 a 1299 1309 a 1329 1339 a 1359 1220 a 1240 1250 a 1270 1280 a 1300 1310 a 1330 1340 a 1360 1221 a 1241 1251 a 1271 1281 a 1301 1311 a 1331 1341 a 1361 1222 a 1242 1252 a 1272 1282 a 1302 1312 a 1332 1342 a 1362 1223 a 1243 1253 a 1273 1283 a 1303 1313 a 1333 1343 a 1363 1224 a 1244 1254 a 1274 1284 a 1304 1314 a 1334 1344 a 1364 1225 a 1245 1255 a 1275 1285 a 1305 1315 a 1335 1345 a 1365 1226 a 1246 1256 a 1276 1286 a 1306 1316 a 1336 1346 a 1366 1227 a 1247 1257 a 1277 1287 a 1307 1317 a 1337 1347 a 1367 1228 a 1248 1258 a 1278 1288 a 1308 1318 a 1338 1348 a 1368 1229 a 1249 1259 a 1279 1289 a 1309 1319 a 1339 1349 a 1369 1230 a 1250 1260 a 1280 1290 a 1310 1320 a 1340 1350 a 1370

Figura 5j

posiciones de los nucleótidos de 21 mers de un polinucleótido de codificación tipo OPR3 de la SEQ ID NO. 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, o una secuencia de polinucleótidos que codifica un homólogo tipo OPR3 1351 a 1371 1381 a 1401 1352 a 1372 1382 a 1402 1353 a 1373 1383 a 1403 1354 a 1374 1384 a 1404 1355 a 1375 1385 a 1405 1356 a 1376 1386 a 1406 1357 a 1377 1387 a 1407 1358 a 1378 1388 a 1408 1359 a 1379 1389 a 1409 1360 a 1380 1390 a 1410 1361 a 1381 1391 a 1411 1362 a 1382 1392 a 1412 1363 a 1383 1393 a 1413 1364 a 1384 1394 a 1414 1365 a 1385 ….. .. …. 1366 a 1386 ….. .. …. 1367 a 1387 n-5 a n+15 1368 a 1388 n-4 a n+16 1369 a 1389 n-3 a n+17 1370 a 1390 n-2 a n+18 1371 a 1391 n-1 a n+19 1372 a 1392 n a n+20 1373 a 1393 1374 a 1394 1375 a 1395 1376 a 1396 1377 a 1397 1378 a 1398 1379 a 1399 1380 a 1400

n = número total de nucleótidos de la longitud completa de un polinucleótido de codificación del tipo OPR3 - 20 Por ejemplo: n = 1390 (= 1410 - 20) para la SEQ ID NO: 1; n = 1171 (= 1191 - 20) para la SEQ ID NO: 7; n = 1156 (= 1176 - 20) para la SEQ ID NO: 9; n = 1180 (= 1200 - 20) para las SEQ ID NOs: 11, 15, 17 y 27; n = 1165 (= 1185 - 20) para la SEQ ID NO: 13; n = 742 (= 762 - 20) para la SEQ ID NO: 19; n = 1183 (= 1203 - 20) para la SEQ ID NO: 21; n = 1171 (= 1191 - 20) para la SEQ ID NO: 23; n = 1189 (= 1209 - 20) para la SEQ ID NO: 25; n = 1394 (= 1414 - 20) para la SEQ ID NO: 29