Una composición adecuada para el uso como un componente de generación de señales en un inmunoensayo,

que comprende: un vehículo revestido con un aminodextrano, teniendo un promedio la densidad del revestimiento de aminodextrano de al menos 45 μg por miligramo de vehículo y teniendo incorporado en el mismo, a una concentración de al menos 0, 065 mmol por gramo de vehículo, un complejo que tiene la fórmula:

M (L1) x (L2) y, en la que M es un metal seleccionado del grupo que consiste en europio, terbio, disprosio, samario, osmio y rutenio;

L1 es un ligando seleccionado del grupo que consiste en DPP, TOPO, TPPO; L2 comprende un ligando que tiene la fórmula

Fórmula 1 en la que R es uno o más sustituyentes, comprendiendo cada sustituyente un grupo donante de electrones;

n ≥ 2-10; x ≥ 1-2; e y ≥ 2-4.

Composiciones para el uso como un componente de generación de señales y métodos para usar las mismas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere generalmente a composiciones útiles como componentes de generación de señales en inmunoensayos. En particular, la invención se refiere a composiciones que proporcionan simultáneamente una señal fuerte así como una especificidad mejorada para los analitos de interés.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los reactivos de inmunoensayo tienen una funcionalidad que puede romperse en dos componentes amplios: una funcionalidad de generación de señales (también conocida como de amplificación) y una funcionalidad de unión a un ligando. La funcionalidad de generación de señales se requiere para la detección de la unión del ligando al analito, y la funcionalidad de unión al ligando es la especificidad del reactivo para el analito. La actividad de unión al ligando se lleva a cabo enlazando covalentemente los ligandos a la superficie de partículas. Anticuerpos y haptenos pequeños de significación biológica, tales como tiroxina, son ejemplos de ligandos comunes.

Se han usado mucho composiciones fluorescentes y quimioluminiscentes en componentes de generación de señales de inmunoensayos. Un componente de generación de señales típico incluye un vehículo, tal como una partícula de látex, teñido con una composición fluorescente o quimioluminiscente. En particular, se han usado mucho quelatos metálicos como colorantes fluorescentes y quimioluminiscentes debido a su desplazamiento de Stokes generalmente grande, pico de emisión agudo y larga longitud de onda de emisión. Típicamente, los quelatos metálicos son un complejo formado por un metal, tal como europio, samario o terbio, y ligandos tales como tiofenotrifluorobutanodiona (TTA) , nafiltriflurobutanodiona (NTA) y 4, 7-difenil-1, 10-fenantrolina (DPP) , óxido de trioctilfosfina (TOPO) , óxido de trifenilfosfina (TPPO) . Algunos quelatos metálicos comúnmente usados incluyen Eu (TTA) 3DPP y Eu (NTA) 3DPP.

Los vehículos teñidos que se usan para elaborar reactivos de ensayo deben tener tanto la capacidad para proporcionar generación de señales como la funcionalidad química para el enlace covalente de los ligandos. El procedimiento usado para enlazar los ligandos puede ser crítico para la calidad de la especificidad de la funcionalidad de unión a ligandos. La especificidad de los ligandos puede estar comprometida de varios modos por las elecciones inapropiadas de la química de enlace. Por ejemplo, si se produce adsorción pasiva de los ligandos simultáneamente con enlace covalente, los ligandos adsorbidos pasivamente pueden desprenderse del vehículo durante el ensayo. El ligando libre resultante interferirá con el ensayo y reducirá su sensibilidad. Otro problema que puede presentarse es la unión no específica del reactivo al otro vehículo, lo que conduce a una elevación de la señal de inmunoensayo en ausencia de analito.

Los ligandos a menudo están enlazados a partículas de poliestireno a través de grupos carboxi que están enlazados directamente a la superficie de las partículas. Este planteamiento puede tener ambos problemas descritos anteriormente. Los problemas de adsorción pasiva y unión no específica pueden evitarse introduciendo una o más capas de polímeros de hidrogel inmovilizados, tales como aminodextrano, entre las partículas de poliestireno y los ligandos. Es importante para la eliminación de la adsorción y la unión no específica tener una capa continua de estos polímeros de hidrogel.

Sin embargo, el revestimiento de partículas que están teñidas con colorantes convencionales tales como Eu (TTA) 3DPP o Eu (NTA) 3DPP típicamente da como resultado densidades de revestimiento de aminodextrano que son significativamente menores que las óptimas para prevenir la unión no específica. La densidad de acoplamiento del aminodextrano se reduce típicamente un 40-50% desde su máximo cuando estos colorantes se añaden al nivel óptimo para la respuesta quimioluminiscente del reactivo. Los niveles inferiores de colorante dan composiciones que interfieren menos con el procedimiento de revestimiento de aminodextrano, pero reducir el contenido de colorante también reduce la quimioluminiscencia necesaria para una señal fuerte.

De acuerdo con esto, sigue habiendo una necesidad en la técnica de proporcionar un equilibrio más óptimo entre la amplitud de la señal de respuesta y la especificidad de los componentes de generación de señales en un ensayo de unión específica.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Las composiciones de la presente invención proporcionan componentes de generación de señales que tienen un equilibrio óptimo entre la reducción de la unión no específica mientras que permiten una señal de respuesta mejorada.

De acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona una composición adecuada para el uso como un componente de generación de señales en un inmunoensayo. La composición incluye un vehículo que tiene un revestimiento de un aminodextrano y teñido con un quelato metálico. El quelato metálico está presente en la cantidad de al menos 0, 065 µM por miligramo de vehículo, y la densidad media del revestimiento de aminodextrano

es al menos 45 µg por miligramo de vehículo.

Una composición según otro aspecto de la invención incluye un vehículo revestido con un aminodextrano y con un complejo incorporado en el mismo que tiene la fórmula:

M (L1) x (L2) y,

en la que M es un metal seleccionado del grupo que consiste en europio, terbio, disprosio, samario, osmio y rutenio; L1 es un ligando seleccionado del grupo que consiste en DPP, TOPO y TPPO; L2 comprende un ligando que tiene la fórmula

Fórmula 1

en la que R es uno o más sustituyentes, comprendiendo cada sustituyente un grupo donante de electrones; y n = 210, x = 1-2 e y = 2-4.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona un método para detectar la presencia o la cantidad de un analito en una muestra de prueba que se sospecha que contiene el analito. El método comprende realizar un inmunoensayo usando las composiciones de la presente invención como un componente generador de señales.

Las realizaciones actualmente preferidas, junto con otros aspectos de la invención, se entenderán mejor mediante referencia a la siguiente descripción detallada tomada junto con los dibujos adjuntos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 es un esquema que ilustra la síntesis de una realización de un quelato metálico según la presente invención.

La FIG. 2 es un esquema que ilustra la síntesis de otra realización de un quelato metálico según la presente invención.

La FIG. 3 es una representación gráfica de la concentración de aminodextrano y la señal de respuesta como funciones de la concentración de metal para una composición de la técnica anterior.

La FIG. 4 es una representación gráfica de la concentración de aminodextrano y la señal de respuesta como funciones de la concentración de metal para composiciones según la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS

Las composiciones de la presente invención son útiles como componentes de generación de señales en inmunoensayos. Las composiciones incluyen generalmente un vehículo revestido con un aminodextrano y tienen un quelato metálico incorporado en las mismas. Las composiciones proporcionan señales de respuesta fuertes que permiten determinaciones cuantitativas de analitos de interés, mientras que reducen errores provocados por la unión no específica.

Vehículos adecuados para la presente invención incluyen materiales en fase sólida, típicamente un soporte o una superficie, que pueden tener una cualquiera de un número de conformaciones, tales como una tira, una lámina, un cilindro, un pocillo, un tubo, una partícula o una cuenta. El material es habitualmente de un material insoluble en agua orgánico o inorgánico, hinchable o no hinchable, poroso o no poroso, magnético o no magnético. La superficie puede ser hidrófila o capaz de volverse hidrófila. El soporte sólido incluye polvos inorgánicos tales como sílice, sulfato magnésico y alúmina; materiales poliméricos naturales, particularmente materiales celulósicos y materiales... [Seguir leyendo]

1. Una composición adecuada para el uso como un componente de generación de señales en un inmunoensayo, que comprende: un vehículo revestido con un aminodextrano, teniendo un promedio la densidad del revestimiento de 5 aminodextrano de al menos 45 µg por miligramo de vehículo y teniendo incorporado en el mismo, a una concentración de al menos 0, 065 mmol por gramo de vehículo, un complejo que tiene la fórmula:

M (L1) x (L2) y, en la que M es un metal seleccionado del grupo que consiste en europio, terbio, disprosio, samario, osmio y rutenio;

L1 es un ligando seleccionado del grupo que consiste en DPP, TOPO, TPPO; L2 comprende un ligando que tiene la fórmula

Fórmula 1

en la que R es uno o más sustituyentes, comprendiendo cada sustituyente un grupo donante de electrones;

n = 2-10; x = 1-2; e y = 2-4.

2. La composición según la reivindicación 1, en la que cada R se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilos C1 a C6, dialquilaminas, éteres, tioéteres y arilos.

20 3. La composición según la reivindicación 1 o 2, en la que M comprende europio.

4. La composición según la reivindicación 3, en la que el vehículo comprende una partícula de látex.

5. La composición según la reivindicación 1, en la que n = 3.

6. La composición según la reivindicación 2, en la que x = 1 e y = 3.

7. La composición según la reivindicación 1, en la que n = 7.

25 8. La composición según una de las reivindicaciones 1 a 7, en la que L2 comprende un ligando seleccionado del grupo que consiste en

Fórmula 2

Fórmula 3

Fórmula 4

y

Fórmula 5

Fórmula 6.

9. La composición según una de las reivindicaciones 1 a 8, en la que el revestimiento comprende además una segunda capa que comprende un dextranoaldehído.

10. La composición según una de las reivindicaciones 1 a 9, en la que el vehículo comprende además un aceptor de oxígeno.

11. Un método para detectar la presencia o la cantidad de un analito en una muestra de prueba que se sospecha que contiene el analito, comprendiendo el método:

realizar un inmunoensayo usando la composición según la reivindicación 1 como un componente generador 10 de señales.

12. El método según la reivindicación 11, en el que el inmunoensayo comprende un inmunoensayo luminiscente de canalización de oxígeno.

13. La composición según la reivindicación 1, en la que el complejo está presente en la cantidad de 0, 065 mmol por gramo a 0, 150 mmol por gramo de vehículo.