COMPOSICIONES DE VACUNAS LIPOSÓMICAS QUE COMPRENDEN UN ANTÍGENO POLISACÁRIDO Y UN ADYUVANTE PROTEICO.

Composiciones de vacunas liposómicas que comprenden un antígeno polisacárido y un adyuvante proteico. [0001] La presente invención se refiere a composiciones liposómicas, en particular composiciones útiles para provocar una respuesta inmune contra antígenos polisacáridos, en particular derivados de microbios patógenos, como los antígenos polisacáridos neumocócicos y Hib. [0002] Las infecciones bacterianas causadas por bacterias encapsuladas son un problema de salud mundial importante. Es difícil vacunar contra las especies Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenziae y Neisseria meningitidis debido a la naturaleza timo independiente de los principales antígenos de superficie, los polisacáridos capsulares. [0003] Los antígenos independientes de las células T presentan problemas particulares en referencia al desarrollo de vacunas efectivas. La producción de anticuerpos es baja y no es normalmente estimulada por la re-inmunización. Los isotipos de anticuerpos están restringidos a IgM y otros isotipos tienen son generalmente de baja afinidad para un antígeno específico. [0004] Un gran problema reside en la respuesta de los niños pequeños a las vacunas independientes de las células T. Estos individuos están entre los más vulnerables a tales infecciones bacterianas. Este grupo de edad responde en la más pobremente a los antígenos independientes de las células T. [0005] Se han intentado varios métodos para adyuvantar antígenos polisacáridos. Por ejemplo, los polisacáridos han sido conjugados a proteínas portadoras como el toxoide tetánico, lo que resulta en alguna mejora en el efecto inmunogénico. Los polisacáridos han sido alternativamente formulados con liposomas, lo que también da una respuesta inmune mejorada. [0006] Burgeot, C y otros en Vaccine 2001, 19, 2092-2099, revela la inmunopotenciación de vacunas polisacáridos del Staphylococcus aureus co-atrapada en liposomas con toxina alfa. Los liposomas fueron formados de liposoma formando compuestos que contenían fosfatildilcolina de huevo, estearilamina y colesterol en proporciones molares de 7:2:1. Los liposomas fueron formados usando el método de deshidratación rehidratación, con deshidratación de una mezcla de SUV vacio y antígenos suspendidos en 10 mM de Hepes (pH 7.4), 150mM de regulador de cloruro de sodio. La proporción de polisacáridos a proteína de toxina osciló de 20 a 5. La toxina alfa es una sustancia altamente tóxica y es hemolítica. Los autores razonaron que su actividad al potenciar la antigenicidad del antígeno polisacárido es dependiente de las propiedades que muestra como una toxina involucrada en la perforación de la membrana celular. Muestran que la potenciación no se consigue con derivados de toxina inactivados por calor. Latoxina alfa tiene un peso molecular de la subunidad de alrededor de 33 kDa. [0007] Pietrobon, P.JF. y otros en Immunomethods 4, 236-243 (1994) describen en co-atrapamiento en liposomas de LPS antígenos T independientes (que nos son solubles en agua) y un polipéptido con sitios de reconocimiento de células T, hemaglutinina (HA). No se revelan los tamaños del liposoma. La proporción de peso de LPS a HA está en el intervalo de 2:1 a 1:10. Los liposomas se hacen formando una capa lípida que contiene LPS y HA e hidratándola en líquido en suspensión acuosa que contiene n-octiglucopiranosida. La HA no es inerte, pero enlaza a varios receptores de la superficie de la célula por el ácido siálico que tiene glicoles y estimula una respuesta inmune innata. Los compuestos que estimulan una respuesta inmune innata pueden generar una inflamación no deseable. [0008] De acuerdo a la invención se proporciona una nueva composición liposómica como se define en la reivindicación 1. [0009] En la invención, el término coatrapado significa que dos activos, concretamente el antígeno polisacárido y el portador proteico, deben estar asociados con el mismo liposoma. Los activos están al menos atrapados en parte en el espacio intravesicular de los liposomas. Ambos activos deben ser solubles en agua y ubicados en consecuencia en la fase acuosa de las formulaciones liposómicas. Donde los liposomas son multi-lámina los activos pueden estar entre las láminas. [0010] En la invención es importante que el antígeno polisacárido y el portador proteico no estén conjugados covalentemente entre sí. Esto tiene la gran ventaja de permitir la coformulación de muchos ingredientes especialmente antígenos diferentes para formar una composición de antígeno multivalente y evitar el paso de conjugación química que sería necesario para tal conjugación. [0011] El portador proteico es no tóxico para un cuerpo mamífero y no debe estimular una respuesta inmune innata cuando es administrado al mismo. Por lo tanto, el portador es efectivamente inerte en el cuerpo mamífero. Esto es en contraste con los adyuvantes proteicos que no son biológicamente inertes pero enlazan (ya sea ellos mismos directamente, o por componentes que liberan de las células huésped muertas) receptores huésped para provocar respuestas celulares de las células del sistema inmunológico en forma de una respuesta inmune innata. 2   [0012] La proteína portadora tiene un peso molecular lo suficiente alto para actuar como un antígeno células-T dependiente. El peso molecular es al menos 35 kDa, por ejemplo de hasta 1000 kDa, por ejemplo en el intervalo de 75-400 kDa. La proteína es seleccionada del toxoide tetánico y del toxoide diftérico. La proteína debe ser generalmente no hemolítica, y no tóxica. En términos de no-toxicidad, por ejemplo, la proteína debe tener un LD50 en exceso de 4 mg/kg (en ratones, iv o sc). Preferiblemente la proteína debe ser nivel 6 en la escala Hodge & Sterner, es decir ser Relativamente Inofensiva. [0013] Las proteínas adecuadas incluyen el toxoide tetánico, el toxoide diftérico y la difteria CRM197 (una mutación genética de la toxina de la difteria). El toxoide tetánico tiene un peso molecular de alrededor de 100 kDa. El toxoide tetánico y la difteria CRM197 (una mutación genética de la toxina) fallan al provocar la respuesta inmune significativa provocada por las toxinas correspondientes. Se piensa que esto es debido a la atenuación por el formaldehido o por la mutación genética. Estos portadores, sin embargo, provocan una respuesta inmune adaptativa por activación y la posterior proliferación de células T colaboradoras que son necesarias para las respuestas de anticuerpos. [0014] Preferiblemente, la composición liposómica es una forma de dosificación unitaria y comprende 1-30 g del portador proteico, más preferiblemente 10-30 g. Se cree que tales dosificaciones son adecuadas para la administración a un sujeto en necesidad de inmunización, como un humano. [0015] En la invención, el antígeno polisacárido está preferiblemente derivado de un agente infeccioso, preferiblemente una bacteria patógena, por ejemplo seleccionada de Haemophilus influenziae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, E. coli, o Stretpcoccus del grupo B. Más preferiblemente el antígeno está derivado del Haemophilus influenziae o del Streptococcus pneumoniae. El antígeno polisacárido es preferiblemente un antígeno independiente de las células T. En la composición de la invención, la proporción de peso del antígeno polisacárido con el portador proteico está preferiblemente en el intervalo 6:1 a 1:6, más preferiblemente 4:1 a 1:3. Preferiblemente hay un exceso de polisacárido a proteína en la composición. [0016] En la invención, puede haber un único antígeno polisacárido pero preferiblemente la composición es multivalente, es decir comprende varios antígenos polisacáridos en una mezcla. La composición puede comprender dos o más, tres o más, cinco o más, siete o más, por ejemplo hasta 40, preferiblemente en el intervalo de 7 a 23 antígenos polisacáridos. Preferiblemente, los antígenos están derivados de las mismas especies de bacteria. Los antígenos en tal composición multivalente pueden estar co-encapsulados en liposomas, o puede haber varias poblaciones, los liposomas de los cuales contienen cada uno un antígeno separado o mezcla de antígenos distinta al de otras poblaciones. Preferiblemente los antígenos están atrapados separadamente en liposomas, que hay una población de zona para cada antígeno polisacárido. Esto permite una óptima flexibilidad en términos de generar una variedad de vacunas de los mismos diferentes de materiales de partida comunes. [0017] Los liposomas comprenden compuestos que no tienen una carga iónica total. Los compuestos son preferiblemente neutros, incluyendo compuestos bipolares con una carga aniónica y una catiónica, pero pueden contener cantidades pequeñas de compuestos aniónicos o catiónicos siempre que estos tengan la carga equilibrada con compuestos cargados opuestamente. Preferiblemente los compuestos... [Seguir leyendo]

1. Una composición liposómica que comprende coatrapados en el espacio intravesicular de liposomas un antígeno polisacárido y un portador proteico. Donde le antígeno polisacárido es soluble enagua y el portador proteico tiene al menos un epítopo de células T, un peso molecular de al menos 35 kDa, es no tóxico y es seleccionado del toxoide tetánico y el toxoide diftérico; Donde el antígeno polisacárido y el portador proteico están no conjugados; y los liposomas tienen un diámetro medio en el intervalo de 50-700 nm y están formados de liposomas que forman compuestos que no tienen, en combinación, carga iónica total y comprenden al menos un fosfolípido. 2. Una composición de acuerdo a la reivindicación 1, en la que los liposomas que forman compuestos comprenden colesterol preferiblemente en una cantidad de al menos el 25% por mol en base a los liposomas totales que forman compuestos. 3. Una composición de acuerdo a la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que los liposomas que forman compuestos incluyen al menos un compuesto cargado catiónicamente. 4. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que los fosfolípidos incluyen fosfatidilcolina opcionalmente en combinación con fosfatidiletanolamina. 5. Un composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde los liposomas tienen un diámetro medio en el intervalo de 80/500 nm. 6. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la proporción de antígeno polisacárido a portador proteico está en el intervalo 6:1 a 1:6. 7. Una composición de acuerdo a la reivindicación 6, donde la proporción de la proporción de antígeno polisacárido a portador proteico está en el intervalo 4:1 a 1:3. 8. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores en forma de dosificación unitaria. 9. Una composición de acuerdo a la reivindicación 8, en la que cada dosificación unitaria comprende 1-30 g de portador proteico. 10. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el antígeno polisacárido no tiene carga iónica total. 11. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el antígeno polisacárido es un antígeno independiente de las células T. 12. Una composición de acuerdo a la reivindicación 11, en la que el antígeno polisacárido está derivado de un agente infeccioso preferiblemente una bacteria patógena, preferiblemente Haemophilus influenziae, Streptococcus pneumoniae, Mesisseria meningitidis, E. coli, o Streptococcus del grupo B. 13. Una composición de acuerdo a la reivindicación 11 o a la reivindicación 12, que comprende varios de tales antígenos polisacáridos. 14. Una composición de acuerdo a la reivindicación 13, en la que los antígenos están derivados de la misma especie de bacteriana. 15. Una composición de acuerdo a la reivindicación 13 o la reivindicación 14, en la que cada antígeno está encapsulado en una población separada de liposomas. 16. Una composición de acuerdo a la reivindicación 13 o la reivindicación 14, en la que varios antígenos están encapsulados en los mismos liposomas de la población. 17. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es acuosa y en la que los liposomas están suspendidos en un medio acuoso continúo. 18. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, que está en forma seca, preferiblemente en forma de polvo, preferiblemente en forma de polvo liofilizado. 11   19. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, comprendiendo adicionalmente uno o más azúcares. 20. Una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es una composición farmacéutica y comprende un diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. 21. El uso de liposomas como se define en la reivindicación 1, en la fabricación de una composición para la administración a un mamífero para provocar una respuesta inmune al antígeno polisacárido. 22. El uso de acuerdo a la reivindicación 21, en la que la respuesta inmune implica la producción de IgG, IgM o IgA, preferiblemente IgA, específica para el antígeno polisacárido. 23. El uso de acuerdo a la reivindicación 21 o la reivindicación 22, en el que la composición es administrada por vía subcutánea, por vía intravenosa, por vía intraperitoneal, por vía intramuscular, por vía intranasal, por inhalación, por vía vaginal, bucalmente u oralmente. 24. El uso de acuerdo a la reivindicación 23, en la que la composición es administrada por vía subcutánea. 25. El uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 21-24, en donde la composición es administrada en una dosificación unitaria que comprende 1-30 g de portador proteico. 26. El uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 21 a 25, en el que la repuesta inmune es una respuesta protectora contra la infección por el microbio, preferiblemente bacteria, de la que se deriva el antígeno polisacárido. 27. El uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 21 a 26, en la que el mamífero es un humano, preferiblemente un niño, más preferiblemente de menos de 2 años, por ejemplo menor de 6 meses. 28. Una composición de acuerdo a la reivindicación 20, para el uso en provocar una respuesta inmune en un animal, mediante la cual se provoca una respuesta inmune contra el antígeno polisacárido bacteriano. 29. Una composición de acuerdo a la reivindicación 28, en donde la dosificación unitaria de la composición comprende 1-30 g de portador proteico. 30. Una composición de acuerdo a las reivindicaciones 28 a 29, en la que la respuesta inmune aumenta los anticuerpos IgG específicos para el antígeno polisacárido. 31. Un método para formar una composición liposómica de acuerdo a la reivindicación 1, comprendiendo (i) mezclar liposomas vacíos formados de compuestos que forman liposomas que no tienen, en combinación, carga iónica total y comprenden al menos un fosfolípido con un antígeno polisacárido soluble en agua y un portador proteico que tiene al menos un epítopo de células T y un peso molecular de al menos 35 kDa seleccionado del toxoide tetánico y del toxoide diftérico, el antígeno polisacárido y el portador proteico estando no conjugados. (ii) secar la mezcla del paso (i); y (iii) rehidratar la mezcla del paso (ii) para formar una suspensión de vesículas de deshidratación-rehidratación (DRV, que tienen un diámetro medio en el intervalo de 50 a 700 nm. 32. Un método de acuerdo a la reivindicación 31, en el que el material no atrapado es al menos parcialmente retirado de las DRVs. 33. Un método de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 31 ó 32, en donde en el paso (i), hay presente un azúcar en la mezcla de liposomas vacíos, proteínas y antígeno polisacárido. 12   13   14