Una línea celular de hibridoma depositada en la International Depositary Authority de Canadá el 29 de agosto de 2006,

bajo el número de acceso AD1-290806-01

Anticuerpos y su uso en el tratamiento, prevención y diagnóstico de una enfermedad asociada con anomalías en la SOD1

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está relacionada con el campo de las enfermedades neurodegenerativas asociadas a anomalías en la SOD1 como la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) . Más específicamente, la presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales y a su uso en composiciones y procedimientos para prevenir, tratar y/o diagnosticar dicha enfermedad neurodegenerativa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Una enfermedad neurodegenerativa es un trastorno provocado por el deterioro de ciertas células nerviosas. Cambios en estas células provocan que funcionen de manera anómala, lo que a la larga produce su muerte.

Las enfermedades neurodegenerativas incluyen la esclerosis lateral amiotrófica familiar y esporádica (ELAS y ELA, respectivamente) , la enfermedad de Parkinson familiar y esporádica, la enfermedad de Huntington, la enfermedad de Alzheimer familiar y esporádica, la atrofia olivopontocerebelosa, la atrofia sistémica múltiple, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad difusa por cuerpos de Lewy, degeneración corticobasal, epilepsia mioclónica familiar progresiva, degeneración estrionigral, distonía de torsión, temblores familiares, síndrome de Gilles de la Tourette, y enfermedad de Hallervorden-Spatz. La mayoría de las enfermedades se caracterizan por su aparición durante los años de la edad adulta y dan lugar a una degeneración rápida de subgrupos de neuronas específicas dentro del sistema neural, produciendo en último término una muerte prematura. No existe cura conocida ni terapia eficaz para frenar la progresión de ninguna de las enfermedades indicadas.

La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa letal caracterizada por un debilitamiento muscular progresivo durante la edad adulta. Las señales patológicas están representadas por una pérdida masiva de las neuronas motoras junto con astrocitosis y microgliosis de la corteza motora, el tronco encefálico y la médula espinal. En general, la aparición se produce entre la tercera y la sexta década, y normalmente en la sexta década. La ELA es fatal de manera uniforme, y normalmente en cinco años. La ELA sólo se puede diagnosticar cuando el paciente comienza a experimentar una debilidad y fatiga asimétricas de los miembros, fasciculación localizada en los miembros superiores y/o espasticidad en las piernas, que caracteriza la aparición.

En la ELA se encuentran afectadas las neuronas de la corteza cerebral y de las astas anteriores de la médula espinal, junto con sus homólogas en algunos de los núcleos motores del tronco encefálico. La clase de neuronas afectadas es altamente específica: las neuronas motoras de la motilidad ocular y las neuronas motoras para los esfínteres de la médula espinal permanecen inalteradas hasta estadios muy tardíos de la enfermedad. A pesar de que ocasionalmente se produce la muerte poco después de la aparición de la enfermedad sintomática, generalmente la enfermedad termina con un fallo respiratorio secundario a una debilidad profunda generalizada y del diafragma.

Aproximadamente el 10% de los casos de ELA presenta antecedentes familiares, y el resto de los casos de ELA diagnosticados son de tipo esporádico (90%) . El descubrimiento hace una década por parte de Rosen y col. (1993, Nature, 362, 59-62) de mutaciones sin sentido en el gen que codifica para la superóxido dismutasa 1 (SOD1) de Cu/Zn en subgrupos de casos familiares dirigió la mayoría de las investigaciones sobre la ELA a elucidar el mecanismo de la enfermedad mediada por SOD1. Hasta la fecha, se han descubierto 114 mutaciones diferentes en el gen de la SOD1 que suponen cerca del 20% de los casos de ELA familiar.

La enzima superóxido dismutasa (SOD) cataliza la dismutación de superóxido en oxígeno y peróxido de hidrógeno. Como tal, es una defensa antioxidante importante en casi todas las células expuestas al oxígeno. La SOD está ampliamente distribuida en los cuerpos vivos de animales, plantas o microorganismos. Más específicamente, la SOD1 es una proteína abundante expresada de manera ubicua. Debido a que su función normal es catalizar la conversión de aniones superóxido en peróxido de hidrógeno, en primer lugar se pensó que la toxicidad de diferentes mutantes de la SOD1 podría ser el resultado de una baja actividad de captación de radicales libres. Los ratones que expresan SOD1 G93A (glicina sustituida por alanina en la posición 93) o SOD1 G37R mutantes desarrollaron la enfermedad de las neuronas motoras a pesar del aumento en los niveles de actividad de la SOD1 (Cleveland y col., 2001, Nat Rev Neurosc, 2, 806-819) . Además, ratones deficientes en SOD1 no desarrollaron la enfermedad de las neuronas motoras (Reaume y col., 1996, Nat Genet, 13, 43-47) . La interrupción del gen para la chaperona de cobre de la SOD1 (CCS) que suministra cobre en el sitio catalítico de la SOD1 no tuvo ningún efecto sobre la progresión de la enfermedad en ratones mutantes transgénicos en SOD1 (Subramanian y col., 2002, Nat Neurosci, 5, 301-307) . Por último, los ratones transgénicos que sobre-expresan una forma mutante de la SOD1 que carece de dos de los cuatro restos de histidina que coordinan la unión del Cu en el sitio catalítico aún eran capaces de desarrollar neurodegeneración motora a pesar de una notable reducción en la actividad de la SOD1 (Wang y col., 2002, Neurobiol Dis, 10, 128-138) . En general, estos estudios con ratones genéticamente alterados indican que los mutantes en la SOD1 provocan la enfermedad de las neuronas motoras mediante la adquisición de nuevas propiedades tóxicas que son independientes de la actividad enzimática en la que está involucrado el sitio catalítico del cobre.

El punto de vista predominante es que la toxicidad de los mutantes en la SOD1 está relacionada con la propensión del mutante en la SOD1 para formar especies y agregados proteicos nocivos mal plegados. Además, a diferencia de la SOD1 de tipo silvestre (WT) , las proteínas SOD1 mutantes extracelulares activan la microglía e inducen la muerte de las neuronas motoras en cultivo (Urushitani y col., 2006, Nat Neurosci, 9, 108-118) , una vía patógena que estaría en consonancia con la idea de que la muerte de las neuronas motoras en ELA relacionada con SOD1 mutante no es estrictamente autónoma de las células (Boillee y col., 2006, Science, 312, 1389-1392) . Curiosamente, la oxidación de la SOD1 WT es un fenómeno que puede promover su agregación (Furukawa, y col., 2006, PNAS USA, 103, 7148-7153) . Considerando las evidencias del daño oxidativo en pacientes con ELA esporádica (Ihara y col., 2005, Neurol Res, 27, 105-108) y la abundancia de la proteína SOD1 en las células, parece plausible que las moléculas de SOD1 puedan constituir dianas del daño oxidativo en la ELA esporádica.

Desde el descubrimiento de mutaciones genéticas en la superóxido dismutasa 1 (SOD1) en el 20% de los pacientes con ELA familiar y el desarrollo de excelentes modelos de ratón basados en la sobre-expresión de mutantes en la SOD1 asociada a la ELA, se han elucidado muchas vías patógenas para la muerte de las neuronas motoras incluyendo el mal plegamiento y la agregación de proteínas, el deterioro del proteasoma, inflamación, especies reactivas de oxígeno, excitotoxicidad y disfunción de las mitocondrias. Basándose en estas hipótesis, se han sometido a ensayo múltiples enfoques para el tratamiento en ratones con ELA, incluyendo enfoques farmacológicos y la administración de moléculas mediada por virus.

El documento de EE.UU. 5.762.929 informa de un agente farmacéutico que puede aliviar los síntomas de enfermedades de las neuronas motoras como la esclerosis lateral amiotrófica por administración oral o parenteral. El documento de EE.UU. 5.780.489 informa de un procedimiento para el tratamiento y alivio de los síntomas de la esclerosis lateral amiotrófica con la administración a un paciente de una cantidad eficaz de un precursor del glutatión sin cisteína o un derivado del glutatión. El documento de EE.UU. 6.420.429 informa del uso de antioxidantes para el tratamiento de enfermedades como la esclerosis lateral amiotrófica. Los documentos de EE.UU. 5.843.641; EE.UU.

5.849.290 y EE.UU. 6.723.893 informan del uso de una cantidad eficaz de proteína SOD o ADN que codifica una proteína SOD para tratar enfermedades neurodegenerativas, específicamente esclerosis lateral amiotrófica (ELA) . También informan de un procedimiento de diagnóstico de la estenosis lateral amiotrófica usando el... [Seguir leyendo]

1. Una línea celular de hibridoma depositada en la International Depositar y Authority de Canadá el 29 de agosto de 2006, bajo el número de acceso AD1-290806-01.

2. Una línea celular de hibridoma depositada en la International Depositar y Authority de Canadá el 29 de agosto de 2006, bajo el número de acceso AD1-290806-02.

3. Una línea celular de hibridoma depositada en la International Depositar y Authority de Canadá el 29 de agosto de 2006, bajo el número de acceso AD1-290806-03.

4. Un anticuerpo monoclonal producido por la línea celular de hibridoma de acuerdo con la reivindicación

1.

5. Un anticuerpo monoclonal producido por la línea celular de hibridoma de acuerdo con la reivindicación 2.

6. Un anticuerpo monoclonal producido por la línea celular de hibridoma de acuerdo con la reivindicación 3.

7. Una composición para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por: la esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer y Parkinson en un animal, dicha composición que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un anticuerpo monoclonal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.

8. La composición de la reivindicación 7, caracterizada porque la enfermedad es la esclerosis lateral amiotrófica.

9. El uso de un anticuerpo monoclonal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 para el diagnóstico in vitro de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por: la esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer y Parkinson en un animal.

10. El uso de un anticuerpo monoclonal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 para la preparación de una composición para el diagnóstico de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por: la esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer y Parkinson en un animal.

11. El uso de las reivindicaciones 9 ó 10, caracterizado porque la enfermedad es la esclerosis lateral amiotrófica.

12. Un kit para el diagnóstico de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por: la esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer y Parkinson en un animal, dicho kit que comprende al menos un recipiente, dicho recipiente que contiene un anticuerpo monoclonal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.

13. El kit de la reivindicación 12, caracterizado porque la enfermedad es la esclerosis lateral amiotrófica.

14. Un kit para el tratamiento o la prevención de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por: la esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer y Parkinson en un animal, dicho kit que comprende al menos un recipiente, dicho recipiente que contiene un anticuerpo monoclonal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 4-6.

15. El kit de la reivindicación 14, caracterizado porque la enfermedad es la esclerosis lateral amiotrófica.