Agente anti-angiogénico y su utilización en el marco del tratamiento de los cánceres.

Utilización:

- de una proteína, caracterizada porque está constituida por:

* la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, o

* un fragmento de esta proteína, representado por la secuencia SEC ID nº 12,

- de una secuencia nucleotídica caracterizada porque comprende, o está constituida por, una secuencianucleotídica que codifica:

* o bien para la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente,

* o bien para un fragmento de la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente,

correspondiendo dicha secuencia nucleotídica a la secuencia nucleotídica SEC ID nº 1 que codifica para la SECID nº 2, o a la secuencia SEC ID nº 11 que codifica para la SEC ID nº 12,

- de un anticuerpo anti-idiotípico de la proteína NOV representada por la secuencia SEC ID nº 2, imitando dichoanticuerpo las funciones de la proteína NOV reconociendo el VEGF,

para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento:

- de patologías que necesitan la inhibición de la proliferación endotelial, en el marco de las patologías siguientes:la degenerescencia macular relacionada con la edad; las retinopatías diabéticas, la poliartritis reumatoide, losangiomas, los angiosarcomas, en particular la enfermedad de Castelman y el sarcoma de Kaposi, o

- las patologías que necesitan la inhibición de la activación endotelial, en el marco de las patologías siguientes: elrechazo de aloinjerto y de xenoinjerto, las acrocianosis, las esclerodermias, o en el marco de la preparación deinjertos entre la extracción y el trasplante.

Agente anti-angiogénico y su utilización en el marco del tratamiento de los cánceres.

La presente invención tiene por objeto un nuevo agente anti-angiogénico, así como su utilización, en particular en el marco del tratamiento de los cánceres.

La angiogénesis es un proceso de crecimiento de nuevos capilares sanguíneos a partir de vasos preexistentes. Tres fenómenos particulares son en particular la base de este proceso: la proliferación, la migración y la diferenciación (la tubulogénesis) de las células endoteliales. La angiogénesis se activa por ciertos factores de crecimiento, denominados factores angiogénicos, tales como el VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor, factor de crecimiento endotelial vascular) , el FGF-1 (Fibroblast Growth Factor 1, factor de crecimiento de los fibroblastos 1) o el FGF-2 (Fibroblast Growth Factor 2, factor de crecimiento de los fibroblastos 2) .

En tiempo normal, la angiogénesis está esencialmente restringida al sistema reproductor femenino y a la cicatrización de heridas. Sin embargo, la angiogénesis está asimismo implicada en numerosos casos patológicos, tales como la retinopatía diabética, la psoriasis, la poliartritis reumatoide, la degenerescencia macular relacionada con la edad, y los cánceres. En efecto, en este último caso, se ha demostrado que el crecimiento tumoral estaba altamente favorecido por la aparición, en el seno de estos tumores, de una neo-vascularización que resulta, en particular, de la secreción por los tumores de factores angiogénicos.

Están en curso numerosas tentativas de tratamiento terapéuticos basados en la utilización de proteínas antiangiogénicas. Entre estos compuestos, uno de los más prometedores es la endostatina (O'Reilly et al., 1997) , que está actualmente en ensayos clínicos de fase I (Herbst et al., 2002) . La endostatina es una proteína de 20 kDa que corresponde a un fragmento del colágeno XVIII. El mecanismo de acción de la endostatina sigue siendo desconocido.

Ciertas tentativas terapéuticas se basan en la elucidación de mecanismos de acción conocidos. Así, las células endoteliales en proliferación expresan la integrina avb3, mientras que las células endoteliales quiescentes no la expresan (Nrooks, 1994) . Esta observación ha permitido desarrollar unos inhibidores de esta molécula actualmente en curso de ensayos clínicos.

Entre todos los actores moleculares implicados en la activación de la angiogénesis, sólo el VEGF ha demostrado su eficacia en prácticamente todos los modelos experimentales de medición de actividad de la angiogénesis (Ortéga, 1999) . Además, en la primavera de 2003, se hizo público por la compañía Genentech que unos anticuerpos anti-VEGF ejercían una actividad antitumoral en los enfermos que padecen cáncer de colon. Así, es de suma importancia buscar unas moléculas que puedan unirse al VEGF y, por lo tanto, ejercer una actividad anti-tumoral comparable a la de los anticuerpos anti-VEGF.

El gen nov, en primer lugar identificado en unos nefroblastomas aviares (Joliot et al., 1992; Martinerie y Perbal, 1991) , se ha clonado en el ser humano (novH) (Martinerie et al., 1994) , el ratón (novM) (Snaith et al., 1996) y Xenopus laevis (Ying y Ling, 1996) . La proteína NOV, codificada por el gen nov, cuya función es hoy en día desconocida, pertenece a la familia CCN (Bork, 1993) que comprende las proteínas siguientes: CYR61 (Lau y Nathans, 1985) , CTGF (Bradham et al., 1991) , ELM-1 o WISP-1 (Pennica et al., 1998; Hashimoto et al., 1998) , R-COP o WISP-2 (Pennica et al., 1998; Kumar et al., 1999; Brigstock, 1999) y WISP-3 (Pennica et al., 1998) . Estas proteínas están todas constituidas de cuatro dominios distintos: una proteína que se une a un factor de crecimiento análogo a la insulina (IGFBP) , un dominio de repetición del factor Willebrand de tipo C, un dominio de repetición de trombospondina de tipo I y un dominio COOH-terminal. Las proteínas de la familia CCN regulan diferentes procedimientos celulares normales que comprenden la proliferación, la adhesión, la apoptosis y la quimiotaxia. Están asimismo implicadas en la implantación, la formación esquelética, el desarrollo embrionario y en diferentes enfermedades tales como la fibrosis, la cicatrización y los cánceres (Chevalier et al., 1998) .

La proteína NOV humana (NOVH) se puede detectar en los tejidos normales (riñones, músculos, cartílago, cerebro, pulmones, ovarios, corazón y corticosurenal) a diferentes niveles (Joliot et al., 1992; Martinerie et al., 2001; Kocialkowski et al., 2001; Perbal et al., 1999) y su expresión varía durante el desarrollo.

A día de hoy, las funciones ejercidas por la proteína NOV no están claramente establecidas. Se ha propuesto recientemente que la NOV podría ejercer una acción proangiogénica (Lin, 2003) permitiendo que se unan ciertas integrinas (avb3, a6b1 y a5b1) . Además, estos autores muestran que la NOV ejerce una actividad proangiogénica en el modelo de córnea de conejo. Sin embargo, se ha demostrado que este ensayo puede conducir a resultados falsamente positivos por liberación de factores angiogénicos sintetizados y almacenados en la córnea (Plouët, 1997) .

Así, la presente invención resulta de la puesta en evidencia de la actividad anti-angiogénica de NOV debido a su unión a VEGF.

La presente invención tiene por objetivo proporcionar un nuevo agente anti-angiogénico que tiene un nuevo mecanismo de acción.

La presente invención se basa en la constatación hecha por los inventores de se puede prever la utilización:

- de una proteína caracterizada porque comprende o está constituida por:

* la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, o

* un fragmento de esta proteína, siempre que este fragmento presente una actividad de inhibición de la angiogénesis, comprendiendo dicho fragmento en particular de aproximadamente 40 a aproximadamente 180 aminoácidos, y estando representado en particular por una de las secuencias siguientes SEC ID nº 4, SEC ID nº 6, SEC ID nº 8, SEC ID nº 10 o SEC ID nº 12, o

* cualquier secuencia derivada de la secuencia SEC ID nº 2 o de un fragmento tal como se ha definido

anteriormente, en particular por sustitución, supresión o adición de uno o varios aminoácidos, siempre que esta secuencia derivada presente una actividad de inhibición de la angiogénesis, o * cualquier secuencia homóloga de la secuencia SEC ID nº 2 o de un fragmento tal como se ha definido anteriormente, que tiene como referencia una homología de por lo menos aproximadamente 80%, y en particular 85%, con la región comprendida entre los aminoácidos en la posición (33) y (338) de la secuencia SEC ID nº 2, siempre que esta secuencia homóloga presente una actividad de inhibición de la angiogénesis,

- de una secuencia nucleotídica, caracterizada porque comprende o está constituida por una secuencia nucleotídica que codifica:

* o bien para la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente, * o bien para un fragmento de la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente, * o bien para una secuencia derivada de la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente, * o bien para una secuencia homóloga de la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente, correspondiendo dicha secuencia nucleotídica en particular a la secuencia nucleotídica SEC ID nº 1, que codifica para la SEC ID nº 2, o a la secuencia SEC ID nº 3 que codifica para la SEC ID nº 4, o a la secuencia SEC ID nº 5 que codifica para la SEC ID nº 6, o a la secuencia SEC ID nº 7 que codifica para la SEC ID nº 8, o a la secuencia SEC ID nº 9 que codifica para la SEC ID nº 10, o a la secuencia SEC ID nº 11 que codifica para la SEC ID nº 12,

- de un anticuerpo anti-idiotípico de la proteína NOV,

para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento:

- de patologías que necesitan la inhibición de la proliferación endotelial, en particular en el marco de las patologías siguientes: la degenerescencia macular relacionada con la edad; las retinopatías diabéticas, la poliartritis reumatoide, los angiomas, los angiosarcomas, en particular la enfermedad de Castelman y el sarcoma de Kaposi, o

45. de patologías que necesitan la inhibición de la activación endotelial, en particular en el marco de las patologías siguientes: el rechazo de aloinjerto y de xenoinjerto, las acrocianosis, las esclerodermias, o en el marco de la preparación de injertos entre la extracción y el trasplante.

Asimismo, la invención se refiere a la utilización:

- de... [Seguir leyendo]

1. Utilización:

- de una proteína, caracterizada porque está constituida por:

* la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, o

* un fragmento de esta proteína, representado por la secuencia SEC ID nº 12,

- de una secuencia nucleotídica caracterizada porque comprende, o está constituida por, una secuencia nucleotídica que codifica:

* o bien para la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente, * o bien para un fragmento de la proteína NOV, tal como se ha definido anteriormente, 15

correspondiendo dicha secuencia nucleotídica a la secuencia nucleotídica SEC ID nº 1 que codifica para la SEC

ID nº 2, o a la secuencia SEC ID nº 11 que codifica para la SEC ID nº 12,

- de un anticuerpo anti-idiotípico de la proteína NOV representada por la secuencia SEC ID nº 2, imitando dicho 20 anticuerpo las funciones de la proteína NOV reconociendo el VEGF,

para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento:

- de patologías que necesitan la inhibición de la proliferación endotelial, en el marco de las patologías siguientes:

la degenerescencia macular relacionada con la edad; las retinopatías diabéticas, la poliartritis reumatoide, los angiomas, los angiosarcomas, en particular la enfermedad de Castelman y el sarcoma de Kaposi, o

- las patologías que necesitan la inhibición de la activación endotelial, en el marco de las patologías siguientes: el

rechazo de aloinjerto y de xenoinjerto, las acrocianosis, las esclerodermias, o en el marco de la preparación de 30 injertos entre la extracción y el trasplante.

2. Utilización según la reivindicación 1, de una proteína caracterizada porque está constituida por:

* la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, o 35 * un fragmento de esta proteína, representada por la secuencia SEC ID nº 12

para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento:

* de patologías que necesitan la inhibición de la proliferación endotelial, en el marco de las patologías siguientes:

la degenerescencia macular relacionada con la edad, las retinopatías diabéticas, la poliartritis reumatoide, los angiomas, los angiosarcomas, en particular la enfermedad de Castelman y el sarcoma de Kaposi, o * de patologías que necesitan la inhibición de la activación endotelial, en el marco de las patologías siguientes: el rechazo de aloinjerto y de xenoinjerto, las acrocianosis, las esclerodermias, o en el marco de la preparación de 45 injertos entre la extracción y el trasplante.

3. Utilización según la reivindicación 2, de una proteína caracterizada porque está constituida por la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2.

50 4. Utilización según la reivindicación 2, de una proteína caracterizada porque está constituida por un fragmento de la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, estando dicho fragmento representado por la secuencia SEC ID nº 12.

5. Utilización de una proteína caracterizada porque está constituida por un fragmento de la proteína NOV, estando 55 dicho fragmento representado por la secuencia SEC ID nº 12, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de los cánceres.

6. Composición farmacéutica, caracterizada porque contiene a título de sustancia activa:

60. una proteína caracterizada porque está constituida por un fragmento de la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, estando dicho fragmento representado por la secuencia SEC ID nº 12,

- una secuencia nucleotídica, caracterizada porque comprende, o está constituida por, una secuencia nucleotídica

que codifica: 65

* o bien para la proteína NOV tal como se ha definido anteriormente, * o bien para un fragmento de la proteína NOV tal como se ha definido anteriormente, correspondiendo dicha secuencia nucleotídica a la secuencia nucleotídica SEC ID nº 1 que codifica para la SEC 5 ID nº 2, o a la secuencia SEC ID nº 11 que codifica para la SEC ID nº 12,

- un anticuerpo anti-idiotípico de la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, imitando dicho anticuerpo las funciones de la proteína NOV reconociendo el VEGF,

en asociación con un vector farmacéuticamente aceptable.

7. Composición farmacéutica según la reivindicación 6, caracterizada porque contiene, a título de sustancia activa, una proteína caracterizada porque está constituida por un fragmento de la proteína NOV, representada por la secuencia SEC ID nº 2, estando dicho fragmento representado por la secuencia SEC ID nº 12, en asociación con un vector farmacéuticamente aceptable.

8. Utilización según las reivindicaciones 1 a 5, para la preparación de una composición según una de las reivindicaciones 6 a 7, destinada a ser administrada a razón de aproximadamente 0, 1 a aproximadamente 20 mg/kg/día.