ADUCTO DE ALGAS EXTRAÍDO DE MACROALGAS ROJAS QUE COMPRENDE EL DIPÉPTIDO CITRULINIL-ARGININA, SU PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN Y SU UTILIZACIÓN DERMATOLÓGICA COMO AGENTE COSMÉTICO.

Aducto de algas extraído de macroalgas rojas, caracterizado porque está desprovisto de potencial genotóxico y es susceptible de ser obtenido por un procedimiento que comprende las etapas siguientes en el orden siguiente:

- extracción de dichas macroalgas rojas que comprenden el dipéptido natural citrulinil-arginina por medio de un solvente o de una mezcla de solventes aceptables en farmacia; - enriquecimiento de la cantidad en peso de polipéptidos o proteínas intrínsecas por proteínas nativas intrínsecas o las proteínas extrínsecas estándares utilizables en farmacia hasta un contenido total por lo menos igual a 20%; - eventualmente la incorporación de un contenido titulado del dipéptido citrulinil-arginina obtenido por vía química; - tratamiento térmico del extracto resultante

Aducto de algas extraído de macroalgas rojas que comprende el dipéptido citrulinil-arginina, su procedimiento de obtención y su utilización dermatológica como agente cosmético.

La presente invención tiene como objeto un aducto de algas del dipéptido natural citrulinil-arginina, su utilización no terapéutica dermatológica como agente para el cuidado y para el tratamiento de la piel y las faneras.

La literatura informa de la propiedad común a las macroalgas que consiste en utilizar el nitrógeno de fuentes externas presentes en el mar bajo forma de iones nitrato, nitrito, amonio, de reducirlo y por fin de almacenarlo bajo forma orgánica, especialmente en aminoácidos, proteínas y pigmentos (Hanisak M.D. (1983) , In Carpenter, E.J. and Capone, D.G. (Eds) "Nitrogen in the marine environment". Academic press Inc.) .

Así, en un extracto de alga roja Grateloupia turuturu (Miyazawa K. et al., Bulletin of the Japonese Society of Scientific Fisheries (1974) , vol.40, pp.815-818) , fue aislado y caracterizado estructuralmente por la primera vez un modelo orgánico nitrogenado bajo la forma del dipéptido citrulinil-arginina. Otras rhodophyceae tales como Grateloupia filicina, Polyides rotundus, Polysiphonia lanosa han sido identificadas después con la presencia del mismo dipéptido en la composición de sus extractos alcohólicos, y de manera particular el alga Chondrus crispus. En esta última por ejemplo, cuando es recolectada en el litoral del Canadá y al término del período invernal, el dipéptido citrulinilarginina constituye el principal modelo orgánico nitrogenado y representa más del 50% del nitrógeno total presente en la planta (Laycock M.V. y col., Can J. Biochem. (1977) , vol.55, pp.27-30) .

A continuación, nuevos estudios realizados por el mismo grupo de investigadores canadienses sobre el alga Chondrus crispus han evidenciado sin embargo la influencia de otros factores fisiológicos además de la biodisponibilidad en nitrógeno de las aguas costeras canadienses en las condiciones de formación natural del dipéptido citrulinil-arginina en el alga (Laycock M.V. y col., Can J. Biochem. (1981) , vol.59, pp.522-527) . Han comprobado así que el contenido en citrulinil-arginina fluctuaba durante el año, con un proceso de acumulación de la molécula esencialmente a lo largo del invierno cuando la temperatura del agua es inferior a 15°C. La concentración máxima en dipéptido es por otro lado observada al finalizar el invierno. Los mismos autores subrayan igualmente, durante este proceso, el estado vegetativo de la planta, siendo su crecimiento limitado por las aguas frías. Por fin, un mínimo de irradiancia o de intensidad luminosa se revela también un elemento indispensable para este proceso.

Los autores de los trabajos mencionados anteriormente sin embargo no avanzan, para el dipéptido acumulado y almacenado, más que un papel de reserva potencial de nitrógeno, energético para la planta. Esta reserva es en efecto puesta a disposición y luego rápidamente consumida por ésta en cuanto las concentraciones en fuentes nitrogenadas externas en el mar disminuyen, especialmente con el regreso de la primavera. El dipéptido sostiene entonces la planta y le permite aprovechar plenamente las condiciones favorables a su crecimiento.

La utilización dermatológica por la solicitante del dipéptido citrulinil-arginina como agente de cuidado y de tratamiento para la piel y las faneras ha sido considerada por muchas razones.

En primer lugar, la literatura no informa, en los tejidos cutáneos y en las faneras de los mamíferos superiores, de la biosíntesis de dicho aporte favorable bajo esta forma.

A continuación, por la estructura y el número de átomos de nitrógeno del dipéptido citrulinil-arginina, tal aportación es susceptible de constituir, como su comportamiento observado en el alga, una fuente de nitrógeno importante e interesante por ejemplo en la piel en el proceso de cicatrización y de reparación de los tejidos cutáneos ya que una pérdida de nitrógeno es clásicamente observada durante el período postraumático (Chyun J.H. y col., J. Nutr. (1984) , vol.114, pp.1697-1704) . Se alude igualmente a los problemas de acidosis de una piel perturbada y el mantenimiento de un pH neutro intracelular con tal fuente de nitrógeno.

El interés del dipéptido como agente de cuidado y de tratamiento resulta igualmente de sus propiedades biológicas, descubiertas por la solicitante y expuestas en la descripción detallada de la invención a continuación. La acción favorable del dipéptido citrulinil-arginina sobre el metabolismo energético de fibroblastos en cultivo y un comportamiento citoestimulante han sido por ejemplo puestos en evidencia, respectivamente por una cuantificación del trifosfato de adenosina y una prueba de evaluación de la proliferación celular.

Correlativamente a la función fisiológica ejercida por el dipéptido en el alga y sobre la base de una sobre expresión conocida de las proteínas chaperonas (Heat Shock Proteins o HSP) en respuesta a un choque térmico negativo (Holland D.B. y col., J. Invest. Dermatology (1993) , vol.101, pp.196-199) , la solicitante ha demostrado el interés de utilizar el dipéptido a nivel cutáneo para responder a la necesidad de tratamiento de una piel sometida al frío. En estas condiciones desfavorables, la reserva energética constituida por la molécula citrulinil-arginina mejora la síntesis de proteínas al nivel de las células epidérmicas y permite favorecer la expresión de estas proteínas chaperonas.

La solicitante ha puesto igualmente en evidencia el interés del dipéptido para satisfacer la necesidad de tratamiento Además, de modo más secundario, es por ejemplo igualmente factible utilizar el dipéptido citrulinil-arginina como fuente de arginina y de citrulina, bajo la acción de las proteasas de la piel a medida que penetra cutáneamente. Una aportación exógena de estos dos aminoácidos y especialmente de arginina resulta actualmente de interés en dermatología. La arginina está así muy implicada en los procesos de cicatrización debido a su carácter antioxidante. Es descrito también como sustrato para la síntesis de colágeno (Chithra P. y col., J. Clin. Biochem. Nutr. (1995) , vol.18, pp.111-117 y referencias citadas) .

La presencia de la citrulina es descubierta en las proteínas epidérmicas (Kubilus J. y col., Biochim. Biophys. Acta (1979) , vol.581, pp.114-121) y en las proteínas capilares (Rogers G.E. y col., Biochim. Biophys. Acta (1977) , vol.495, pp.159-175) , después de una conversión enzimática de los residuos de arginina laterales. La arginina y la citrulina son conocidas como los productos intermedios metabólicos del ciclo de la urea. Un aumento de la producción de urea endógena es buscado en los problemas de piel seca (Wohlrab J., Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. (2002) , vol.15, pp.44-54) .

Sin embargo, de manera inesperada y muy sorprendentemente, la solicitante ha comprobado el potencial genotóxico del susodicho dipéptido, tanto para la sustancia purificada extraída del alga Chondrus crispus como para una réplica conseguida por síntesis química.

Estos dos resultados proceden de investigaciones realizadas por la solicitante según las directivas de la OCDE 471, en el respeto de un método muy bien establecido actualmente en la búsqueda del potencial mutágeno para toda forma administrable en el hombre: el método de Ames (Kirkland D.J., Mutation Research (1994) , vol.312, pp.195199) , (ICH steering committee, 19 Julio 1995, Guidance on specific aspect of regulator y genotoxicity tests for pharmaceuticals) .

Resulta muy evidente que dicho comportamiento es absolutamente incompatible con la utilización en dermatología del dipéptido citrulinil-arginina.

En la presente invención se han realizado entonces las investigaciones con trabajos orientados hacia la obtención de formas de citrulinil-arginina desprovistas del potencial genotóxico, aunque conservando el conjunto de las actividades demostradas originalmente para el dipéptido.

La solicitante ha identificado así diferentes dipéptidos de síntesis, funcionalizados parcialmente o totalmente sobre tres de sus sitios posibles de sustitución, provistos de las mismas... [Seguir leyendo]

1. Aducto de algas extraído de macroalgas rojas, caracterizado porque está desprovisto de potencial genotóxico y es susceptible de ser obtenido por un procedimiento que comprende las etapas siguientes en el orden siguiente:

- extracción de dichas macroalgas rojas que comprenden el dipéptido natural citrulinil-arginina por medio de un solvente o de una mezcla de solventes aceptables en farmacia;

- enriquecimiento de la cantidad en peso de polipéptidos o proteínas intrínsecas por proteínas nativas intrínsecas o las proteínas extrínsecas estándares utilizables en farmacia hasta un contenido total por lo menos igual a 20%;

- eventualmente la incorporación de un contenido titulado del dipéptido citrulinil-arginina obtenido por vía química;

- tratamiento térmico del extracto resultante.

2. Aducto según la reivindicación 1, caracterizado porque dicha alga es un alga que ha acumulado de manera óptima 10% en peso seco de citrulinil-arginina con respecto al peso total del alga seca.

3. Aducto según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicha extracción es realizada a reflujo de dicho/a solvente o mezcla de solventes durante un periodo de 2 a 4 horas.

4. Aducto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho/a solvente o mezcla de solventes es una mezcla de agua y de una solución etanólica amoniacal.

5. Aducto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicha etapa de enriquecimiento resulta de una concentración de dichos/as polipéptidos o proteínas intrínsecas.

6. Aducto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicha etapa de enriquecimiento resulta de la incorporación de una cantidad de proteínas estándares utilizables en farmacia.

7. Aducto según la reivindicación 6, caracterizado porque las proteínas estándares utilizables en farmacia son seleccionadas de entre las proteínas vegetales, las proteínas animales y las proteínas de algas, o sus hidrolizados respectivos, preferentemente las proteínas de trigo o de soja, el colágeno, la elastina, el colágeno marino, la espirulina, las proteínas de microalgas.

8. Aducto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la etapa de tratamiento es realizada durante 3 horas a 40°C.

9. Utilización no terapéutica del aducto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y 20 como agente de cuidado y de tratamiento de la piel y las faneras.

10. Utilización del aducto según la reivindicación 9 como agente de cuidado y de tratamiento destinado a resultar una fuente potencial de nitrógeno.

11. Utilización del aducto según la reivindicación 9 como agente de cuidado y de tratamiento que permite activar el metabolismo energético celular.

12. Utilización del aducto según la reivindicación 9 como agente de cuidado y de tratamiento que presenta unas propiedades citoestimulantes.

13. Utilización del aducto según la reivindicación 9 como agente de cuidado y de tratamiento que permite mejorar el comportamiento de una piel o de faneras sometidas al frío.

14. Procedimiento de obtención de un aducto de algas de macroalgas rojas desprovisto de potencial genotóxico caracterizado porque comprende las etapas siguientes, en el orden siguiente:

a. la extracción de dichas macroalgas rojas que comprenden el dipéptido natural citrulinil-arginina por medio de un solvente o de una mezcla de solventes aceptables en farmacia;

b. el enriquecimiento de la cantidad en peso de polipéptidos o proteínas intrínsecas por las proteínas nativas intrínsecas o las proteínas extrínsecas estándares utilizables en farmacia hasta un contenido total por lo menos igual a 20%;

c. eventualmente la incorporación de un contenido titulado del dipéptido citrulinil-arginina obtenido por vía química;

d. el tratamiento térmico del extracto resultante.

15. Procedimiento según la reivindicación 14, caracterizado porque dicha extracción es realizada a reflujo de dicho/a

solvente o mezcla de solventes durante un periodo de 2 a 4 horas. 5

16. Procedimiento según la reivindicación 14 ó 15, caracterizado porque dicho/a solvente o mezcla de solventes es una mezcla de agua y de una solución etanólica amoniacal.

17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizado porque dicha etapa de 10 enriquecimiento resulta de una concentración de dichos polipéptidos o proteínas intrínsecas.

18. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, caracterizado porque dicha etapa de enriquecimiento resulta de la incorporación de una cantidad de proteínas estándares utilizables en farmacia.

19. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, caracterizado porque la etapa de tratamiento es realizada durante 3 horas a 40°C.

20. Aducto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque la macroalga roja es Chondrus crispus. 20