UN MICROORGANISMO DEL GÉNERO CORYNEBACTERIUM QUE TIENE UNA PRODUCTIVIDAD AUMENTADA DE L-LISINA Y UN MÉTODO DE PRODUCIR L-LISINA USANDO EL MISMO.

Un microorganismo del género Corynebacterium que tiene una productividad aumentada de L-lisina y un método de producir L-lisina usando el mismo. Campo técnico La presente invención se refiere a un microorganismo del género Corynebacterium que tiene una productividad aumentada de L-lisina y un método de producir L-lisina usando el mismo. Más particularmente, la presente invención se refiere a un microorganismo recombinan del género Corynebacterium que tiene una productividad aumentada de L-lisina inactivando el gen endógeno NCg11090 que tiene la secuencia de aminoácidos que contiene residuos repetidos de aspartato y a un método de producir L-lisina usando el mismo. Fundamento técnico Los L-aminoácidos, en particular la L-lisina han sido usados ampliamente para piensos, como una materia prima para medicinas y en la industria farmacéutica, y se producen por fermentación de los microorganismos del género Corynebacterium. Los microorganismos del género Corynebacterium, particularmente el Corynebacterium glutamicum es un microorganismo Gram-positivo que se usan ampliamente en la producción de L-aminoácidos. El método de producir L- aminoácidos usando los microorganismos del género Corynebacterium es muy importante. Por tanto, ha habido muchos intentos de mejorar el método. Uno de los intentos es mejorar los microorganismos del género Corynebacterium que producen L-aminoácidos por interrupción de genes específicos o atenuación de la expresión de genes específicos usando técnicas de DNA re- combinante. Por ejemplo, la patente de EE.UU. Nº 6.872.553 describe un método de producir L-lisina a partir de microorganismos del género Corynebacterium mediante fermentación, que comprende las siguientes etapas: a) dejar crecer microorganismos del género Corynebacterium que tienen un DNA atenuado que codifica fosfoenolpiruvato (PEP)-carboxiquinasa (PCK) por un método de mutación seleccionado del grupo que consiste en inserción de uno o más pares de bases en el DNA, deleción de uno o más pares de bases en el DNA, transición o transversión de pares de bases introduciendo un codón sin sentido en el DNA o que tienen reducida la fosfoenolpiruvato (PEP)- carboxiquinasa (PCK) comparada con los microorganismos del género Corynebacterium que no están atenuados; b) concentrar el producto L-aminoácido deseado en el medio o células; y c) separar el L-aminoácido. Además, se han realizado muchos estudios sobre cómo cada gen implicado en la biosíntesis de L-aminoácidos afecta a la producción de L-aminoácidos amplificando los genes para desarrollar microorganismos del género Cory- nebacterium (Eggeling, Aminoacids 6, 261-272 (1994)). También puede ser desarrollados microorganismos del género Corynebacterium introduciendo genes extraños de otras bacterias. Por ejemplo, la publicación de patente japonesa Nº Hei 7-121228 describe un método de producir L-ácido glutámico y L-prolina cultivando el microorganismo del género Corynebacterium o Brevibacterium que contiene la construcción recombinante entre el fragmento de DNA que tiene la información genética que implica la síntesis de ácido cítrico-sintasa y el DNA vector, y producir Lácido glutámico y L-prolina a partir de los cultivos. Sin embargo, a pesar de las pruebas anteriores todavía se requiere producir una cepa con productividad aumentada de L-lisina. Descripción de la invención Problema técnico Los autores de la presente invención han estudiado desarrollar un microorganismo capaz de producir L-lisina con alto rendimiento con el gen diana endógeno NCg11090 que tiene residuos repetidos de aspartato en su secuencia de aminoácidos en microorganismos del género Corynebacterium. Y los autores de la presente invención trataron de aumentar la productividad de L-lisina reduciendo el consumo intracelular innecesario de aspartato, que es el compuesto intermedio de la biosíntesis de lisina, inactivando el gen diana anterior. Es un objeto de la presente invención proporcionar un microorganismo del género Corynebacterium con productividad aumentada de L-lisina. Es otro objeto de la presente invención proporcionar un método de producir L-lisina usando el microorganismo antes citado. Solución técnica Los objetos anteriores y otros objetos de la presente invención se pueden conseguir mediante las siguientes realizaciones de la presente invención. La presente invención se describe con detalle a continuación. 2   Para conseguir los objetos anteriores, la presente invención proporciona un microorganismo del género Corynebacterium con productividad aumentada de L-lisina mediante la inactivación del gen endógeno NCg11090 del mismo, en donde el gen endógeno NCg11090 tiene la secuencia de nucleótidos representada por la SEQ ID NO: 1. En esta invención el microorganismo que tiene productividad L-lisina puede ser seleccionado del grupo que consiste en Corynebacterium glutamicum ATCC 13032, Corynebacterium thermoaminogenes FERM BP-1539, Corynebacterium glutamicum KFCC 10881, y Corynebacterium glutamicum KFCC 11001, pero no siempre limitado a ellos. El aspartato es un compuesto intermedio de la vía de la biosíntesis de lisina, que es funcional como una unidad de composición celular o síntesis de proteína o un regulador. Como unidad de composición celular, el aspartato se usa para la síntesis de ácido nucleico, aminoácidos o grasa. Como unidad de síntesis de proteína, el aspartato se usa para la estructura de proteínas o como un grupo funcional principal. En particular, como unidad para la síntesis de proteínas, los genes traducidos en proteínas se dividen en dos grupos; uno es el de los genes esenciales para el crecimiento, mantenimiento y regulación celulares y el otro es el grupo de los genes no esenciales para dichos procesos. Los genes no esenciales se dividen como sigue: genes ya no requeridos de acuerdo con los otros genes que tienen funciones iguales; genes extraños introducidos desde el exterior, tales como los genes de virus; genes necesarios en algunos casos, pero no necesarios para otras condiciones, tales como para la producción de lisina; y genes cuyas funciones todavía no han sido explicadas. Las células consumen aspartato masivamente para componer proteínas de los genes no esenciales. Por tanto, si se eliminan los genes no esenciales, se considera que puede reducirse la cantidad masiva de consumo de aspartato por los genes no esenciales, lo cual favorece la reducción del consumo de aspartato no necesario y también favorece la producción de lisina en la misma condición. Para desarrollar un microorganismo con productividad mejorada de L-lisina, los autores de la presente invención buscaron un gen que contuviera residuos de aspartato, el compuesto intermedio de la biosíntesis de lisina, en su secuencia de aminoácidos que codifica una proteína, más que cualesquiera otros genes, de la base de datos de secuencia del genoma de la secuencia completamente analizada de Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 (NCBI GI: 19552361, SEQ. ID. NO: 1). Como resultado se confirmó que los residuos repetidos de aspartato estaban presentes en el C-terminal de la proteína NCg11090 que tiene la secuencia de aminoácidos representada por la SEQ. ID. NO: 3. Sin embargo, no se ha explicado cómo esos residuos repetidos de aspartato en la secuencia de aminoácidos podrían estar implicados en la biosíntesis de lisina en una cepa productora de lisina. En esta invención, el gen NCg11090 es un gen que existe endógenamente en el microorganismo del género Corynebacterium, y es conocido como un gen que codifica una proteína hipotética cuyas funciones son desconocidas. La actividad del gen se predice a partir de un análisis de la secuencia completa de un genoma de Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 y se confirmó que tenía residuos repetidos de aspartato en el C-terminal y tenía la secuencia de nucleótidos representada por la secuencia SEQ. ID. NO: 1. El gen NCg11090 endógeno de un microorganismo del género Corynebacterium de la presente invención preferiblemente tiene alta homología con la secuencia representada por la SEQ. ID. NO: 1. En esta invención, la "inactivación" se puede inducir por cualquier método de inactivación conocido por los expertos en la técnica. El término "inactivación" en la presente memoria intenta significar que la expresión del gen NCg11090 es reducida hasta un bajo nivel comparado con el de una cepa de tipo natural o se producen genes que no son expresados y genes que expresan productos que no tienen actividad o una actividad reducida a pesar de ser expresados. En esta invención, la "inactivación" puede ser inducida por uno o más métodos de mutación seleccionados del grupo que consiste en la inserción de uno o más pares de bases en el gen NCg11090 gene, deleción de uno o más pares de bases en el gene, transición o transversión de pares de bases insertando un codón... [Seguir leyendo]

1. Un microorganismo del género Corynebacterium que tiene productividad aumentada de L-Iisina por inactivación de un gen que tiene residuos repetidos de aspartato en su secuencia de aminoácidos, en donde el gen es el gen endógeno NCg11090 que tiene la secuencia de nucleótidos representada por la SEQ. ID. NO: 1. 2. El microorganismo del género Corynebacterium de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la inactivación es inducida por uno o más métodos de mutación seleccionados del grupo que consiste en inserción de uno o más pares de bases en el gen NCg11090, deleción de uno o más pares de bases en el gen, y transición o transversión de pares de bases insertando un codón sin sentido en el gen. 3. El microorganismo del género Corynebacterium de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la inactivación es inducida por la transformación del microorganismo del género Corynebacterium con un vector que contiene una parte del gen endógeno NCg11090 y un marcador de antibióticos. 4. El microorganismo del género Corynebacterium de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el microorganismo es Corynebacterium glutamicum KFCC 10881-CO01-0018 (KCCM 10810P) seleccionado por cultivo en presencia de antibióticos. 5. Un método de producir L-Iisina que comprende las siguientes etapas: producir L-lisina en los cultivos o células del microorganismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y recoger L-lisina de los cultivos. 9