TRATAMIENTO DE LA FIBROSIS MEIDANTE EL ANTAGONISMO DE LA IL-3 Y DE LAS CADENAS DEL RECEPTOR DEL IL-3.

Tratamiento de la fibrosis mediante el antagonismo de la IL-3 y de las cadenas del receptor de IL-3 La presente solicitud es una continuación en parte de la solicitud con nº de serie 08/841.751, presentada el 30 de abril, 1997, que es una solicitud divisional de la solicitud con nº de serie 08/609.572, presentada el 1 de marzo, 1996. Campo de la invención La presente invención se refiere al tratamiento y a la inhibición de la fibrosis mediante el antagonismo de la interacción de la IL-3 con su receptor y con los componentes del receptor. Antecedentes de la invención ES 2 367 352 T3 Se conoce la existencia de una diversidad de moléculas reguladoras, denominadas citoquinas, que incluyen a la interleuquina-13 (IL-13). Se divulgan diversas formas de la proteína de IL-13 y ADN que codifica diversas formas de actividad IL-13 en McKenzie et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:3735 (1993); Minty et al., Nature, 362:248 (1993); y Aversa et al., documento WO 94/04680. Por tanto, el término IL-13 incluye proteínas que tienen la secuencia y/o actividad biológica divulgada en estos documentos, producidas mediante técnicas de modificación genética recombinante, purificadas a partir de fuentes celulares que producen el factor de modo natural o tras una inducción con otros factores, o sintetizadas mediante técnicas químicas, o una combinación de lo anterior. La IL-13 es una citoquina que se ha implicado en la producción de diversas actividades biológicas que incluyen la induccón de la conmutación de IgG e IgE, incluyendo en células B inmaduras humanas (Punnonen et al., J. Immunol., 152:1094 (1994)); la inducción de la transcripción de la transcripción de la cadena pesada () de IgE de la línea germinal y la expresión de CD23 en células B humanas normales (Punnonen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:3730 (1993)); y la inducción de la proliferación de células B en presencia de CD40L o mAb anti9-CD40 (Cocks et al., Int. Immunol., 5:657 (1993)). Aunque muchas actividades de IL-13 son similares a las de IL-4, en contraste con la IL-4, la IL-13 no tiene efectos estimulantes del crecimiento sobre células T activadas o clones de células T (Zurawski et al., EMBO J., 12:2663 (1993)). Al igual que la mayoría de las citoquinas, la IL-13 muestra ciertas actividades biológicas interaccionando con un receptor de IL-13 (IL-13R) sobre la superficie de células diana. El IL-13R y el receptor de IL-4 (IL-4R) comparten un componente común, que se requiere para la activación del receptor; sin embargo, la IL-13 no se une a células transfectadas con IL-4R de 130 kD (Zurawski et al., supra). Por tanto, el IL-13R debe contener al menos otra cadena de unión al ligando. Los receptores de citoquinas están compuestos habitualmente por dos o tres cadenas. La clonación de una cadena de unión al ligando para IL-13 se ha divulgado en fecha reciente (Hilton et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 93:497-501). Sería deseable identificar y clonar la secuencia para cualquier otra cadena de unión a IL-13 del IL-13R de forma que puedan producirse proteínas de IL-13R por diversas razones, incluyendo la producción de productos terapéuticos y la búsqueda de inhibidores de la unión de IL-13 al receptor y la señalización del receptor. El documento WO 97/31946 describe la cadena de unión a IL-13 del receptor de IL-13 (IL-13bc) e indica que los inhibidores de IL-13bc e IL-13R pueden ser útiles para tratar o modular trastornos relacionados con IL-13, tales como trastornos alérgicos, asma, enfermedades del complejo inmunológico (tales como lupus, síndrome nefrótico, nefritis, glomerulonefritis, tiroiditis y enfermedad de Grave), deficiencias inmunológicas y cáncer. Zhu et al. (J. Clin. Invest., 103 (1999), 779) divulgan que la expresión dirigida de la IL-13 en el tejido pulmonar de ratones conduce a la inflamación, la hipersecreción de moco, la formación de fibrosis subepitelial, anomalías fisiológicas y producción de eotaxina. Chiaramonte et al. (J. Immunol., 162 (1999), 920) describen una reducción en el tamaño de granulomas pulmonares inducidos por los huevos de Schistosoma mansoni en ratones tras un tratamiento con una proteína de fusión de IL­ 13R2-Fc soluble. Descubrieron, sin embargo, que el depósito de colágeno, que es un componente principal de los depósitos fibróticos en la fibrosis, no se vio afectado en estos ratones. El documento WO 96/04388 describe una proteína soluble que tiene actividad antagonista o antagonista parcial de IL-4 y/o de IL-13, que comprende un mutante o un variante de IL-4 condensado con al menos un dominio constante de inmunoglobulina humana, o su fragmento. El documento WO 96/04388 reivindica el uso, entre otras reivindicaciones, de la proteína soluble para la precipitación de composiciones farmacéuticas para tratar trastornos que se producen como resultado de acciones indeseables de IL-4 y/o IL-13. 2 La presente invención proporciona el uso de una IL-13bc o su fragmento, que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; (b) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 22 al 334; (c) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 357 al 383; (d) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4; (e) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 26 al 341; (f) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 263 al 380; y (g) los fragmentos (a)-(f) que tienen una actividad biológica de la cadena de unión del receptor de IL-13, para la fabricación de un medicamento para tratar la fibrosis de tejidos en un mamífero. Según la presente invención, se divulgan polinucleótidos que codifican las cadenas de unión a IL-13 del receptor de interleuquina-13 que incluyen, sin limitación, las de los receptores murino y humano. En ciertas realizaciones, la invención proporciona un polinucléotido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 desde el nucleótido 256 al nucleótido 1404; (b) la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3 desde el nucleótido 103 al nucleótido 1242; (c) una secuencia de nucleótidos que varía de la secuencia de nucleótidos especificada en (a) o (b) como resultado de la degeneración del código genético; (d) una secuencia de nucleótidos capaz de hibridarse bajo condiciones rigurosas a los nucleótidos específicados en (a) o (b); (e) una secuencia de nucleótidos que codifica una especie homóloga a la secuencia especificada en (a) o (b); y (f) un variante alélico de la secuencia de nucleótidos especificada en (a) o (b). Preferiblemente, la secuencia de nucleótidos codifica una proteína que tiene una actividad biológica del receptor de IL-13 humano. La secuencia de nucleótidos puede estar operablemente unida a una secuencia control de la expresión. En realizaciones preferidas, el polinucleótido comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 desde el nucleótido 256 al nucleótido 1404; la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 desde el nucléotido 319 al nucleótido 1257; la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 desde el nucléotido 1324 al nucléotido 1404; la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3 desde el nucléotido 103 al nucleótido 1242; la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3 desde el nucléotido 178 al nucleótido 1125; o la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3 desde el nucléotido 1189 al nucleótido 1242. La invención también proporciona polinucleótidos aislados que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido o una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; (b) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 22 al 334; (c) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 357 al 383; (d) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4; ES 2 367 352 T3 (e) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 26 al 341; (f) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 363 al 380; y (g) los fragmentos (a)-(f) que tienen una actividad biológica de la cadena de unión del receptor de IL-13. Otras realizaciones preferidas codifican la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 1 al 331, y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 26 al 331. También se proporcionan células hospedantes, preferiblemente células de mamífero, transformadas con los polinucleótidos. 3 En otras realizaciones, la invención proporciona un procedimiento para producir una proteína IL-13bc. El procedimiento comprende: (a) cultivar un cultivo de la célula hospedante de la presente invención en un medio de cultivo adecuado; y (b) purificar la proteína IL-13bc humana del cultivo.... [Seguir leyendo]

1.- El uso de un antagonista de IL-13 para la fabricación de un medicamento para tratar la fibrosis de tejidos en un mamífero, en el que dicho antagonista se selecciona del grupo que consiste en una proteína IL-13bc, una forma soluble de IL-13R1, un anticuerpo contra IL-13 o un fragmento de unión a IL-13 de éste, un anticuerpo contra IL­ 13bc o un fragmento de unión a IL-13bc de éste, y una anticuerpo contra IL-13R1 o un fragmento de unión a IL­ 13R1 de éste. 2.- Un antagonista de IL-13, en el que dicho antagonista se selecciona del grupo que consiste en una proteína IL­ 13bc, una forma soluble de IL-13R1, un anticuerpo contra IL-13 o un fragmento de unión a IL-13 de éste, un anticuerpo contra IL-13bc o un fragmento de unión a IL-13bc de éste, y una anticuerpo contra IL-13R1 o un fragmento de unión a IL-13R1 de éste, para su uso en el tratamiento de la fibrosis de tejidos en un mamífero. 3.- El uso según la reivindicación 1 o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 2, en el que dicho antagonista es un anticuerpo contra IL-13 o un fragmento de unión a IL-13 de éste. 4.- El uso según la reivindicación 1 o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 2, en el que dicha proteína IL-13bc comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; (b) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 22 al 334; (c) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 357 al 383; (d) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4; ES 2 367 352 T3 (e) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 26 al 341; (f) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 363 al 380; y (g) los fragmentos (a)-(f) que tienen una actividad biológica de la cadena de unión del receptor de IL-13. 5.- El uso según la reivindicación 1 o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 2, en el que dicha fibrosis de tejidos afecta a un tejido seleccionado del grupo que consiste en hígado, epidermis de la piel, endodermis de la piel, músculo, tendón, cartílago, tejido cardíaco, tejido pancreático, tejido pulmonar, tejido uterino, tejido neuronal, testículos, ovario, glándula adrenal, arterias, venas, colon, intestino delgado, tracto biliar e intestino. 6.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 5, en el que dicho tejido es tejido pulmonar. 7.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 5, en el que dicho tejido es el hígado. 8.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 7, en el que dicha fibrosis es el resultado de una infección de esquistosoma. 9.- El uso según la reivindicación 1 o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 2, en el que dicha fibrosis es el resultado de la cicatrización de una herida. 10.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 9, en el que dicha herida es una incisión quirúrgica. 11.- El uso según la reivindicación 1 o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 2, para la fabricación de un medicamento para inhibir la formación de fibrosis de tejidos en un mamífero. 12.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 11, en el que dicha fibrosis de tejidos afecta a un tejido seleccionado del grupo que consiste en hígado, epidermis de la piel, endodermis de la piel, músculo, tendón, cartílago, tejido cardíaco, tejido pancreático, tejido pulmonar, tejido uterino, tejido neuronal, testículos, ovario, glándula adrenal, arterias, venas, colon, intestino delgado, tracto biliar e intestino. 37 13.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 12, en el que dicho tejido es tejido pulmonar. 14.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 12, en el que dicho tejido es el hígado. 15.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 14, en el que dicha fibrosis es el resultado de una infección de esquistosoma. 16.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 11, en el que dicha fibrosis es el resultado de la cicatrización de una herida. 17.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 16, en el que dicha herida es una incisión quirúrgica. 18.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 11, en el que dicho antagonista es un anticuerpo contra IL-13 o un fragmento de unión a IL-13 de éste. 19.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 11, en el que dicha proteína IL-13bc comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: (a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; (b) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 22 al 334; (c) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2 desde el aminoácido 357 al 383; (d) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4; ES 2 367 352 T3 (e) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 26 al 341; (f) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 desde el aminoácido 363 al 380; y (g) los fragmentos (a)-(f) que tienen una actividad biológica de la cadena de unión del receptor de IL-13. 20.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 11, en el que dicha fibrosis de tejidos afecta a un tejido seleccionado del grupo que consiste en hígado, epidermis de la piel, endodermis de la piel, músculo, tendón, cartílago, tejido cardíaco, tejido pancreático, tejido pulmonar, tejido uterino, tejido neuronal, testículos, ovario, glándula adrenal, arterias, venas, colon, intestino delgado, tracto biliar e intestino. 21.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 20, en el que dicho tejido es tejido pulmonar. 22.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 20, en el que dicho tejido es el hígado. 23.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 21, en el que dicha fibrosis es el resultado de una infección de esquistosoma. 24.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 11, en el que dicha fibrosis es el resultado de la cicatrización de una herida. 25.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 24, en el que dicha herida es una incisión quirúrgica. 26.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-25, en el que dicho medicamento es para la administración a una dosis de 0,1 g a 100 mg de proteína IL-13bc o de antagonista de IL­ 13bc por kg de peso corporal. 27.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 26, en el que dicha dosis es de 20 g de proteína IL-13bc o de antagonista de IL-13bc por kg de peso corporal. 38 ES 2 367 352 T3 28.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según la reivindicación 26, en el que dicha dosis es de 500 g de proteína IL-13bc o de antagonista de IL-13bc por kg de peso corporal. 29.- El uso o el antagonista de IL-13 para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 26-28, en el que dicha administración comprende una inyeccion cutánea, subcutánea o intravenosa. 39 ES 2 367 352 T3 ES 2 367 352 T3 41 ES 2 367 352 T3 42 ES 2 367 352 T3 43 ES 2 367 352 T3 44 ES 2 367 352 T3 ES 2 367 352 T3 46 ES 2 367 352 T3 47 ES 2 367 352 T3 48