Un método para separar selectivamente un glucósido esteroideo de fórmula 1 **(Ver fórmula)**de uno o más glucósidos esteroideos seleccionados de entre los compuestos 3 a 13 definidos a continuación o entre otros compuestos presentes en el material vegetal de la familia Asclepiadaceae que contiene el mismo,

5 comprendiendo el método poner en contacto el material vegetal o material derivado del mismo (en lo sucesivo denominado el material, con dióxido de carbono líquido o supercrítico en condiciones en las que el glucósido esteroideo de fórmula 1 se disuelve en el dióxido de carbono líquido o supercrítico con preferencia a uno o más de los compuestos 3 a 13 u otros compuestos, y posteriormente recuperar el glucósido esteroideo de fórmula 1 de la solución de dióxido de carbono extraída sustancialmente exenta de cualquier componente del material con sabor desagradable y sustancialmente exenta de uno o más compuestos de 3 a 13: **(Ver fórmula)**Compuesto R 1 R 2 3 glu-glu-glu tig-the-ole4 glu-glu tig-mda-cym5 glu-glu-glu tig-cym-cym 6 glu-glu-glu tig-ole-cym-cym-cym 7 glu-glu-glu tig-ole-cym8 glu-glu-glu ang-mda-cym9 glu-glu-glu tig-the-cym10 glu-glu-glutig-11 glu-glu-glu tig-cym12 glu-glu-glu tig-the-ole-cym13 glu-glu-glu tig-the-cym-cym- ole = oleandrosa, cym = cimarrosa, glu = glucosa, mda = 3-O-metil-6-desoxialosa, tig = tigloil, ang = angeloil, the = tevetosa

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Campo de la invención

La presente invención se refiere a la separación selectiva o la extracción de los glucósidos esteroideos a partir de materiales que contienen más de uno de estos compuestos y, opcionalmente, otros componentes. Más específicamente, dichos materiales pueden ser material de la plante en la que los glucósidos esteroides se producen en la naturaleza.

Antecedentes de la invención

Los extractos que se pueden obtener de las plantas de la familia Asclepiadaceae, en particular el género Hoodia (anteriormente los géneros Hoodia y Trichocaulon), se ha demostrado que contienen los glucósidos esteroides 1, que es un compuesto que suprime el apetito (solicitud PCT WO 98/46243).

Un proceso de extracción se esboza en la solicitud anterior, que implica el tratamiento del material vegetal con un disolvente para extraer una fracción que tiene actividad supresora del apetito, que separa la solución de extracción del resto del material vegetal, que elimina el disolvente de la solución de extracción y que recupera el extracto. Los disolventes mencionados específicamente para realizar la extracción de uno o más de entre cloruro de metileno (diclorometano), agua, metanol, hexano, acetato de etilo o mezclas de los mismos.

**(Ver fórmula)**

El proceso de extracción del disolvente de la técnica anterior tiende, sin embargo, a dar como resultado una mezcla de compuestos extraídos, no todos los cuales tienen características deseables. Por lo general, algunos pueden tener un sabor desagradable.

La necesidad de un procedimiento de fraccionamiento o de separación posterior para eliminar compuestos indeseables extraídos conduce al aumento de los costes de fabricación y a procedimientos complicados, lo que es preferible evitar.

La solicitud de patente de EE.UU. nº US-A-2003/0152648, cuya descripción se incorpora al presente por referencia, describe la extracción de los glucósidos de pregnano, en particular estavarósidos, de la planta de Orbea variegata, un miembro de la familia Asclepiadaceae. El proceso de extracción implica la extracción inicial del disolvente del material vegetal secado y molido, utilizando un disolvente adecuado. Se afirma generalmente que los "disolventes adecuados incluyen agua, ácidos diluidos, disolventes orgánicos, disolventes líquidos críticos, supercríticos o casi críticos, por ejemplo, dióxido de carbono, óxido nitroso, propano, etano, etileno y fluorohidrocarburos, y mezclas de cualquiera de estos". El disolvente preferido se dice que es un disolvente a base de alcohol, siendo el etanol el más preferido. La extracción con etanol es la única técnica mostrada en algún ejemplo de trabajo. La técnica de extracción con disolvente se dice que puede utilizarse para extraer estavarósides procedentes del material vegetal, y no hay ninguna enseñanza o sugerencia de usarlo para separar selectivamente glucósidos esteroides deseables de los glucósidos esteroideos indeseables.

Moore y Taylor (J. Nat. Prod. de 1996, 59, 690-693), cuya descripción se incorpora a la presente por referencia, describen la extracción de los glucósidos cardíacos, digoxina y acetildigoxina, de Digitalis lanata utilizando dióxido de carbono modificado con metanol cerca de supercrítico. Los autores indican que para efectuar la extracción eficiente de la extracción el disolvente de extracción fue metanol y dióxido de carbono, donde el metanol se encontraba en el intervalo de 10 a 25%, con las condiciones óptimas que emplean CO2 modificado con metanol al 20%.

Se ha descubierto ahora, sorprendentemente, que, utilizando una técnica concreta de extracción descrita a continuación, específicamente la utilización de dióxido de carbono líquido o supercrítico, se puede conseguir una extracción selectiva relativamente eficaz de los glucósidos esteroides deseables de material vegetal de Asclepiadaceae, lo que implica la separación selectiva de glucósidos esteroides deseables de los glucósidos esteroideos indeseables, reduciendo o eliminando la necesidad de tratamiento posterior para eliminar los componentes indeseables.

Breve descripción de la invención

La presente invención proporciona un método para separar selectivamente un glucósido esteroideo de fórmula 1

**(Ver fórmula)**

5 de uno o más glucósidos esteroideos seleccionados de entre los compuestos 3 a 13 definidos a continuación o entre otros compuestos presentes en el material vegetal de la familia Asclepiadaceae que contiene el mismo, comprendiendo el método poner en contacto el material vegetal o material derivado del mismo (en lo sucesivo denominado "el material", con dióxido de carbono líquido o supercrítico en condiciones en las que el glucósido esteroideo de fórmula 1 se disuelve en el dióxido de carbono líquido o supercrítico con preferencia a uno o más de los compuestos 3 a 13 u otros compuestos, y posteriormente recuperar el glucósido esteroideo de fórmula 1 de la solución de dióxido de carbono extraída sustancialmente exenta de cualquier componente del material con sabor desagradable y sustancialmente exenta de uno o más compuestos de 3 a 13:

**(Ver fórmula)**

Compuesto R 1 R 2

3 glu-glu-glu- tig-the-ole

4 glu-glu- tig-mda-cym

5 glu-glu-glu- tig-cym-cym

6 glu-glu-glu- tig-ole-cym-cym-cym

7 glu-glu-glu- tig-ole-cym

8 glu-glu-glu- ang-mda-cym

9 glu-glu-glu- tig-the-cym

10 glu-glu-glu-tig-

11 glu-glu-glu- tig-cym

12 glu-glu-glu- tig-the-ole-cym

13 glu-glu-glu- tig-the-cym-cym-

ole = oleandrosa, cym = cimarrosa, glu = glucosa, mda = 3-O-metil-6-desoxialosa, tig = tigloil, ang = angeloil, the = tevetosa. En la descripción siguiente de la invención, el glucósido esteroideo de fórmula 1 se denominará “glucósido esteroideo deseable” y los glucósidos esteroideos que se separan de éste se denominarán “glucósidos esteroideos indeseables”.

El uso de dióxido de carbono líquido o supercrítico como disolvente de extracción es conocido y están disponibles los aparatos para la realización de la técnica. Para un estudio general de la tecnología, se puede consultar a Kaiser 20 et al., Pharmazie 56, 907-926 (2001) y Lang et al., Talanta 52, 771-782 (2001).

Las condiciones de la extracción que pueden variarse para el control de la selectividad son principalmente la temperatura y la presión del aparato sellado de extracción. Sin embargo, el estado de la técnica en general ha restringido el uso de la técnica a la extracción de compuestos activos procedentes de la pared celular inactiva y otros materiales y el uso de dióxido de carbono líquido o supercrítico como medio para separar selectivamente glucósidos esteroideos deseables de glucósidos esteroides indeseables relativamente químicamente similares en el material vegetal de la familia Asclepiadaceae no se conocía o sugería con anterioridad.

Después de una extracción inicial del material, se pueden realizar más ciclos de mayor extracción en el resto del material, si se desea, usando dióxido de carbono fresco, con el fin de maximizar el rendimiento de los compuestos extraídos.

Se puede realizar una extracción inicial utilizando dióxido de carbono líquido, y realizar una posterior extracción en el resto del material utilizando dióxido de carbono supercrítico. Alternativamente, tanto una extracción inicial como una posterior puede utilizar dióxido de carbono líquido. Aún más, tanto una extracción inicial como una posterior pueden utilizar dióxido de carbono supercrítico. Las condiciones de estas extracciones sucesivas pueden elegirse para eliminar preferentemente componentes particulares del material.

El método de la invención puede realizarse, si se desea, utilizando un flujo de dióxido de carbono con recuperación aguas abajo de los glucósidos esteroideos deseables.

El método de la presente invención puede utilizarse con otros procedimientos de extracción para eliminar otros componentes, p. ej., no esteroideos, de la materia que va a tratarse. Así, por ejemplo, una extracción inicial usando dióxido de carbono líquido se puede realizar en condiciones seleccionadas para eliminar preferentemente compuestos lipófílos indeseables, tales como los ácidos grasos del material. Una extracción posterior llevada a cabo en el resto del material... [Seguir leyendo]

1. Un método para separar selectivamente un glucósido esteroideo de fórmula 1

**(Ver fórmula)**

de uno o más glucósidos esteroideos seleccionados de entre los compuestos 3 a 13 definidos a continuación o entre otros compuestos presentes en el material vegetal de la familia Asclepiadaceae que contiene el mismo,5 comprendiendo el método poner en contacto el material vegetal o material derivado del mismo (en lo sucesivo denominado "el material", con dióxido de carbono líquido o supercrítico en condiciones en las que el glucósido esteroideo de fórmula 1 se disuelve en el dióxido de carbono líquido o supercrítico con preferencia a uno o más de los compuestos 3 a 13 u otros compuestos, y posteriormente recuperar el glucósido esteroideo de fórmula 1 de la solución de dióxido de carbono extraída sustancialmente exenta de cualquier componente del material con sabor desagradable y sustancialmente exenta de uno o más compuestos de 3 a 13:

**(Ver fórmula)**

ole = oleandrosa, cym = cimarrosa, glu = glucosa, mda = 3-O-metil-6-desoxialosa, tig = tigloil, ang = angeloil, the = tevetosa.

2. Un método según la reivindicación 1, en el que la mayoría de ácidos grasos y otro material lipídico se extraen en una primera extracción utilizando dióxido de carbono líquido a una primera presión, seguido de la extracción del glucósido esteroideo de fórmula 1 utilizando dióxido de carbono supercrítico a una segunda presión mientras que se dejan los glucósidos esteroideos seleccionados de entre los compuestos 3 a 13 u otros compuestos con la matriz vegetal.

3. Un método según la reivindicación 1 o 2, en el que se utiliza dióxido de carbono junto con una cantidad

relativamente pequeña de uno o más co-solventes acuosos u orgánicos, en el que el co-solvente se utiliza en una 20 cantidad inferior a aproximadamente el 10% en peso del dióxido de carbono.

4. Un método según la reivindicación 3, en el que el co-disolvente se selecciona de agua, metanol, etanol, hexano, heptano y cualquier mezcla o combinación de ellos.

5. Un método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el vegetal es una planta del género Hoodia.

6. Un método según la reivindicación 5, en el que la planta se selecciona de entre Hoodia gordonii, Hoodia currorii subsp. currorrii y Hoodia currorii subsp. lugardii.

5 7. Un método según la reivindicación 6, en el que la planta es Hoodia gordonii.

8. Un método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el extracto producido inicialmente se somete a una o más extracciones posteriores utilizando uno o más disolventes orgánicos para eliminar los compuestos residuales no deseados.

9. Un método según la reivindicación 8, en el que uno o más disolventes orgánicos se selecciona de acetona, 10 acetato de etilo, heptano, etanol, hexano y cualquier mezcla o combinación de los mismos.

10. Un método según la reivindicación 8, en el que uno o más disolventes orgánicos se selecciona de acetona, heptano y cualquier mezcla o combinación de los mismos.