Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con la de la SEC ID Nº:

4 en toda la longitud de la SEC ID Nº: 4

Campo de la invención

La presente invención se refiere a polipéptidos recientemente identificados y a polinucleótidos que codifican a dichos polipéptidos, a su uso en el diagnóstico y en la identificación de compuestos que pueden ser agonistas, antagonistas que son potencialmente útiles en terapia y a la producción de dichos polipéptidos y polinucleótidos. Antecedentes de la invención

Actualmente el procedimiento de descubrimiento de fármacos experimenta una revolución fundamental ya que abarca “genómica funcional”, es decir, biología basada en el genoma o en genes de alto rendimiento. Esta estrategia, como un medio para identificar genes y productos génicos como dianas terapéuticas, está sustituyendo rápidamente a las estrategias iniciales basadas en “clonamiento posicional”. Podría identificarse un fenotipo, que fuera una función biológica o una enfermedad genética, y después este podría volver a rastrearse hasta el gen responsable, basándose en su posición en el mapa genético.

La genómica funcional se basa en gran medida en las tecnologías de secuenciación de ADN de alto rendimiento y en las diversas herramientas de bioinformática para identificar secuencias génicas de posible interés a partir de gran cantidad de bases de datos de biología molecular actualmente disponibles. Existe una necesidad permanente para identificar y caracterizar otros genes y sus polipéptidos/proteínas relacionados, como dianas para el descubrimiento de fármacos.

La presente invención proporciona un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con la de la SEC ID Nº 4 en toda la longitud de la SEC ID Nº 4. En el presente documento, estos polipéptidos se denominan “MAGI”. Estos polipéptidos y polinucleótidos son de interés en relación con procedimientos de tratamiento de determinadas enfermedades, que incluyen, pero sin limitación, neuropatías, lesión medular, degeneración neuronal, trastornos neuromusculares, trastornos psiquiátricos y trastornos del desarrollo, cáncer, ictus y trastornos inflamatorios, en lo sucesivo en el presente documento denominadas “enfermedades de la invención”.

Se cree que los polipéptidos de la presente invención son miembros de la familia de polipéptidos del reticulon. Por lo tanto, son de interés porque se ha demostrado que los miembros de esta familia presentan una prominente, pero no exclusiva, expresión en células del sistema nervioso. Se ha demostrado que la expresión de una isoforma de estos polipéptidos, la proteína C específica neuroendocrina (NSP-C) (J. Hens y col. Cell Tissue Res. 292:229-237,1998), se correlaciona con la diferenciación neuronal. Se sabe que el corte y empalme alternativo de los genes de esta familia de polipéptidos genera isoformas diferencialmente expresadas con funciones solapantes y distintas en tejidos diferentes (Geisler y col. Mamm. Genome 9:164-173, 1998). La similitud de aminoácidos entre los miembros de esta familia de polipéptidos con fragmentos de una proteína de elevado peso molecular, purificada de la médula espinal bovina (Spillmann y col. J. Biol. Chem. 273:15487, 1998) indica una posible función en la función de inhibición del crecimiento axonal para estas proteínas. De manera similar, la expresión de la proteína A específica neuroendocrina (NSP-A) en células cancerosas específicas (Senden y col. Histochem. Cell Biol. 108:155-165, 1997) puede indicar un posible uso de estos polipéptidos en el diagnóstico y o tratamiento de cánceres.

La detección de polinucleótidos que comprenden partes de MAGI en ADNc del cerebro fetal humano y en la médula espinal humana adulta y una isoforma de ARNm abundante > 5 kb en el cerebro adulto humano junto con diferentes transcritos posiblemente originados por corte y empalme alternativo en corazón, pulmón, hígado, riñón y músculo esquelético sugiere que las isoformas MAGI pueden realizar, de manera similar, funciones de solapamiento y distintas en estos tejidos. Por analogía con la semaforina de la familia de polipéptidos moduladores de neuritas puede postularse que estas isoformas diferentes funcionarían en cada uno de estos tejidos para controlar la inervación local por poblaciones neuronales distintas. Podría predecirse la expresión aberrante de isoformas específicas, por ejemplo, en el músculo esquelético para modificar la inervación neuronal motora y sensorial en enfermedades tales como esclerosis lateral amiotrófica (ELA).

La presencia de polipéptidos distintivos característicos y de regiones altamente hidrófobas en el polipéptido de la presente invención sugiere que su expresión en regiones del sistema nervioso y en tejidos que forman límites para el crecimiento, puede modular el crecimiento y encontrar la trayectoria durante el desarrollo y después de procedimientos patológicos o perjudiciales.

La expresión del polipéptido de la invención, fragmentos del mismo o, de manera alternativa, variantes del polipéptido cortadas y empalmadas, en la superficie de las células, bien de manera natural como una proteína secretada, o después de la liberación por lesión celular, pueden actuar sobre otras células bien a través de receptores específicos o patológicamente a través de interacciones no específicas para modular la adhesión, dispersión, migración o crecimiento celular Podría esperarse que esta inhibición fuera bien reversible o posiblemente permanente produciendo la muerte celular.

En lo sucesivo, en el presente documento, las propiedades biológicas de MAGI se denominan “actividad biológica de MAGI” o “actividad MAGI”. Preferentemente, un polipéptido de la presente invención presenta al menos una actividad biológica de MAGI.

Los polipéptidos de la presente invención también incluyen variantes de los polipéptidos mencionados anteriormente que tienen una identidad de al menos el 95 % con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 4, incluyendo todas las formas alélicas y variantes de corte y empalme. Dichos polipéptidos varían del polipéptido de referencia por inserciones, deleciones y sustituciones que pueden ser conservativas o no conservativas o cualquier combinación de las mismas. Las variantes particularmente preferidas son aquellas en las que se insertan, sustituyen o delecionan varios aminoácidos, por ejemplo de 20 a 10, de 10 a 5, de 5 a 3, de 3 a 2, de 2 a 1 ó 1, en cualquier combinación.

Los fragmentos preferidos son fragmentos biológicamente activos que median la actividad biológica de MAGI, incluyendo aquellos con una actividad similar o una actividad mejorada, o con una actividad no deseable disminuida. También se prefieren aquellos fragmentos que son antigénicos o inmunogénicos en un animal, especialmente en un ser humano.

Los fragmentos de los polipéptidos de la invención pueden usarse para la producción del correspondiente polipéptido de longitud completa por síntesis peptídica; por lo tanto, estas variantes pueden usarse como intermediarias para producir los polipéptidos de longitud completa de la invención. Los polipéptidos de la presente invención pueden estar en forma de proteína “madura” o pueden formar parte de una proteína más grande tal como una proteína precursora o de fusión. A menudo es ventajoso incluir una secuencia de aminoácidos adicional que contenga secuencias secretoras o líder, pro-secuencias, secuencias que ayuden en la purificación, por ejemplo restos de histidina múltiples o una secuencia adicional para la estabilidad durante la producción recombinante.

Los polipéptidos de la presente invención pueden prepararse de cualquier manera adecuada, por ejemplo aislando formas de fuentes de origen natural, procedentes de células huéspedes modificadas por ingeniería genética que comprenden sistemas de expresión (véase a continuación) o mediante síntesis química, usando, por ejemplo, sintetizadores peptídicos automatizados o una combinación de dichos procedimientos. En la técnica se conocen bien medios para la preparación de dichos polipéptidos.

La secuencia polinucleotídica de la SEC ID Nº 1 muestra homología con la proteína C específica neuroendocrina Humana (Roebroek y col, J. Biol. Chem. 268: 13439-13447, 1993). La secuencia polinucleotídica de la SEC ID Nº 1 es una secuencia de ADNc que codifica el polipéptido de la SEC ID Nº 2. La secuencia polinucleotídica que codifica al polipéptido de la SEC ID Nº 2 puede ser idéntica a la del polipéptido que codifica la secuencia de la SEC ID Nº 1

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1. Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 % de identidad con la de la SEC ID Nº: 4 en toda la longitud de la SEC ID Nº: 4.

2. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 4.

3. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que es el polipéptido de la SEC 10 ID Nº: 4.

4. Un anticuerpo que es inmunoespecífico para un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 3.

15 5. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 4, que es un anticuerpo monoclonal.

6. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 4 o 5, que es un anticuerpo monocatenario.

20 7. Una línea celular que expresa un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6.