Método para determinar si un sujeto no diabético con ulceración por estasis venosa,

o con una enfermedad o condición caracterizada por una curación de las heridas cutáneas crónicamente deteriorada en algunos pacientes, y como tal enfermedad o condición seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de llagas por presión y heridas quirúrgicas cutáneas que no se curan, es un sujeto al que sí se le curan las heridas o un sujeto al que no se le curan las heridas, comprendiendo dicho método el paso de: comparar el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en una muestra del sujeto con un valor umbral que discrimina entre sujetos a los que sí se les curan las heridas y sujetos a los que no se les curan las heridas, en donde si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico es superior al valor umbral el sujeto es un sujeto al que sí se le curan las heridas, y si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico está aproximadamente a la altura del o es inferior al valor umbral, el sujeto es un sujeto al que no se le curan las heridas

ÁMBITO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere al terreno de la curación de las heridas. En particular se refiere a los análisis para la determinación del nivel de óxido nítrico en pacientes no diabéticos a los que sí se les curan las heridas y a los que no se les curan las heridas. 5

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Se estima que la diabetes afecta a 15 millones de personas en los Estados Unidos. Dentro de la población diabética hay individuos con ulceración de las extremidades inferiores (LEU) que es crónica y no se cura y va asociada a una importante morbosidad y a importantes costes de tratamiento. La LEU crónica que no se cura precede a aproximadamente el 85% de las amputaciones de las extremidades inferiores (LEA) que 10 más de 50.000 diabéticos padecen anualmente (GE Reiber, EJ Boyko, DG Smith, en Diabetes in America, NIH Publication Nº 95-1468, Bethesda, Md” ed. 2.1995, pp. 409-428). Esto representa más de la mitad de todos los individuos que sufren LEA en este país. Mientras que tan sólo las de un 6% de las hospitalizaciones de diabéticos están asociadas a la LEU, el reembolso gubernamental total para las complicaciones de las extremidades inferiores en los diabéticos en 1992 fue de más de 1.500 millones de $, sin incluir los costes de 15 la amputación de miembros y de la rehabilitación. Los factores de riesgo clínico patofisiológico para la LEA incluyen a la neuropatía diabética, la isquemia de las extremidades inferiores y las úlceras de pie diabético crónicas que no se curan.

El problema subyacente que se da en el caso de los diabéticos con LEU es el de la deteriorada curación de las heridas, que no es bien comprendida. Mientras que en su mayoría los diabéticos presentan 20 una curación “normal” de las heridas, los que presentan LEU crónica a menudo manifiestan una reducida inflamación de las heridas, recurrentes infecciones de las heridas, reducida perfusión vascular cutánea, deficiente deposición de colágeno en las heridas y deficiente maduración de las cicatrices. La deficiencia del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) va asociada a la úlcera diabética crónica y contribuye a la curación deteriorada (HD Beer, MT Longaker, S Werner, J Invest Dermatol 109.132 (1997)). Las pruebas 25 clínicas que se han hecho usando Regranex® han presentado eficacia en el mejoramiento de la curación de las úlceras de pie crónicas en solamente la mitad o menos de los pacientes evaluados (DL Steed, J Vasc Surg, 21, 71 (1995)).

La reciente investigación llevada a cabo sobre el papel del óxido nítrico (NO) en la inflamación de las heridas, la reparación tisular y la homeostasis microvascular nos ha permitido considerar al NO como 30 regulador primario de la curación de las heridas (D Bruch-Gerharz, T Ruzicka, V Kolb-Bachofen. J Invest Dermatol. 110, 1 (1998); MR Schaffer et al., Surgery 121, 413 (1997)). Se ha observado en todos los diabéticos una deficiencia sistémica de NO de origen endotelial (A Veves et al., Diabetes, 47, 457 (1998); M. Huszka et al., Thrombosis Res, 86 (2), 173 (1997); SB Williams, JA Cusco, MA Roddy, MT Hohnston, MA Creager, J. Am. Col. Cardiol., 27 (3), 567 (1996)), sugiriendo que el NO desempeña un papel fundamental en 35 la patogénesis de la LEU crónica que no se cura.

La solicitud de patente internacional WO 00/57190 da a conocer la técnica de determinar si un sujeto diabético es un diabético al que sí se le curan las heridas o un diabético al que no se le curan las heridas mediante la medición del nivel de producto relacionado con el NO.

Abd-El-Aleem et al., (J. Pathol., 191, 434-442. 2000) publican un incremento de la expresión de NO en 40 las úlceras venosas crónicas en comparación con la piel normal.

Stallmeyer et al., (J. Invest. Dermatol., 113, 1090-1098, 1999) publican un incremento de NO en una herida durante la reparación de la herida.

En consecuencia, hay necesidad de correlacionar la producción de NO con la capacidad de curación de las heridas. Tal correlación permitiría el desarrollo de métodos para predecir la capacidad de curación de las 45 heridas sobre la base de la producción de NO, y proporcionaría un útil indicador clínico que podría servir de base para elegir la terapia apropiada.

BREVE EXPOSICIÓN DE LA INVENCIÓN

Es un objeto de la invención el de aportar un método para determinar si un sujeto no diabético con ulceración por estasis venosa o con otra enfermedad o condición caracterizada por una curación de heridas 50 cutáneas crónicamente deteriorada en algunos pacientes, y como tal enfermedad o condición seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de llagas por presión y heridas quirúrgicas cutáneas en las que no se cura la herida, es un sujeto al que sí se le curan las heridas o un sujeto al que no se le curan las heridas. El método comprende los pasos de: (a) tomar una muestra del sujeto; (b) determinar el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en la muestra; y (c) comparar el nivel del producto relacionado con el óxido 55 nítrico en la muestra con un valor umbral que discrimina entre sujetos a los que sí se les curan las heridas y sujetos a los que no se les curan las heridas. Si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico es

superior al valor umbral, entonces el sujeto es un sujeto al que sí se le curan las heridas. Si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico está aproximadamente a la altura del valor umbral o es inferior al mismo, entonces el sujeto es un sujeto al que no se le curan las heridas.

Es también un objeto de la invención el de aportar el uso de una dosis terapéuticamente eficaz de un reactivo que está destinado a incrementar la producción de óxido nítrico en la fabricación de un medicamento 5 para tratar a un sujeto no diabético identificado como un sujeto al que no se le curan las heridas por el método de la presente invención.

Es un objeto adicional de la presente invención el de aportar un método para supervisar la eficacia del tratamiento de las heridas en un paciente no diabético al que no se le curan las heridas y que presenta ulceración por estasis venosa u otra enfermedad o condición caracterizada por una curación de las heridas 10 cutáneas crónicamente deteriorada en algunos pacientes, y como tal enfermedad o condición seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de llagas por presión y heridas quirúrgicas cutáneas que no se curan, en donde se le ha administrado al paciente un agente terapéutico destinado a incrementar el nivel de óxido nítrico en el paciente, comprendiendo dicho método los pasos de:

(a) determinar el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en una muestra del paciente como 15 medida de la eficacia del tratamiento; y

(b) comparar el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico con un umbral que distingue entre sujetos a los que sí se les curan las heridas y sujetos a los que no se les curan las heridas, en donde si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico es superior al valor umbral la eficacia del tratamiento es suficiente para promover la curación de las heridas, y si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico está 20 aproximadamente a la altura del valor umbral o es inferior al mismo la eficacia del tratamiento es insuficiente para promover la curación de las heridas.

Estos y otros objetos de la invención son alcanzados por una o varias de las realizaciones que se describen a continuación.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS 25

La Figura 1 presenta una representación esquemática del papel del óxido nítrico (NO) en la regulación de la reparación de las heridas. La “señalización celular” mediada por el NO en las heridas parece acrecentar la mediación inflamatoria de la reparación, la disponibilidad de oxígeno en la herida y la remodelación y maduración de la matriz de la herida.

La Figura 2 es una representación gráfica de los niveles de nitrato de la orina en ayunas (micromoles 30 por litro) para controles (C), diabéticos curados (HD) y diabéticos no curados (UHD) en los días 1 y 2 del estudio. Los resultados están indicados como la media ± S.E. (S.E. = error característico), con los valores P en comparación con C (Pc) y con HD (PHD) para cada día.

La Figura 3 es una representación gráfica de los niveles de nitrato en plasma en ayunas (micromoles por litro) para controles...

1. Método para determinar si un sujeto no diabético con ulceración por estasis venosa, o con una enfermedad o condición caracterizada por una curación de las heridas cutáneas crónicamente deteriorada en algunos pacientes, y como tal enfermedad o condición seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de llagas por presión y heridas quirúrgicas cutáneas que no se 5 curan, es un sujeto al que sí se le curan las heridas o un sujeto al que no se le curan las heridas, comprendiendo dicho método el paso de:

comparar el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en una muestra del sujeto con un valor umbral que discrimina entre sujetos a los que sí se les curan las heridas y sujetos a los que no se les curan las heridas, en donde si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico es superior 10 al valor umbral el sujeto es un sujeto al que sí se le curan las heridas, y si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico está aproximadamente a la altura del o es inferior al valor umbral, el sujeto es un sujeto al que no se le curan las heridas.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente el paso de:

determinar el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en la muestra. 15

3. El método de la reivindicación 2, en donde la muestra fue obtenida de un sujeto a continuación de un periodo de ayuno de al menos 6 horas.

4. El método de la reivindicación 3, en donde el periodo de ayuno es de 6 a 10 horas.

5. El método de la reivindicación 3, en donde la muestra fue obtenida de un sujeto al que por espacio de al menos 6 horas inmediatamente antes del periodo de ayuno le fue administrada una dieta con 20 una ingesta de nitrato de menos de 900 mg/kg de peso corporal/día y una ingesta de nitrito de menos de 9 mg/kg de peso corporal/día.

6. El método de la reivindicación 5, en donde la dieta fue administrada por espacio de un periodo de tiempo de 6 a 24 horas de duración.

7. El método de la reivindicación 1, en donde la muestra es orina, sangre o tejido. 25

8. El método de la reivindicación 1, en donde el sujeto es un humano.

9. El método de la reivindicación 1, en donde el producto relacionado con el óxido nítrico es nitrato, un derivado de nitrato, nitrito o un derivado de nitrito.

10. El método de la reivindicación 1, en donde la muestra es orina y el producto relacionado con el óxido nítrico es nitrato. 30

11. El método de la reivindicación 1, en donde el producto relacionado con el óxido nítrico es óxido nítrico, L-citrulina, cGMP, peroxinitrito, 3-nitrotirosina o L-dimetilarginina.

12. Uso de una dosis terapéuticamente eficaz de un reactivo que está destinado a incrementar la producción de óxido nítrico para la fabricación de un medicamento para tratar a un sujeto no diabético identificado como un sujeto al que no se le curan las heridas por el método según 35 cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.

13. El uso de la reivindicación 2, en donde el reactivo es L-arginina u oxígeno hiperbárico.

14. Método para supervisar la eficacia del tratamiento de las heridas de un paciente no diabético al que no se le curan las heridas y que presenta ulceración por estasis venosa u otra enfermedad o condición caracterizada por una curación de las heridas cutáneas crónicamente deteriorada en 40 algunos pacientes, y como tal enfermedad o condición seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de llagas por presión y heridas quirúrgicas cutáneas que no se curan, en donde se le ha administrado al paciente un agente terapéutico destinado a incrementar el nivel del óxido nítrico en el paciente, comprendiendo dicho método los pasos de:

(a) determinar el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en una muestra del paciente 45 como medida de la eficacia del tratamiento; y

(b) comparar el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico con un umbral que distingue entre sujetos a los que sí se les curan las heridas y sujetos a los que no se les curan las heridas, en donde si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico es superior al valor umbral la eficacia del tratamiento es suficiente para promover la curación de las heridas, y si el nivel del producto 50 relacionado con el óxido nítrico está aproximadamente a la altura del o es inferior al valor umbral la eficacia del tratamiento es insuficiente para promocionar la curación de las heridas.

15. El método de la reivindicación 14, en donde el producto relacionado con el óxido nítrico es nitrato, un derivado de nitrato, nitrito o un derivado de nitrito.

16. El método de la reivindicación 14, en donde el producto relacionado con el óxido nítrico es óxido nítrico, L-citrulina, cGMP, peroxinitrito, 3-nitrotirosina o L-dimetilarginina.

17. El método de la reivindicación 14, en donde la muestra fue obtenida del sujeto a continuación de un 5 periodo de ayuno de al menos 6 horas.

18. El método de la reivindicación 14, en donde el paciente fue identificado como un paciente al que no se le curan las heridas comparando el nivel de un producto relacionado con el óxido nítrico en una muestra del paciente con un valor umbral que discrimina entre pacientes a los que sí se les curan las heridas y pacientes a los que no se les curan las heridas, en donde si el nivel del producto 10 relacionado con el óxido nítrico es superior al valor umbral el paciente es un paciente al que sí se le curan las heridas, y si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico está aproximadamente a la altura del o es inferior al valor umbral el paciente es un paciente al que no se le curan las heridas.

19. Uso de un agente terapéutico destinado a incrementar el nivel de óxido nítrico en un paciente para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de las heridas de un paciente no diabético al que 15 no se le curan las heridas y que presenta ulceración por estasis venosa u otra enfermedad o condición caracterizada por una curación de las heridas cutáneas crónicamente deteriorada en algunos pacientes, y como tal enfermedad o condición seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de llagas por presión y heridas quirúrgicas cutáneas que no se curan, en donde la eficacia del tratamiento es supervisada por el método según la reivindicación 15 y el tratamiento es 20 ajustado según el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico en la muestra, en donde:

(1) si el nivel está a la altura del o es inferior al valor umbral la cantidad del agente terapéutico administrado es incrementada, y si el nivel es superior al umbral la cantidad del agente terapéutico no es incrementada; o bien

(2) si el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico a continuación de la administración del 25 agente terapéutico está a la altura de o es inferior a un nivel umbral, el paso de administrar un agente terapéutico destinado a incrementar el nivel de óxido nítrico en el paciente y los pasos (a) a (b) de la reivindicación 22 son repetidos hasta que el nivel del producto relacionado con el óxido nítrico en una muestra del paciente es superior al nivel umbral.

20. El método de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18 o el uso de la reivindicación 19, en donde el 30 agente terapéutico es L-arginina u oxígeno hiperbárico.