PIRAZOLO[4,3-D]PIRIMIDINAS, PROCEDIMIENTO PARA SU PREPARACIÓN Y USO.

Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas representadas por la fórmula general I y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas,

en la que R3 es etilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, 3-pentilo, bencilo, ciclopropilo, alquenilo, alquinilo, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxilo, amino, mercapto, carboxilo, ciano, nitro, amido sulfo, sulfamido, carbamino, alquilo, alcoxi y/o un grupo alquilo sustituido con uno de estos sustituyentes R7 es R7'-X- en el que X es un resto -NH- o -N(alquil)-, y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilalquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido

La presente invención se refiere a nuevos derivados de pirazolo[4,3-d]pirimidina y a su uso en utilidades adecuadas, especialmente en terapia de cáncer y práctica agrícola.

El ciclo de división celular es un proceso conservado evolutivamente en todas las células eucariotas para controlar el crecimiento y la división. El ciclo celular consiste en cuatro etapas distintas ilustradas en la Figura 7, las fases G1, S, G2 y M. La proliferación celular normal se inicia y controla estrechamente por una serie de mecanismos reguladores que permiten o evitan la progresión del ciclo celular. En cada fase, existen complejos proteicos, las ciclinas y quinasas dependientes de ciclina que regulan y avanzan el ciclo celular. La Figura 7 muestra el ciclo de división celular (cdc) que consiste en cuatro fases G1, S, G2 y M. La mitosis (la división en sí) se produce en la fase M. En cada fase, hay complejos de quinasa dependiente de ciclina específicos presentes (CDK).

Los trastornos proliferativos tales como cáncer se reconocen como enfermedades del ciclo celular. Se ha descubierto que en células tumorales, los mecanismos que normalmente funcionan para restringir la división celular son defectuosos, mientras que los que promueven la división se vuelven más activos. Los genes responsables de estos cambios en el crecimiento y proliferación generalmente se denominan "supresores de tumores" y "oncogenes". Los compuestos reguladores de ciclo celular son fundamentales en la modulación de la proliferación celular anómala puesto que proporcionan dianas ideales para terapia para una serie de trastornos proliferativos.

Una serie de pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3-,7-disustituidas son útiles para la inhibición de quinasas dependientes de ciclina (preferentemente p34cdc2/ciclina B). Por lo tanto, pueden usarse como fármacos antimitóticos y apoptóticos, particularmente como fármacos antineoplásicos y herbicidas. Análogamente, los compuestos pueden usarse como agentes antifúngicos, que pueden tener un gran valor en el tratamiento de aspergilosis, peniciliosis, actinomicosis y similares. La diferencia en la homología de los genes de CDK de insectos permite una selección de compuestos de la presente invención que diferencia entre enzimas CDK de insecto y mamífero y conduce de este modo a insecticidas. Sumario de la Invención

Es un objetivo de la presente invención proporcionar compuestos antimitóticos, anticancerosos, herbicidas, fungicidas e insecticidas que tengan una selectividad y un índice de eficacia mejorados, es decir, que sean menos tóxicos y aún más eficaces que análogos conocidos hasta ahora.

Es un objetivo de la presente invención proporcionar pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7disustituidas que inhiban las cdk y la proliferación celular o bloqueen los receptores de citoquinina.

Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprenda una pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5 Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar un procedimiento para inhibir la proliferación celular y/o inducir la apoptosis a un mamífero o planta que necesita una cantidad eficaz de pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas.

La presente invención también constituye un procedimiento para inhibir la proliferación celular a una planta que necesita una cantidad eficaz de pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,710 disustituidas. La solución de este objetivo son pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas representadas por la fórmula general I

**(Ver fórmula)**

y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en etilo, iso-propilo, n-butilo, 3-pentilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilalquilo, alquenilo y alquinilo, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido, R7 se selecciona entre el grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, hidroxilamino, amino, carboxilo, ciano, nitro, amido, sulfo, sulfamido, carbamino, sin sustituir o R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilalquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido.

Si los grupos anteriores están sustituidos, preferentemente están sustituidos con un grupo halógeno, hidroxilo, amino, mercapto, carboxilo, ciano, nitro, amido, sulfo, sulfamido, carbamino, alquilo, alcoxi y/o alquilo sustituido, en particular con más de uno de los sustituyentes anteriores, preferentemente con 1 a 3 sustituyentes.

30 En otra realización, la presente invención se refiere al uso de los compuestos como se definen en las reivindicaciones para inhibir las cdk y la proliferación celular y/o para inducir la apoptosis en plantas, que comprende administrar a la planta una cantidad eficaz de una composición que comprende uno o más compuestos de acuerdo con las reivindicaciones. Las moléculas inhibidoras de cdk son útiles para tratar trastornos, algunos de los cuales implican proliferación celular, y por lo tanto son útiles como herbicidas.

En otra realización más, la presente invención es una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de acuerdo con las reivindicaciones en una mezcla con uno

o más excipientes farmacéuticos. Aún en otra realización, la presente invención es una composición que comprende uno

o más compuestos de acuerdo con las reivindicaciones útiles para tratar infecciones fúngicas (hongos) en plantas.

En otra realización, la presente invención es una composición que comprende uno o más compuestos de acuerdo con las reivindicaciones útiles para tratar insectos y levaduras en plantas.

Las pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas dan como resultado la adquisición de una potencia extremadamente alta frente a virus de plantas por parte de los compuestos definidos. Como se usa en el presente documento, y a menos que se modifique por el contexto inmediato:

"Halógeno" preferentemente se refiere a átomos de flúor, bromo, cloro y yodo. "Hidroxi" se refiere al grupo -OH. "Mercapto" se refiere un grupo -SH. "Alquilo" preferentemente se refiere a una cadena alquilo C1-C8 sin ramificar o ramificada que está saturada o insaturada. Por lo tanto, el término "alquilo", cuando se usa en el presente documento, incluye grupos alquilo, alquenilo y alquinilo. Los grupos alquenilo tienen preferentemente de 2 a 8 átomos de carbono y los grupos alquinilo tienen preferentemente de 3 a 8 átomos de carbono. Los grupos tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, alilo, etinilo, propargilo y similares pueden ejemplificar este término. "Alquilo sustituido" preferentemente se refiere a alquilo como se ha descrito anteriormente incluyendo de uno a seis, en particular de 1 a 3, sustituyentes, tales como hidroxilo, mercapto, alquiltio, halógeno, alcoxi, aciloxi, amino, acilamino, hidrazino, carbamoílo, amido, carboxilo, sulfo, acilo, guanidino y similares. Estos grupos pueden unirse a cualquier átomo de carbono del resto alquilo. "Alcoxi" denota el grupo -OR, en el que R es preferentemente alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido,

cicloheteroalquilo o cicloheteroalquilo sustituido como se ha definido en el presente documento. "Alquiltio" denota el grupo -SR, en el que R es preferentemente como se ha definido para el grupo "alcoxi". "Sulfo" denota el grupo -SO3R, en el que R es preferentemente H, alquilo o alquilo sustituido como se ha definido anteriormente. "Sulfamido" denota el grupo SO2NRR" en el que R y R" son preferentemente H, alquilo

o alquilo sustituido como se ha definido anteriormente. "Acilo" denota grupos -C(O)R, en los que R es preferentemente alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo o cicloalquilo sustituido como se ha definido en el presente documento. "Ariloxi" denota grupos -OAr, en los que Ar es preferentemente un grupo arilo, arilo sustituido, heteroarilo...

1. Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas representadas por la fórmula general I

**(Ver fórmula)**

5 y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, en la que R3 es etilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, 3-pentilo, bencilo, ciclopropilo, alquenilo, alquinilo, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido con halógeno, hidroxilo, amino, mercapto, carboxilo, ciano, nitro, amido sulfo, sulfamido, carbamino, alquilo, alcoxi y/o un grupo alquilo sustituido con uno de estos sustituyentes R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil)-, y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilalquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido.

2. Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas de acuerdo con la reivindicación 1, en las

que los grupos están sustituidos con más de un grupo halógeno, hidroxilo, amino, mercapto, 20 carboxilo, ciano, nitro, amido, sulfo, sulfamido, carbamino, alquilo, alcoxi y/o alquilo sustituido.

3. Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en las que R3 es etilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, 3-pentilo, bencilo, ciclopropilo, alquenilo C28 o alquinilo C3-8, que puede estar sustituido con 1-3 halógenos tales como flúor y cloro; R7 es R7'-X, en el que X es -NH-o -N(alquil)-y R7'-X, en el que X es preferentemente -N(alquil)-seleccionado, cada vez que está presente, entre el grupo metilo, etilo, propilo, isopropilo, etinilo, alilo, propargilo e isopent-2-en-1-ilo.

4. Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que tienen independientemente, cada vez que están presentes, la configuración (R) o (S) en R3 o R7 según su quiralidad.

5. Un procedimiento para preparar la pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida de fórmula

**(Ver fórmula)**

y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido, R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil C1-8)-, y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido, en la que las 7-hidroxipirazolo[4,3-d]pirimidinas 3-sustituidas se cloran, preferentemente con SOCl2 o POCl3 o PCl5, o el grupo 7-hidroxi se desplaza por un grupo mercapto, preferentemente por la acción de P2S5, y después las pirazolo[4,3-d]pirimidinas 7cloro-3-sustituidas obtenidas de esta manera se hacen reaccionar con un nucleófilo reactivo apropiado, o las pirazolo[4,3-d]pirimidinas 7-mercapto-3-sustituidas se hacen reaccionar con un agente de alquilación, y la pirozolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida resultante opcionalmente se aísla.

6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el nucleófilo apropiado R7'-X-Y se

selecciona entre el grupo que consiste en 1) amina, hidróxido de amonio, hidrazina, hidroxilamina, bencilamina; 2-, 3-, 4hidroxibencilamina; dihidroxibencilamina; y 3-cloranilina, o 2) sal de litio, natrio y calio del alcohol o mercaptano.

7. El procedimiento de la reivindicación 5 ó 6, en el que el agente de alquilación se selecciona entre el grupo que consiste en halogenuro de alquilo, toluenosulfonato de alquilo y mesilato de alquilo.

8. El procedimiento de las reivindicaciones 5 a 7, en el que la pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7disustituida resultante se aísla por cromatografía sobre gel de sílice seguido de cristalización o sólo por cristalización.

9. Uso de una pirazolo[4,3-d]pirimidina de 3,7-disustituida de fórmula I

**(Ver fórmula)**

y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido, R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil C1-8)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido; heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido para la preparación de una composición para inhibir la proliferación celular en mamíferos.

10. Uso de una pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida de fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar

**(Ver fórmula)**

5 opcionalmente sustituido, R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil C1-8)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido para la preparación de una composición para tratar el cáncer, o psoriasis, artritis reumatoide, lupus, diabetes de tipo I, esclerosis múltiple, reestenosis, enfermedad renal poliquística, rechazo a injertos, enfermedad de injerto contra huésped y gota, parasitosis tales como las provocadas por hongos o protistas, o enfermedad de Alzheimer, o como fármacos antineurogenerativos, o para suprimir la inmunoestimulación.

11. Uso de una pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida de fórmula I

**(Ver fórmula)**

20 y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido. R7 es R7-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil C1-8)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido para la preparación de una composición para tratar el cáncer que comprende administrar una cantidad eficaz de pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas junto con citostáticos usados habitualmente, tales como mitoxantrona, cis-platino, metotrexato, taxol o doxorrubicina.

12. Uso de una pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida de fórmula I

**(Ver fórmula)**

y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido. R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil C1-8)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido para la preparación de una composición para tratar una enfermedad hiperproliferativa de la piel en un ser humano que está aquejado de queratosis actínica, enfermedad de Bowen, papiloma, queratosis seborreica, eccema tóxico, dermatitis atópica e ictiosis.

13. Uso de una pirazolo[4,3-d]pirimidina 3,7-disustituida de fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar

**(Ver fórmula)**

5 opcionalmente sustituido, R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido para la preparación de una composición para tratar infecciones virales.

14. Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas

**(Ver fórmula)**

y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, en las que R3 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo C1-8, alquenilo C2-8 y alquinilo C3-8, en el que cada uno de los grupos puede estar opcionalmente sustituido, R7 es R7'-X-en el que X es un resto -NH-o -N(alquil)-y R7' se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, cicloalquilo, arilo, alquilcicloalquilo, arilo alquilo, heterociclo, heterocicloalquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido, arilalquilo sustituido, heterociclo sustituido, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilalquilo sustituido y cicloheteroalquilalquilo sustituido para la preparación de una composición como agente terapéutico.

15. Uso de pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 en la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, o psoriasis, artritis reumatoide, lupus, diabetes de tipo I, esclerosis múltiple, reestenosis, enfermedad renal poliquística, rechazo de injertos, enfermedad de injerto contra huésped y gota, parasitosis tales como las provocadas por hongos o protistas, o enfermedad de Alzheimer, asma, queratosis actínica, enfermedad de Bowen, papiloma, queratosis seborreica, eccema tóxico, dermatitis

10 atópica e ictiosis, enfermedades cardiovasculares, neurodegenerativas, virales e inflamatorias.

16. Pirazolo[4,3-d]pirimidinas 3,7-disustituidas de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso como un agente terapéutico.