NUEVO PROCEDIMIENTO Y COMPOSICIÓN PARA PRODUCIR UNA VACUNA ALOGÉNICA CELULAR.

Nuevo procedimiento y composición para producir una vacuna alogénica celular [0001] Esta invención se refiere al campo técnico de la inmunología molecular y la medicina, en particular, a un nuevo procedimiento para la obtención de una vacuna alogénica celular basada en células presentadoras de antígeno alogénicas (APCs), preferentemente monocitos, composiciones que comprenden dichos APCs y al uso de dichos APCs. La vacuna se utiliza preferentemente para el tratamiento del cáncer. Antecedentes [0002] Durante la primera mitad de los años 1990, muchos grupos de investigación de 1990 trabajaron partiendo de la hipótesis de que las células tumorales autólogas (tomadas del mismo ser humano) podrían ser reformadas para ser potentes células presentadoras de antígeno (APCs) a través de modificación genética. En los estudios in vivo en ratones se informó en qué células tumorales, transfectadas ex vivo con genes que codifican para la molécula B7 co-estimuladora, utilizadas como vacuna contra el cáncer mediante la inyección de estas células en el receptor tuvieron un cierto éxito. La hipótesis era que la célula tumoral no sólo expresaría la señal 1 (MHC de clase I + péptido del tumor) para las células T específicas tumor CD8 +, sino también la señal 2, B7, lo cual teóricamente podría conducir a una activación eficiente de estos tumores reactivos CD 8 + CTL (linfocitos T citotóxicos). [0003] Durante una revisión crítica de los mecanismos subyacentes inmunológicos responsables de los efectos a menudo muy positivos de este protocolo de vacunación, se demostró claramente que las APCs profesionales del receptor, más que las propias células del tumor de vacunación, fueron las responsables de cebado de CTL. Lo más probable es que las células tumorales que expresan B7 fueran asesinados de manera eficiente por células asesinas naturales (NK). Esta respuesta inmune mediada con células NK también se ha demostrado que induce un reclutamiento local células presentadoras de antígeno (APC) del receptor, incluyendo células dendríticas (DC), por lo que estas células toman todas las proteínas celulares liberadas al microambiente del tumor y las presentan indirectamente a los CTL, llamado cebado transversal. Esta vía indirecta de presentación de antígenos también explica por qué la vacunación con células tumorales transfectadas con el gen que codifica para el factor estimulante de la colonia de granulocitos macrófagos (GM-CSF) induce una respuesta antitumoral razonablemente buena en modelos de roedores ya la producción de GM-CSF local se ha demostrado que induce una producción local de la proteína inflamatoria de macrófagos (MIP)-1 alfa, que es una fuerte quimioatrayente para precursores DG tales como monocitos y DCs inmaduros. Además, se ha mostrado que una inyección local de una vacuna de plásmido que expresa GM-CSF induce una acumulación local de DCs inmaduros en el sitio de la vacunación, que es seguida por la aparición de DCs maduros en los ganglios linfáticos regionales, en consonancia con la egresión de DC de maduración desde el lugar de la inyección y la migración a los ganglios linfáticos de drenaje. La vía indirecta de la presentación de antígenos tumorales también resuelve el problema con la demanda de una ayuda CD4 + T de células tipo 1 (Th1) para lograr una respuesta inmune CTL específica para el tumor eficiente y de larga duración, ya que también las células CD4 +restringidas MHC de clase II se pueden activar a través de la vía indirecta. [0004] Con este conocimiento en la mano estaba abierto a la refinación de este principio, ex vivo e in vivo, que se basa en una presentación eficiente indirecta de antígeno tumoral por el receptor (autólogo) de APC. Un enfoque obvio ha sido el de propagar potentes APCs ex vivo, en particular, células dendríticas (DCs), y luego cargar estas células con proteínas derivadas de tumores, ya sea por pulsación o transfección. También se han desarrollado las llamadas vacunas dendritoma, donde las células tumorales autólogas se han fusionado con DCs autólogas derivadas de los monocitos. Un problema con la propagación ex vivo de DCs autólogas es sin embargo la migración menor de estas células para el drenaje de ganglios linfáticos (un prerequisito para las DCs inyectadas para encontrar células T ingenuas). Los estudios en humanos han demostrado que un 1% máximo de las DCs inyectadas de manera subcutánea migra a los ganglios linfáticos regionales. [0005] Por lo tanto, se ha desarrollado un enfoque alternativo, sobre todo a partir de las observaciones durante la vacunación con células tumorales que producen GM-CSF en modelos de roedores, con el objetivo de inducir una contratación eficiente in vivo de DCs del receptor en el sitio de la vacunación. Los ensayos de fase I en humanos con cáncer de próstata y carcinoma renal y melanoma usando vacunas de células tumorales transfectadas GM-CSF autólogas han sido evaluados y considerados seguros, pero sin ningún efecto clínico evidente. Además, una vacuna basada en células tumorales autólogas se ha demostrado que crea varios problemas técnicos. En primer lugar, la vacuna depende de la disponibilidad de un número adecuado de células tumorales, que rara vez están disponibles debido al proceso reactivo que se encuentra con la infiltración de células tumorales de muchos tipos comunes de cáncer. En segundo lugar, la vacuna requiere la transferencia de genes novo para el tratamiento de cada paciente, que es una labor intensiva y puede causar niveles variables de expresión de citoquinas entre las diferentes vacunas en pacientes. En tercer lugar, hay gastos importantes y tiempo necesario para certificar la cantidad de vacuna para cada paciente para que cumpla con las directrices aceptadas para la administración. Una forma de soslayar estos obstáculos técnicos es utilizar una estrategia de vacuna que se basa en un panel de líneas de células tumorales alogénicas que expresan citoquinas que se pueden formular y almacenar antes de la iniciación de los estudios clínicos. Este es un enfoque particularmente atractivo para la mayoría de los cánceres comunes para que los que los antígenos específicos del tumor aún no han sido identificados. Dos hallazgos proporcionan la justificación inmunológica para un enfoque de vacuna de células tumorales alogénicas. En primer lugar, que las DCs del receptor, más que el propio tumor de la 2   vacuna, son responsables del cebado de las células CD4 + y CD8 + CTL, las cuales son necesarias para generar la inmunidad antitumoral sistémica (ver arriba). En segundo lugar, muchos antígenos tumores normalmente se expresan entre tumores de pacientes diferentes. Una vacuna GM-CSF sobre la base de este concepto ha sido desarrollada en modelos de roedores (Chang E. Y. et al, (International Journal of Cancer, 2000, Vol. 86. Nº 5, páginas 725-730) y se estudió recientemente en un ensayo de Fase I y que se consideró seguro, pero sin ningún efecto clínico evidente. Lo más probable, esta insuficiencia clínica se debió a la producción de una sola citocina (GM-CSF), ya que teóricamente varios factores deben ser producidos localmente con el fin de inducir no sólo un reclutamiento eficiente de DCs inmaduras, sino también una maduración eficiente de estas células. Los factores necesarios probablemente incluyen citoquinas quimiotácticas tales como MIP-1 alfa y/o RANTES, factores de maduración tal como interleucina beta (IL)-1, IL-6 y/o factor de necrosis tumoral (TNF) alfa y, finalmente, factores de polarización Th1 tales como el interferón (IFN) gamma. [0006] Dentro de las áreas de los trasplantes y las transfusiones se lucha a diario con el problema de la aloinmunización, que es una inmunización mediada con células T contra antígenos HLA específicos de donantes presentados indirectamente. Esta inmunización se desarrolla frecuentemente con una fuerte potencia después de transfusiones con productos sanguíneos alogénicos y después del trasplante de órganos sólidos. Ni siquiera un potente tratamiento continuo inmunosupresor después de un trasplante con éxito primario de un órgano incompatible HLA parece evitar un proceso que progresa lentamente referido como rechazo crónico. Este proceso está mediado por células CD4+ de tipo Th1, que son activadas por péptidos HLA alogénicos indirectamente presentados por APCs autólogos. Estas células T CD4+ a su vez activan las células B que producen anticuerpos (IgG) específicos para los donantes y células T citotóxicas y los macrófagos tisulares, que constituyen los diferentes mecanismos efectores en el rechazo crónico. Un actor muy central para la puesta en marcha de un alo-inmunización parece ser APCs (alogénicas) derivadas del donante, viables y metabólicamente intactas. Si éstas se agotan o se inactivan por radiación UVB antes... [Seguir leyendo]

1. Composición que comprende una célula presentadora de antígeno (APC), aislada de un sujeto, o establecida y/o aislada de una línea celular de leucemia mieloide, y modificada con un antígeno utilizando pulsos, transfección, infección o fusión y se trata con un agente capaz de eliminar ácido siálico en la superficie de dicha APC, para su uso como una vacuna alogénica celular en un sujeto incompatible al MHC. 2. Composición para su uso como una vacuna celular alogénica en un sujeto incompatible con MHC según la reivindicación 1, que también comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable. 3. Uso de una composición según la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para su uso contra el cáncer en un sujeto incompatible con MHC. 13   14     16   17   18   19     21   22   23   24