Procedimiento de lucha biológica contra la proliferación de Legionella pneumophila,

con la excepción de los procedimientos de tratamiento aplicados al cuerpo humano o animal, caracterizado porque usa protozoos amebianos de la especie Willaertia magna, que corresponde a la cepa depositada con el número PTA-7824 en la ATCC o a la cepa depositada con el número PTA-7825 en la ATCC

Nuevo procedimiento de lucha biológica contra la proliferación de Legionella pneumophila, y nuevo agente desinfectante que contiene protozoos amebianos del género Willaertia.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un procedimiento de lucha biológica contra la proliferación de Legionella pneumophila, y constituye así un procedimiento original para luchar contra la proliferación de la bacteria patógena.

Legionella pneumophila, responsable en el hombre de la legionelosis, es una bacteria gram-negativa, que se caracteriza por una replicación intracelular facultativa en el interior de los macrófagos pulmonares. La legionelosis es una enfermedad que ha afectado a 1.200 personas en Francia en 2004, causando la muerte de 130 enfermos. Además, la vigilancia y la prevención de la legionelosis constituyen una preocupación cada vez más importante. Más allá del problema de salud pública, la presencia de la bacteria en las aguas de instalaciones industriales impone una vigilancia restrictiva e importantes pérdidas de explotaciones en caso de parada de estas instalaciones impuesta en el marco reglamentario.

En el medio ambiente, L. pneumophila presenta una distribución hídrica ubicua asociada a una relativa termofilia, características que comparte con las amebas libres. ROWBOTHAM en 1980 (ROWBOTHAM, T.J. J. Clin. Pathol. (1980) 33: 1179-1183), por analogía con lo que se observa en el hombre, ha sido el primero en suponer y demostrar la existencia de una multiplicación intracelular de Legionella pneumophila en el interior de células de protozoos como las amebas libres. Posteriormente, numerosos ensayos de cocultivos realizados en medio líquido han demostrado una proliferación muy importante de legionelas en presencia de amebas. Otros argumentos de tipo indirecto acuden asimismo a reforzar la existencia de interacciones entre amebas libres y legionelas. Así, durante las epidemias de legionelosis, han podido aislarse legionelas y amebas libres simultáneamente a partir de las aguas implicadas (BARBAREE y col. Appl. Environ. Microbiol. (1986) 51: 422-424; BREIMAN y col. JAMA (1990) 263: 2924-2926). SANDEN y col. en Environ. Microbiol. (1992) 58: 2001-2004 indican que el aislamiento de las legionelas a partir del agua se mejora acusadamente mediante una simple incubación de las muestras de agua en presencia de amebas. Finalmente, STEINERT y col. (STEINERT y col. Appl. Environ. Microbiol. (1997) 63: 2047-2053) muestran que la adición de amebas es capaz incluso de provocar la reviviscencia de cepas de legionelas no detectables en las condiciones habituales ya que se vuelven no cultivables, aunque siempre viables (VBNC), debido a una estancia demasiado prolongada en un medio empobrecido como agua destilada.

FIELDS (Trends Microbiol. (1996) 4: 286-290) ha enumerado 13 especies de amebas libres y 2 especies de ciliados susceptibles de asegurar la multiplicación de L. pneumophila. Pero en la práctica, los estudios realizados in vitro han llevado, en la inmensa mayoría de los casos, a sólo tres géneros amebianos: Acanthamoeba (ANAND y col. J. Hyg. Camb. (1983) 91: 167-178; HOLDEN y col. Neff. Infect. Immun. (1984) 45: 18-24; VANDENESCH y col. Zbl. Bakt. (1990) 272: 265-275; MOFFAT y TOMPKINS Infect. Immun. (1992) 60: 296-301; BOZUE y JOHNSON, Infect. Immun. (1996) 64: 668-673; GAO y col. Infect. Immun. (1997) 65: 4738-4746; NEUMEISTER y col. Appl. Environ. Microbiol. (1997) 63: 1219-1224), Hartmannella (KING y col. Infect. Immun. (1991) 59: 758-763; ABU KWAIK, Appl. Environ. Microbiol. (1996) 62: 2022-2028; ABU KWAIK y col. Infect. Immun. (1994) 62: 1860-1866 y Appl. Environ. Microbiol. (1998) 64: 3134-3139) y Naegleria (NEWSOME, Infect. Immun. (1985) 50: 449-452). Con estos géneros, las legionelas se multiplican en gran número en el interior de las amebas en el que se observan en el interior de vacuolas fagocitarias.

Además, mientras se sospecha que las amebas libres favorecen el mantenimiento y la multiplicación de legionelas en medio hídrico, sobre todo en las biopelículas, ningún estudio ha abordado hasta la actualidad las repercusiones en la multiplicación de las legionelas, de las interrelaciones complejas que pueden existir (fenómenos de competencia, de fagocitosis inter-amebiana) entre los diferentes géneros amebianos que cohabitan en el seno de la microfauna amebiana.

Hoy se reconoce que las amebas libres desempeñan el papel de vectores gracias a los cuales las legionelas se desarrollan y se propagan en el medio ambiente. Actualmente, las técnicas usadas para luchar contra las legionelas hacen uso de tratamientos térmicos, de tratamientos físicos (rayos UV) o incluso de tratamientos químicos. No obstante, estos tratamientos no dan entera satisfacción ya que permiten sólo eliminar provisionalmente las bacterias planctónicas de L. pneumophila presentes en estado libre en el medio tratado, pero se revelan ineficaces frente a las bacterias presentes y protegidas en el interior de los protozoos.

En este contexto, los autores de la invención han puesto de relieve, de forma totalmente original, que ciertas cepas del género amebiano Willaertia detienen la proliferación de las bacterias L. pneumophila y que estas cepas presentan igualmente un poder fagocitario frente a otras especies amebianas susceptibles de estar, ellas mismas, infestadas por la bacteria.

La presente invención tiene así por objeto cualquier procedimiento de lucha biológica que usa amebas del género Willaertia contra la proliferación de Legionella pneumophila. Los procedimientos según la invención no incluyen los procedimientos de tratamiento aplicados al cuerpo humano o al animal. En el procedimiento según la invención, lo más frecuente es un flujo gaseoso o líquido que se trata con protozoos del género Willaertia, y en particular con la especie Willaertia magna.

El procedimiento según la invención encuentra, en particular, aplicaciones, en la desinfección de las redes de distribución de agua potable o de aguas industriales, de circuitos de refrigeración de instalaciones industriales, o de redes de climatización. En particular, el procedimiento según la invención podrá implementarse, mediante el añadido de amebas Willaertia, para luchar en el seno de biopelículas contra la proliferación de L. pneumophila en las canalizaciones de aguas, siendo estas biopelículas un lugar de desarrollo de diferentes especies de amebas. Las amebas Willaertia podrán añadirse directamente, en forma de una suspensión de formas vegetativas o de quistes, a las aguas o líquidos que circulan en las canalizaciones o redes para tratar. Igualmente es posible plantear pulverizarlas en aerosol, por ejemplo en forma de una suspensión de quistes, en las torres aerorrefrigerantes y en las instalaciones industriales para desinfectar.

En particular, el agente biológico usado corresponde a una de las dos cepas amebianas que pertenecen a la especie Willaertia magna depositadas en la ATCC (American Type Cultive Collection - Depositario de Patente - 10801 University Boulevard - Manassas, VA 20110 - Estados Unidos) y registradas con los números nº PTA-7824 y nº PTA-7825, el 21 de agosto de 2006. Estas cepas nº PTA-7824 y nº PTA-7825 forman parte integrante de la invención. Estas cepas son de la familia de las Vahlkampfiidae. Se caracterizan por la expresión de seudópodos lobulados, redondeados y emitidos de forma brusca durante el desplazamiento de los individuos. Los individuos en forma vegetativa tienen un tamaño comprendido entre 45 y 100 μm y entre 18 y 25 μm para la forma de quiste. Estos quistes son redondeados, de forma ovoide o a veces muy deformados y poseen de 7 a una decena de poros en su pared. El modo de división es la promitosis.

Dichas amebas, que presentan una actividad especialmente interesante, podrán ser así usadas en agentes desinfectantes, en particular destinados a la eliminación de las bacterias Legionella pneumophila y a luchar contra la proliferación y la contaminación por legionelosis.

Según otro de sus aspectos, la invención tiene por objeto un agente desinfectante que contiene amebas que corresponden como preferidas a la cepa depositada con el número PTA-7824 en la ATCC o a la cepa depositada con el número PTA-7825 en la ATCC. De forma ventajosa, el agente desinfectante según la invención se presenta en la forma de una solución o de una suspensión acuosa, por ejemplo en agua destilada. El agente...

1. Procedimiento de lucha biológica contra la proliferación de Legionella pneumophila, con la excepción de los procedimientos de tratamiento aplicados al cuerpo humano o animal, caracterizado porque usa protozoos amebianos de la especie Willaertia magna, que corresponde a la cepa depositada con el número PTA-7824 en la ATCC o a la cepa depositada con el número PTA-7825 en la ATCC.

2. Procedimiento según la reivindicación 1 caracterizado por que implementa el tratamiento de un flujo líquido o gaseoso con los protozoos amebianos.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2 caracterizado por que se implementa para la desinfección de redes de distribución de agua potable o de aguas industriales, circuitos de refrigeración y torres aerorrefrigerantes de las instalaciones industriales, o redes de climatización.

4. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2 caracterizado por que se implementa para luchar contra la proliferación de Legionella pneumophila en el seno de biopelículas en las canalizaciones de aguas.

5. Agente desinfectante que contiene protozoos amebianos de la especie Willaertia magna, que corresponde a la cepa depositada con el número PTA-7824 en la ATCC o a la cepa depositada con el número PTA-7825 en la ATCC.

6. Agente desinfectante según la reivindicación 5 caracterizado por que se presenta en la forma de una solución o de una suspensión acuosa.

7. Protozoos amebianos que pertenecen a la especie Willaertia magna que corresponde a la cepa depositada con el número PTA-7824 en la ATCC o a la cepa depositada con el número PTA-7825 en la ATCC.