Un método para predecir el riesgo de que una sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis,

el método comprende agregar dicha sustancia a un tensioactivo aniónico para proporcionar una mezcla de sustancia y tensioactivo, y determinar el efecto de dicha sustancia en la concentración crítica micelar (CMC) del tensioactivo aniónico determinando la CMC de la mezcla, mediante lo cual una disminución en la CMC de la mezcla en comparación con la CMC del tensioactivo antes de la adición de la sustancia es indicativa de riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis

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Campo de la invención

La invención presente se refiere a la determinación de las propiedades ADME-tox de sustancias, tales como los compuestos farmacéuticos, o fármacos o aditivos farmacéuticos o alimentos, en lo sucesivo en la solicitud referidos a veces colectivamente como los fármacos, pero sin limitarse a ellos. Específicamente, el objeto de la invención es un método para la predicción de las propiedades de inducción de fosfolipidosis de los fármacos, esto es, fosfolipidosis inducida por fármacos.

Los compuestos que son más susceptibles de causar fosfolipidosis son los catiónicos y anfifílicos, a menudo denominados CADs (fármacos anfifílicos catiónicos). La opinión actual de la base mecanicista de la fosfolipidosis es que estos fármacos forman complejos con los fosfolípidos, inhibiendo así el funcionamiento de las enzimas degradantes de fosfolípidos, y llevando a la acumulación de fosfolípidos en los Iisosomas debido tanto a su menor degradación como al aumento de la síntesis. Por esta razón, hay una necesidad de un método para evaluar el enlace con lípidos de compuestos potencialmente útiles. La invención presente está encaminada a evaluar las interacciones de sustancias, normalmente fármacos, con los tensioactivos aniónicos, preferentemente fosfolípidos, al evaluar el efecto de una sustancia añadida a la concentración micelar crítica (CMC).

Antecedentes de la invención

Hay varias técnicas para determinar la CMC, por ejemplo, ensayos de fluorescencia, dispersión de luz, absorción de ultrasonido, conductividad, y medidas del ángulo de contacto y de tensión superficial o presión de superficie. La hidrofobicidad de los compuestos es comúnmente determinada midiendo su coeficiente de partición (log P) en un sistema de dos fases de octanol/agua. Las propiedades tensioactivas y de anfifilicidad han sido determinadas convencionalmente midiendo el efecto de la sustancia en la tensión superficial del agua.

La fosfolipidosis (PLD) es un conocido efecto secundario causado por algunos componentes farmacéuticos y fármacos. Los fosfolípidos se acumulan en las células, por ejemplo, en los pulmones, riñones e hígado. Las grandes cantidades acumuladas en el tejido comprometen el funcionamiento de su función fisiológica normal. Especialmente cuando se toma un fármaco durante un largo periodo de tiempo el problema es mayor, ya que una mayor cantidad de fosfolípidos puede acumularse en las células. A su vez, esto puede llevar a una fosfolipidosis crónica, irreversible y fracaso del órgano. Esto es un problema grave y caro para la industria farmacéutica, en particular si resulta evidente después del lanzamiento del fármaco por lo que debe retirarse del mercado.

Hoy día hay dos formas comunes de probar si un medicamento está causando PLD. Una es utilizar cultivos celulares y un método para detectar cambios inducidos por el fármaco en las células. Un inconveniente de este método, además de que requiere mucho trabajo, es que la reproducibilidad, particularmente la reproducibilidad entre laboratorios, de estos ensayos tiende a ser mala. Asimismo, los cultivos celulares necesitan cuidado constante y son susceptibles a las infecciones, variaciones en las condiciones de crecimiento, y falta de estabilidad de las líneas celulares debido a selección genética en los cultivos duraderos.

La otra opción es utilizar los ensayos con animales. Ambos métodos anteriores son caros y, por tanto, sólo pueden utilizarse en fases tardías del proceso de desarrollo del fármaco y ninguno es adecuado para la criba a gran escala de nuevos compuestos de fármacos tales como los que se realizan para la optimización del compuesto principal, por ejemplo. Por lo tanto hay necesidad de una prueba que revele posibles propiedades de inducción de PLD temprano en el proceso de desarrollo, ya que los costos de desarrollo de un nuevo fármaco aumentan exponencialmente hacia el final de la fase de desarrollo del producto. Tal prueba ahorraría tanto dinero como tiempo en el desarrollo de fármacos ya que permitiría el reconocimiento y la posible exclusión de compuestos que potencialmente podrían causar PLD. Además, esta información también puede utilizarse para la mejora de la química del compuesto a fin de reducir su potencial de inducción de PLD mediante el ajuste adecuado de la fisicoquímica del compuesto.

Resumen de la divulgación

La invención presente está dirigida a un método para predecir el riesgo de que una sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis, el método comprende agregar dicha sustancia a un tensioactivo aniónico para proporcionar una mezcla de sustancia y tensioactivo, y determinar el efecto de dicha sustancia en la concentración crítica micelar (CMC) del tensioactivo aniónico determinando la CMC de la mezcla, mediante lo cual una disminución en la CMC de la mezcla en comparación con la CMC del tensioactivo antes de la adición de la sustancia es indicativa de riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis.

Según la invención el método incluye por un lado la posibilidad de comparar la CMC de la mezcla de sustancia y tensioactivo a la CMC de tensioactivo puro, mediante lo cual una disminución en la CMC en comparación con el tensioactivo puro es indicativa de un riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis. De acuerdo con una realización, la invención incluye también la posibilidad de comparar la CMC de dicha mezcla de sustancia y tensioactivo a la CMC de una segunda mezcla de sustancia y tensioactivo que tiene una concentración diferente de la sustancia en el tensioactivo, por medio de lo cual una disminución en la CMC de la mezcla de sustancia y tensioactivo debido a un aumento de la concentración de la sustancia en la mezcla, es indicativa de un riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis.

Esta última posibilidad, naturalmente, también significa que un aumento en la CMC de una mezcla de sustancia y tensioactivo como resultado de una disminución de la concentración de la sustancia en la mezcla, es indicativa de 5 riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis.

El método de acuerdo con la invención así generalmente comprende una etapa de aumentar la concentración de la sustancia en un tensioactivo aniónico, y determinar el efecto de dicha sustancia en la concentración crítica micelar (CMC) del tensioactivo aniónico determinando la CMC de la mezcla de sustancia y tensioactivo, por medio de lo cual una disminución en la CMC de la mezcla en comparación con la CMC del tensioactivo antes del aumento de la concentración de dicha sustancia en dicho tensioactivo, es indicativa de un riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis.

El aumento de la concentración de la sustancia incluye agregar la sustancia al tensioactivo puro, esto es tensioactivo que no contiene ninguna sustancia, así como la adición de la sustancia a una mezcla de sustancia y tensoactivo, a fin de aumentar la concentración de la sustancia en el tensioactivo.

15 Breve descripción de los dibujos

En la figura I, se muestran dos ejemplos de los gráficos de la medida de la presión superficial º versus el logaritmo neperiano de la concentración ln (c/M) (dividida por moI/l) sin unidades: DC8PS (1,2-dioctanoil-sn-glicero-3-[fosfo-Lserina]) puro (º) y gentamicina:DC8PS = 1:10 (º). Las líneas de guión punto y las flechas muestran esquemáticamente el principio de obtención de la CMC. La figura 2 muestra ejemplos de CMC versus curvas de relación de fármaco:lípido. Las líneas de conexión son sólo para guiar al ojo. Los símbolos son los siguientes: clozapina (º), haloperidol (o), l-fenilpiperazina (

**(Ver fórmula)**

La figura 3 muestra la proporción de fármaco:lípido que da la mitad del efecto máximo de CMC, R1/2, versus el mínimo de CMC obtenido con una proporción de fármaco:lípido de hasta 1:2. Los símbolos indican las clasificaciones a uno de los cuatro grupos: Grupo 1 (º) sin potencial de fosfolipidosis, grupo 2 (º) que causan fosfolipidosis en cultivos celulares, pero que tiene un potencial bajo de causar fosfolipidosis en animales, grupo 3( que se sabe que causan fosfolipidosis en animales y grupo 4 (º), que son las sustancias que han causado fosfolipidosis... [Seguir leyendo]

1. Un método para predecir el riesgo de que una sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis, el método comprende agregar dicha sustancia a un tensioactivo aniónico para proporcionar una mezcla de sustancia y tensioactivo, y determinar el efecto de dicha sustancia en la concentración crítica micelar (CMC) del tensioactivo aniónico determinando la CMC de la mezcla, mediante lo cual una disminución en la CMC de la mezcla en comparación con la CMC del tensioactivo antes de la adición de la sustancia es indicativa de riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis.

2. El método según la reivindicación 1, que comprende comparar la CMC de dicha mezcla de sustancia y tensioactivo a la CMC de tensioactivo puro, mediante lo cual una disminución en la CMC en comparación al tensioactivo puro es indicativa de un riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis, o comparar la CMC de dicha mezcla a la CMC de una segunda mezcla de sustancia y tensioactivo que tiene una concentración diferente de la sustancia, por medio de lo cual una disminución en la CMC debido a un aumento de la concentración de la sustancia en la mezcla, es indicativa de riesgo de que dicha sustancia exhiba propiedades de inducción de fosfolipidosis.

3. El método según la reivindicación 1, que comprende además las etapas de: medir la tensión superficial de una solución de dicha sustancia en un agente tensioactivo en una interfase de aire-agua; determinar la concentración micelar crítica (CMC) a partir de la función de la tensión superficial frente a la concentración de tensioactivo para al menos dos concentraciones diferentes de dicha sustancia en el tensioactivo, o para al menos una concentración de la sustancia en el tensioactivo y el tensioactivo puro.

4. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende determinar la relación de sustancia: tensioactivo R1/2, donde la CMC ha disminuido en un 50% del cambio mayor obtenido con la creciente proporción de sustancia:tensioactivo; comparar la relación R1/2 de sustancia:tensioactivo obtenida para límites de borde para R1/2, predeterminados; y/o determinar la CMC mínima para la sustancia en el tensioactivo y comparar la misma para límites de borde predeterminados para CMC mínima; y, basado en las comparaciones, clasificar el fármaco en uno de al menos dos grupos de riesgo, dichos grupos indican

o clasifican el riesgo de inducir fosfolipidosis de dicha sustancia.

5. El método según la reivindicación 4, donde la R1/2 corresponde a la proporción de fármaco:tensioactivo donde la CMC tiene el valor:

CMC=1/2(p+m),

donde p es la CMC obtenida en lípido puro, y m es la CMC mínima determinada para la sustancia en tensioactivo.

6. El método según la reivindicación 3, en el que la función es una curva trazada.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el tensioactivo es un fosfolípido.

8. El método según la reivindicación 7, en donde el fosfolípido es una fosfatidilserina, fosfatidilglicerol, ácido fosfatídico, fosfatidilinositol o fosfato de fosfatidilinositol, o lisolípido, el oxidado peroxilípido, plasmalógeno o el derivado diéterlipido (dialquillípido) de los anteriores, un análogo de fosfolípido, o tensioactivos aniónicos como el fosfolípido, y en donde el fosfolípido tiene un total de menos de 28 átomos de carbono con todas las cadenas combinadas.

9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la sustancia se disuelve en un disolvente soluble en agua, tal como el DMSO.

10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el compuesto es un compuesto anfifílico o un compuesto catiónico.

11. El método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el compuesto es un compuesto farmacéutico.

12. El método según la reivindicación 4, en el que cuatro grupos de riesgo se utilizan para indicar el riesgo de indución de fosfolipidosis del compuesto.

13. El método según la reivindicación 12, en el que se definen los cuatro grupos como: grupo 1 con ningún potencial de fosfolipidosis, grupo 2 con baja potencia para causar fosfolipidosis, grupo 3, se sabe que causa fosfolipidosis en animales y grupo 4 se sabe que causa fosfolipidosis en seres humanos.

14. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende la determinación de la CMC para una proporción molar de sustancia/tensioactivo en el intervalo de hasta 2,0, preferiblemente hasta 1,0.

15. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el volumen de una muestra utilizada para determinar la CMC es de hasta 50 µl y la concentración de los tensioactivos es de hasta 5 milimolar.

16. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende determinar la CMC para el tensioactivo puro y para dicho tensioactivo que contiene dicha sustancia para al menos un valor de la relación sustancia/tensioactivo.