Un método para evaluar una probabilidad de metástasis, probabilidad de recaída o para estimar el pronóstico de una célula de mamífero que comprende:

evaluar la probabilidad de metástasis, la probabilidad de recaída o estimar el pronóstico de una célula de mamífero basándose en una información que contiene una proporción de A1 frente a A2, en la que A1 es una proporción del valor de actividad frente al nivel de expresión de proteína de quinasa 1 dependiente de ciclina (CDK1) contenido en la célula y A2 es una proporción del valor de actividad frente al nivel de expresión de proteína de quinasa 2 dependiente de ciclina (CDK2) contenido en la célula

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se refiere a un método como se define en las reivindicaciones 1-9.

TÉCNICA ANTERIOR 5

Como ejemplos de diagnósticos para el cáncer, actualmente realizados en entornos clínicos, se conoce un diagnóstico serológico para identificar un marcador tumoral en suero sanguíneo, un diagnóstico tisular por biopsia y una citodiagnosis.

El marcador tumoral es una sustancia tal como una proteína, una glicoproteína o un lípido, que es un producto en una célula tumoral como un resultado de la expresión de un gen que ya no se expresa 10 en un proceso de generación o crecimiento de un organismo individual. El diagnóstico serológico es una evaluación en una fase de la enfermedad, o grado de malignidad de un tumor por detección del marcador tumoral. Sin embargo, la mayoría de los marcadores tumorales actualmente disponibles no tienen elevada especificidad en el cáncer. Además, dado que el nivel de expresión del marcador tumoral es muy bajo en un cáncer de fase temprana, la precisión del diagnóstico es relativamente baja. Debido a las razones 15 anteriores, en los actuales institutos médicos, la fiabilidad en el diagnóstico del cáncer, usando el marcador tumoral, no es muy alta.

El diagnóstico tisular y el citodiagnóstico son métodos de diagnóstico, en los que después de la tinción del tejido o de las muestras celulares obtenidas por biopsia, los patólogos y los citólogos realizan una evaluación sobre las muestras teñidas basándose en los estados o patrones teñidos de las muestras 20 mediante observación microscópica, basándose en sus propios conocimientos médicos o clínicos. Los métodos de tinción son diferentes entre los institutos médicos. Además, la evaluación final depende de los conocimientos médicos o clínicos de los patólogos o citólogos. Por consiguiente, es difícil realizar un diagnóstico definitivo en una fase delicada tal como una fase moderadamente diferenciada o fase 1. En un caso menos favorable, la selección sobre el tratamiento de medicación puede ser errónea, 25 conduciendo por lo tanto a una progresión grave de un cáncer.

Considerando lo anterior, se ha establecido la clasificación TNM, como un criterio para normalizar los métodos de diagnóstico, y se ha difundido globalmente. La clasificación TNM para un cáncer es un criterio adoptado por la Unión Internacional Contra el Cáncer (UICC), y muestra niveles progresivos de tumores malignos. “T” representa el tamaño de un tumor primario, “N” representa el nivel 30 de una metástasis en los nódulos linfáticos y “M” representa una metástasis a distancia. “T” se clasifica desde el nivel “1” que indica que el tumor se localiza dentro del tejido, al nivel “4” que indica que aparece tumorigénesis en un lugar distinto al tejido afectado. “N” se clasifica desde el nivel “0” que indica que no se observa metástasis de los nódulos linfáticos locales, al nivel “3” que indica que histopatológicamente se observa metástasis de los nódulos linfáticos. “M” se clasifica desde el nivel “0” que indica que no se 35 observa metástasis a distancia, al nivel “1” en el que se observa metástasis a distancia. En cualquiera de los parámetros “T”, “N”, y “M”, a mayor valor numérico peor pronóstico, lo que significa que el grado de malignidad del cáncer es elevado.

La clasificación TMN (sic, TNM) se usa generalmente porque es útil para la determinación de un método de tratamiento o evaluación de pronóstico. Sin embargo, incluso si en los pacientes, el 40 diagnóstico se realiza en una fase temprana de un cáncer, de acuerdo con la clasificación TNM, en el caso de un cáncer de mama, la recaída por una metástasis a distancia se observa en aproximadamente del 10 al 20% de los pacientes 5 años después del diagnóstico, conduciendo a la muerte, lo cual es un asunto clínicamente importante. Aunque la evaluación basada en la clasificación TNM es útil para el personal médico, para llegar a comprender las afecciones clínicas de los pacientes en el momento del 45 diagnóstico, la evaluación no conduce exitosamente a una predicción exacta sobre un pronóstico.

Además del método diagnóstico anterior, se propone un método de diagnóstico del grado de malignidad de un cáncer midiendo el contenido de ADN de células cancerosas, usando una separación de células activadas por fluorescencia (FACS) y basándose en el resultado de la medición, debido a que un tejido canceroso contiene una gran cantidad de poliploides tales como triploides y tetraploides. Sin 50 embargo, para medir la muestra de biopsia mediante las FACS es necesario dispersar una muestra obtenida por biopsia, en células individuales. Generalmente no es fácil dispersar una muestra de biopsia en células individuales y para hacer esto se requiere un alto nivel de destreza. Debido a las razones anteriores, se dice que no es fácil aplicar el método de diagnóstico del cáncer usando las FACS, en los

institutos médicos actuales.

En las circunstancias anteriores, existe una necesidad de establecer un método diagnóstico capaz de proporcionar un diagnóstico definitivo sin necesidad de realizar una preparación laboriosa de las muestras, concretamente, la dispersión en células individuales y con menor variación en el diagnóstico, dando como resultado evaluaciones individuales o métodos de evaluación diferentes en los institutos 5 médicos en entornos clínicos.

En los últimos años, se espera un diagnóstico molecular usando un aparato, como un método diagnóstico del cáncer normalizado con menor variación en la diagnosis por los diagnostas.

Uno de los diagnósticos moleculares es un método de evaluación del grado de malignidad del cáncer usando una microplaca de ADN, basándose en un resultado de comparación sobre la expresión 10 de un transcrito génico entre una muestra de biopsia y una muestra convencional. Sin embargo, la expresión del transcrito génico no tiene una elevada correlación con las proteínas producidas en un organismo vivo. Por consiguiente, se cree que la eficacia del método diagnóstico es menos fiable en los entornos clínicos.

El desarrollo y estudio han evolucionado respecto al diagnóstico molecular basado en una 15 proteína que se expresa en un organismo vivo. Por ejemplo, el documento D1 propone un método diagnóstico, en el que, de acuerdo con las necesidades, los niveles de expresión de CDK1 y CDK4 en una muestra y la mutación de p53, se usan como indicadores. El documento D2 propone un método diagnóstico de un cáncer y de estados precancerosos, usando la sobreexpresión de CDK4, CDK6 o del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina (inhibidor CDK). 20

Se sabe que la expresión de la quinasa dependiente de ciclina (CDK) es elevada en una célula en la que la proliferación se induce mediante un factor de crecimiento. Sin embargo, generalmente, en una célula existe una determinada cantidad de CDK, y la CDK muestra su actividad en una fase específica de un ciclo celular, dependiendo del tipo de CDK, por unión a moléculas de ciclina bajo la activación de fosforilación o una acción similar y formando un complejo de CDK y ciclina. Además, se 25 sabe que el inhibidor de CDK se une a CDK y/o a un complejo de ciclina y CDK, inhibiendo por lo tanto la actividad de CDK. Como se ha mencionado anteriormente, dado que el ciclo celular real se controla de manera complicada, la evaluación simplemente basada en el nivel de expresión de CDK, ciclina o inhibidor de CDK no proporciona un indicador suficiente para un estado controlado del ciclo celular.

El documento D3 describe un método de diagnóstico usando actividades de CDK como un 30 indicador para evaluar el grado de malignidad de un cáncer, considerando la unión a ciclina o la influencia de un inhibidor y un método para medir las actividades de CDK sin usar una sustancia radioactiva. Sin embargo, los datos sobre las actividades de CDK a medir por el método descrito no proporcionan suficiente precisión de diagnóstico como un sustituto de la diagnosis del cáncer actualmente realizada en los entornos clínicos. 35

Con frecuencia es necesario conocer la sensibilidad de las células tumorales in vitro frente a un agente anticanceroso, como un indicador sobre la eficacia de una quimioterapia usando el agente anticanceroso. Los ejemplos de los ensayos in vitro conocidos que miden la sensibilidad...

1. Un método para evaluar una probabilidad de metástasis, probabilidad de recaída o para estimar el pronóstico de una célula de mamífero que comprende:

evaluar la probabilidad de metástasis, la probabilidad de recaída o estimar el pronóstico de una célula de mamífero basándose en una información que contiene una proporción de A1 frente a A2, en la que A1 es una proporción del valor de actividad frente al nivel de expresión de proteína 5 de quinasa 1 dependiente de ciclina (CDK1) contenido en la célula y A2 es una proporción del valor de actividad frente al nivel de expresión de proteína de quinasa 2 dependiente de ciclina (CDK2) contenido en la célula.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, que adicionalmente comprende comparar el perfil concerniente a la CDK de la célula con un perfil concerniente a la CDK de una célula convencional de 10 mamífero.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:

evaluar la probabilidad de metástasis, la probabilidad de recaída o estimar el pronóstico de una célula de mamífero basándose en la comparación de la proporción de A1 frente a A2 con un umbral predeterminado. 15

4. El método de evaluación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la metástasis incluye metástasis de nódulo linfático y metástasis a distancia.

5. Un método para diagnosticar el cáncer de una célula obtenida de un organismo vivo que comprende diagnosticar una probabilidad de metástasis, una probabilidad de recaída o estimar el pronóstico con el uso de un método de evaluación de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 20 1 a 4.

6. Un método para evaluar la sensibilidad de una célula de mamífero con respecto a un agente irritante que comprende:

evaluar la sensibilidad de una célula de mamífero basándose en la información que contiene una proporción de A1 frente a A2, en la que A1 es una proporción del valor de actividad frente al nivel 25 de expresión de la proteína de CDK1 contenido en la célula y A2 es una proporción del valor de actividad frente a nivel de expresión de la proteína de CDK2 contenido en la célula.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 6 que comprende:

evaluar una sensibilidad de una célula de mamífero basándose en la comparación de una proporción de A1 frente a A2 con un umbral predeterminado. 30

8. El método de acuerdo con la reivindicación 6 ó 7, que adicionalmente comprende comparar A1 y/o A2 con un umbral que corresponde a A1 y A2, respectivamente.

9. El método de evaluación, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que el agente irritante se selecciona del grupo que consiste en factor de crecimiento, agente anticanceroso y mutágeno. 35