Un método para determinar un proceso de degradación de tejido que comprende detectar en una muestra la presencia de uno o más neoepítopos de COMP de mamífero que aparecen después del corte de COMP entre la posición 625 (N 625 ) y 626 (P 626 ) de la secuencia de aminoácidos de COMP (SEQ ID NO: 1)

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método para determinar un proceso de degradación tisular mediante la detección de neoepítopos de COMP (proteína oligomérica de matriz de cartílago), a anticuerpos contra neoepítopos de COMP y a fragmentos que contienen neoepítopos de COMP para la generación de tales anticuerpos.

Antecedentes

Las afecciones patológicas que producen degradación de tejido tal como la degradación de cartílago constituyen un problema médico, social y económico principal. De las personas mayores de 65 años de edad, alrededor de 500 de 1.000 tienen artritis. Los procesos de degradación tisular se caracterizan por la ruptura de los componentes del tejido. Los componentes del tejido se pueden degradar debido a, por ejemplo, estrés mecánico, compuestos tóxicos o por enzimas. Por esta razón, la determinación de los procesos de degradación de tejido para los fines de diagnóstico, seguimiento de enfermedad, tratamiento, etc., se puede realizar por numerosos métodos. Una manera de determinar procesos de degradación en enfermedades de tejido conjuntivo, tales como afecciones artríticas, arterioesclerosis, afecciones degenerativas de las articulaciones, etc., es la detección de la presencia de productos de degradación de los componentes del tejido conjuntivo. Esto permite la detección directa del proceso de degradación, comparado con métodos indirectos como, por ejemplo, medir cantidades aumentadas de leucocitos, que se han empleado ampliamente en el diagnóstico de procesos inflamatorios tal como afecciones artríticas.

Tradicionalmente, el diagnóstico clínico de la se basa en los antecedentes del paciente, exploración física y radiografías. El pronóstico, tratamiento y desenlace clínico de pacientes con artritis se evalúan por determinaciones en serie. Sin embargo, para minimizar el daño tisular permanente causado por afecciones patológicas que cursan con degeneración de cartílago, es importante ser capaz de diagnosticar tales afecciones en una fase temprana. Según esto, durante la última década se han hecho esfuerzos para encontrar marcadores biológicos adecuados que permitan una detección temprana de degeneración patológica de cartílago.

Uno de tales marcadores biológicos es COMP. Previamente se ha asociado un nivel elevado en suero de COMP con destrucción de articulaciones en artritis reumatoide (Mänsson et al., J. Clin. Invest (1995), vol. 95, pp. 1077-1077; Wolhein et al., British Journal of Rheumatology (1997), vol. 36, pp. 847-849; Petersson et al., British Journal of Rheumatology (1998), vol. 37, pp. 46-50). También se han encontrado cantidades significativas de fragmentos pequeños de COMP en líquido sinovial de pacientes con artritis reumatoide y otras formas de artritis inflamatoria (Neidhardt et al., British Journal of Rheumatology (1997), vol. 36, pp. 1151-1160).

El documento WO980935 divulga un método para la determinación de degradación de tejido cribando para la presencia de uno o más neoepítopos de COMP que aparecen después del corte de COMP.

Compendio de la invención

Los inventores de la presente invención han desarrollado un método para la determinación de procesos de degradación tisular usando fragmentos específicos de COMP como marcador para la degradación de tejido. Al usar fragmentos de COMP como marcador para procesos de degradación de tejido se obtiene un relación señal a ruido mucho mayor y por tanto el problema de tener resultados de la prueba falsos positivos se minimiza o casi evita. La mayor relación señal a ruido del método presente también permite una detección más temprana del proceso de degradación de tejido, que es un factor importante en el diagnóstico de afecciones degenerativas, ya que permite el tratamiento temprano de la enfermedad y por tanto una posibilidad mucho mayor de recuperación.

Basado en la identificación de sitios de corte específicos en COMP, los inventores han desarrollado un método mejorado para la determinación de un proceso de degradación tisular. Según esto, la presente invención se refiere a un método para determinar un proceso de degradación tisular que comprende detectar en una muestra la presencia de uno o más neoepítopos de COMP de mamífero que aparece después de cortar COMP entre la posición 625 (N625) y 626 (P626) de la secuencia de aminoácidos de COMP (SEQ ID No: 1). El método se puede usar para diagnóstico, seguimiento de la enfermedad y/o seguimiento terapéutico del proceso de degradación tisular. El proceso de degradación puede tener lugar en un tejido conjuntivo, tal como por ejemplo, cartílago, tendón, ligamentos, hueso, vasos sanguíneos, discos intervertebrales y menisco.

La detección de neoepítopos específicos de fragmentos de COMP se puede realizar usando anticuerpos contra los neoepítopos de COMP, por tanto la presente invención también se refiere a tales anticuerpos y al uso de los mismos. Además la invención divulga fragmentos aislados de COMP que comprenden uno o más neoepítopos, para su uso en la producción de anticuerpos contra neoepítopos de COMP como se definen aquí.

Descripción detallada

La degradación de estructuras en cartílago articular se ve típicamente en todas las enfermedades que producen crónicamente la destrucción de la estructura de la articulación. Como ejemplos de tales trastornos se pueden mencionar artritis reumatoide, artritis psoriásica y osteoartritis/osteoartrosis. La inflamación aguda de una articulación, por ejemplo, en la artritis reactiva, traumatismo, etc., con frecuencia está acompañada por una destrucción de cartílago, aunque en la mayoría de los casos esto no se desarrollará en la enfermedad crónicamente destructiva. No se sabe qué factores son cruciales para que la articulación agudamente inflamada progrese a la curación o se desarrolle en un proceso crónico. Los ejemplos de enfermedades que cursan con inflamación aguda de la articulación tal como la artritis reactiva secundaria a infección por yersinia, clamidia, salmonella, así como artritis por pirofosfato, gota (artritis úrica), artritis séptica y varias artritis de etiología traumática. Entre otros factores que potencialmente favorecen la destrucción del cartílago articular se puede mencionar, por ejemplo, el tratamiento con cortisona; esto se ha considerado durante mucho tiempo que acelera el proceso degenerativo en osteoartritis/osteoartrosis. Sin embargo, se debe advertir que las auténticas afecciones que prevalecen en casos de artritis con inflamación grave de la articulación son de un carácter bastante más complejo, ya que en esos casos la inyección de cortisona parece tener un efecto positivo global.

Otras enfermedades asociadas con cambios tisulares son enfermedades inflamatorias de las articulaciones tales como, por ejemplo, artritis crónica juvenil, lupus eritematoso sistémico (LES), artritis infecciosa y artritis idiopática juvenil, otras enfermedades que afectan a estructuras de la articulación tales como, por ejemplo, artrosis, daño en el menisco, gota, enfermedades que afectan al disco intervertebral de la columna vertebral, tales como, por ejemplo, lumbago, enfermedades que afectan elementos estructurales del sistema musculoesquelético tales como daño en el tendón, daño en el ligamento y enfermedades óseas tal como, por ejemplo, osteoporosis, enfermedades que afectan arterias principales incluyendo ateroesclerosis, vasculitis y traumatismo que produce lesión, enfermedades pulmonares incluyendo asma y EPOC.

Un objeto importante de la presente invención es mejorar las posibilidades diagnósticas de los procesos de degradación tisular, particularmente en fases tempranas, y proporcionar un medio de seguir los efectos de medidas terapéuticas tomadas. En particular se prevé que un método según a presente invención pueda hacer posible diferenciar entre procesos de degradación tisular como, por ejemplo, artritis reumatoide (AR) y osteoartritis/osteoartrosis (OA).

Como se ha descrito anteriormente, los inventores de la presente invención han desarrollado un método fiable para la determinación de procesos de degradación tisular midiendo la presencia de fragmentos de COMP en el tejido y/o en los líquidos en contacto directo o indirecto con el tejido. El método presente permite una detección fiable y temprana del proceso de degradación tisular, que es un factor importante en el diagnóstico de afecciones degenerativas, ya que permite el tratamiento temprano de la enfermedad y por tanto una posibilidad mucho mayor de recuperación. La detección temprana del proceso de degradación tisular... [Seguir leyendo]

1. Un método para determinar un proceso de degradación de tejido que comprende detectar en una muestra la presencia de uno o más neoepítopos de COMP de mamífero que aparecen después del corte de COMP entre la posición 625 (N625) y 626 (P626) de la secuencia de aminoácidos de COMP (SEQ ID NO: 1).

2. Un fragmento truncado en C-terminal aislado de COMP humana en donde el extremo C-terminal del fragmento es el aminoácido 625 de SEQ ID NO: 1, y en donde el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos dada en cualquiera de SEQ ID NO: 22-31.

3. Un fragmento truncado en N-terminal aislado de COMP humana en donde el extremo N-terminal del fragmento es el aminoácido 626 de SEQ ID NO: 1, y en donde el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos dada en cualquiera de SEQ ID NO: 32-40.

4. Un fragmento aislado de COMP humana que consiste en la secuencia de aminoácidos dada en cualquiera de SEQ ID NO: 22-40.

5. Uso de un fragmento de COMP como se define en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 para la producción de anticuerpos contra uno o más neoepítopos de COMP que aparecen después del corte de COMP entre la posición 625 (N625) y 626 (P626) de la secuencia de aminoácidos de COMP (SEQ ID NO: 1).

6. Un conjugado para su uso en la producción de anticuerpos contra uno o más neoepítopos de COMP que aparecen después del corte de COMP entre la posición 625 (N625) y 626 (P626) de la secuencia de aminoácidos de COMP (SEQ ID NO: 1), que consiste en (i) uno o más fragmentos como se definen en la reivindicación 4 acoplados a o mezclados con una proteína transportadora, o

(ii) uno o más fragmentos como se definen en la reivindicación 2 o la reivindicación 3, acoplados a través del extremo que no representa el sitio de corte a una proteína transportadora.

7. Un anticuerpo contra un fragmento aislado de COMP como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 o un conjugado como se reivindica en la reivindicación 6 en donde el anticuerpo se une a uno o más neoepítopos de COMP que aparecen después del corte de COMP entre la posición 625 (N625) y 626 (P626) de la secuencia de aminoácidos de COMP (SEQ ID NO: 1).

8. Un anticuerpo según la reivindicación 7 para su uso en diagnóstico, diagnóstico diferencial, seguimiento de enfermedad y/o seguimiento terapéutico de un proceso de degradación de tejido.

9. Un método según la reivindicación 1, en donde la presencia de uno o más neoepítopos de COMP se detecta usando uno o más anticuerpos como se definen en la reivindicación 7 u 8.