La presente invención consiste en un compuesto farmacológico elaborado con el extracto soluble dializado de leucocitos lisados de origen animal,

los cuales se obtienen de tejido sanguíneo o linfático de animales domésticos sensibilizados ó no sensibilizados con antígenos específicos para su aplicación en animales en el tratamiento de enfermedades infecciosas, tales como moquillo canino

Extracto dializado de leucocitos para el tratamiento de enfermedades infecciosas en animales.

Sector de la invención

La presente invención se refiere al sector del tratamiento de enfermedades infecciosas mediante la transferencia y estimulación de inmunidad mediada por células a través de extractos de leucocitos dializados, así como métodos de obtención y preservación del extracto.

Antecedentes de la invención

Las enfermedades siempre han sido parte de la experiencia de la vida humana y animal. Desde el establecimiento de las bases para la prevención y tratamiento de las infecciones se han implementado terapias eficaces contra la mayoría de las enfermedades.

A pesar de todos los adelantos en el tratamiento de enfermedades en animales, no existían, hasta antes de la presente invención, tratamientos terapéuticos efectivos contra ciertos tipos, tales como aquellos en los que el pronóstico es poco favorable para el animal después de que aparecen los signos típicos de la enfermedad, con lo cual el paciente tiene pocas probabilidades de sobrevivir. En estos casos, el tratamiento se había limitado a tratar de conservar al animal en el mejor estado fisiológico posible a fin de permitir que su propio sistema inmunológico fuese capaz de responder. Ejemplos de estas enfermedades son la enfermedad de Aujesky y el moquillo canino.¹

El moquillo canino representa hasta el día de hoy, una de las enfermedades domésticas más importantes a nivel doméstico y de diseminación mundial.

El moquillo canino es una enfermedad sistémica, infecciosa, altamente contagiosa e inmunosupresora, de evolución aguda o subaguda, con signos clínicos respiratorios, gastrointestinales y neurológicos. Esta dolencia tiene un alto índice de mortalidad que afecta a perros y otros carnívoros en todo el mundo y se transmite por un agente viral. Es la enfermedad viral más prevaleciente en los perros y se considera que hay pocos en el mundo que viven en zonas aisladas y que no han sido expuestos o infectados con el virus.

El contagio se produce principalmente al propagarse el virus por el aire o por el contacto directo con perros infectados, replicándose así en los tejidos linfoides sistémicos, provocando fiebre, viremia y la diseminación a los tejidos epiteliales y al sistema nervioso central; la evolución depende de la cantidad del inóculo, la cepa viral y la respuesta inmunológica del huésped. La enfermedad presenta signos multisistémicos, fiebre y un alto porcentaje de mortalidad; una vez que los signos clínicos característicos del moquillo canino se hacen evidentes, el pronóstico es extremadamente pobre, la mayoría de ellos progresan de manera desfavorable, independientemente del tratamiento y de los periodos de mejoría aparente; como consecuencia, los animales mueren con o sin signos neurológicos.

El moquillo canino es la enfermedad infectocontagiosa con los mayores índices de morbilidad en los perros, la cual oscila entre el 25 y el 50%. La mortalidad es tan alta como del 50 al 100% de los casos dependiendo de la cepa viral, el tipo de población canina afectada, la edad de los perros, el estado de inmunización poblacional y la respuesta inmunológica de los animales. La rabia es la única enfermedad que tiene un índice de mortalidad mayor al del moquillo canino, ya que éste es siempre del 100%.

Antes de la presente invención, no existía un tratamiento específico para esta enfermedad. El tratamiento consistía únicamente en la administración de fármacos quimioterapéuticos, de tal manera que el tratamiento se limitaba a la restauración de medidas sintomáticas y la eutanasia una vez que se observaban signos neurológicos. Durante la evolución de la enfermedad, es posible que ocurra la recuperación espontánea de algunos perros con moquillo sistémico no nervioso, con la aplicación de medidas terapéuticas sintomáticas, lo que puede otorgar créditos inapropiados a determinados regímenes terapéuticos.^2,3,4,5,6,7

Al igual que en el moquillo canino, en diversas enfermedades infecto-contagiosas, se observa una afectación importante en la respuesta del sistema inmunológico, lo que permite una evolución mayor de la enfermedad.

Dentro de los factores que pueden causar o favorecer la inmunodeficiencia en los animales, están la desnutrición grave, la quimioterapia citotóxica, la superpoblación así como cualquier otra causa que provoque estrés intenso o prolongado, por citar algunas. La inmunosupresión genera varios efectos, tales como una mayor frecuencia de infecciones de tipo severo, parasitosis, infecciones bacterianas o virales persistentes o recurrentes, poca o ninguna respuesta al tratamiento adecuado y la infección por microorganismos no patógenos. Se han realizado estudios exhaustivos en relación al funcionamiento del sistema inmune en animales y el papel que éste juega en los organismos para combatir las infecciones. Entre las diversas líneas de investigación que se han estudiado en este sentido, está el estudio de la transferencia de inmunidad de un organismo a otro a través de diversas estrategias, que involucran principalmente fluidos o células del sistema inmunológico.

Landsteiner y Chase describieron la transferencia de inmunidad que podría realizarse a través de células de cobayas sensibilizadas donantes a cobayas receptoras no sensibilizadas, al inducir alergias por contacto al cloruro de picrilo inyectando células de exudado peritoneal de los animales sensibilizados en la piel de los animales receptores. Más tarde demostraron que la inyección intradérmica de leucocitos aislados de exudado peritoneal inducido en cobayas sensibilizadas a la tuberculina puede producir hipersensibilidad cutánea específica "retardada" a la tuberculina en cobayas no sensibilizadas. En ese mismo trabajo se intentó realizar la transferencia de esta reactividad utilizando suero y células muertas, sin buenos resultados. Posteriormente se determinó que bajo ciertas condiciones era posible transferir la hipersensibilidad por contacto de cobayas sensibilizadas con antígenos del veneno de hiedra venenosa a cobayas receptoras no sensibilizadas, mediante la inyección de células linfoides muertas. Asimismo en experimentos posteriores se lograron resultados semejantes en la transferencia de inmunidad celular mediante la utilización de clorodinitrobenceno como antígeno y extractos leucocitarios como vehículo de transferencia.

Lawrence revela que la inyección intradérmica de leucocitos viables obtenidos de donantes humanos positivos a la intradermorreacción con tuberculina en personas negativas al citado antígeno, puede inducir hipersensibilidad cutánea pasiva; también menciona que la hipersensibilidad cutánea transferida es transitoria con una duración de cuatro días a tres meses.⁸ Posteriormente confirma que el grado de duración del estado sensitivo transferido guarda una relación con el grado de sensibilización del leucocito donante y la cantidad de leucocitos utilizados; asimismo, que la sensibilidad retardada inducida tras la inyección de lisados de leucocitos es similar a la observada con la inyección de leucocitos viables.⁹ Hasta ese momento el significado de la transferencia de la hipersensibilidad cutánea era desconocido y, en consecuencia, estos trabajos recibieron poca atención. Los resultados obtenidos por Lawrence, relacionados con el extracto dializado de leucocitos (EDL) fueron vistos con escepticismo por algunos inmunólogos y se propusieron explicaciones alternativas. Una se basó en el punto de que Lawrence en sus experimentos siempre utilizaba antígenos de agentes infecciosos o componentes de vacunas comunes y que el organismo receptor reaccionaba por sensibilización primaria; también se propuso que los contenidos de receptores en los extractos dializados de leucocitos ya estaban sensibilizados a los antígenos y el extracto dializado actuaba como refuerzo o amplificador de las sensibilidades preexistentes. En experimentos posteriores con antígenos sintéticos y estudios controlados realizados con ratones fue posible rechazar estas posibilidades. También se postuló que el dializado contenía fragmentos de antígenos altamente inmunogénicos y que el extracto dializado de leucocitos producía sus efectos por sensibilización activa de los receptores, teoría que a la fecha ha sido desechada.

En la década de los 70 resurge el interés por el EDL y los factores de transferencia contenidos en él, cuando se observó que su aplicación en personas con determinados síndromes de inmunodeficiencia...

1. Extracto dializado de leucocitos estéril, libre de células completas o viables y que contiene moléculas menores de 12 KDal de peso, caracterizado porque es estable en solución a 4ºC durante 7 a 12 meses sin el uso de conservantes y en el que el extracto dializado se esteriliza mediante adición de ozono.

2. Extracto, según la reivindicación 1, caracterizado porque contiene una concentración equivalente de leucocitos de 1 X 10⁵ a 5 X 10⁹ por ml.

3. Extracto, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque los leucocitos provienen de sangre o tejido linfático de animales.

4. Extracto, según la reivindicación 3, caracterizado porque el tejido linfático es seleccionado de timo, nódulos linfáticos, bazo o combinaciones de los mismos.

5. Extracto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque es preparado a partir de tejidos de animales previamente sensibilizados contra un agente etiológico infeccioso específico.

6. Extracto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque es preparado a partir de tejidos de animales no sensibilizados contra un agente etiológico infeccioso específico.

7. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto dializado de leucocitos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Composición farmacéutica, según la reivindicación 7, caracterizada porque el extracto dializado de leucocitos se encuentra en una concentración equivalente de leucocitos de 1 X 10⁵ a 5 X 10⁹ por ml.

9. Composición farmacéutica, según la reivindicación 7 u 8, caracterizada porque contiene adicionalmente un antibiótico.

10. Composición farmacéutica, según la reivindicación 9, caracterizada porque el antibiótico es seleccionado del grupo que comprende sulfamerazina, trimetropina, minociclina, amoxicilina, gentamicina, penicilina y estreptomicina.

11. Kit terapéutico para el tratamiento de un animal no humano afectado de una enfermedad infecciosa, caracterizado porque comprende 6 a 10 dosis individuales de la composición farmacéutica, según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en el que de 30% a 50% de dichas dosis individuales son de 3 a 300 veces mayores en la concentración del extracto dializado de leucocitos que el resto de las dosis.

12. Método para obtener el extracto dializado de leucocitos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende los pasos de:

Recolectar los tejidos celulares que contienen los leucocitos de un donante animal no humano,

Separar los leucocitos de los tejidos celulares obtenidos en a),

Lisar los leucocitos obtenidos en b),

Dializar el extracto obtenido en el paso c),

caracterizado porque el extracto dializado obtenido en el paso d) es esterilizado por la adición de ozono a una concentración de 0,2 a 0,5 ppm aplicado por burbujeo.

13. Método, según la reivindicación 12, caracterizado porque el ozono es adicionado a una concentración de 0,3 ppm.

14. Uso del extracto dializado de leucocitos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un animal vertebrado no-humano con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste en bacterias, hongos, protozoarios y virus, que incluye administrar al animal no-humano infectado una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto.

15. Uso, según la reivindicación 14, caracterizado porque el extracto dializado de leucocitos es administrado con una dosis equivalente a 1 X 10⁶ a 5 X 10⁶ leucocitos por Kg de peso corporal.

16. Uso, según la reivindicación 15, caracterizado porque el extracto dializado de leucocitos es administrado con una dosis equivalente a 1,5 x 10⁶ leucocitos por Kg de peso corporal.

17. Uso, según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizado porque el extracto dializado de leucocitos es aplicado a un intervalo entre dosis de 8 horas a 30 días.

18. Uso, según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizado porque el extracto dializado de leucocitos es administrado vía parenteral o enteral.

19. Uso, según la reivindicación 18, caracterizado porque el extracto de dializado de leucocitos es administrado vía subcutánea.

20. Uso, según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19, caracterizado porque el extracto dializado de leucocitos es aplicado en una única dosis.

21. Uso, según la reivindicación 14, en el que el animal vertebrado no-humano es un mamífero o un ave.

22. Uso, según la reivindicación 21, en el que el mamífero es seleccionado del grupo que consiste en felinos, caninos, porcinos, equinos, bovinos y ovinos.

23. Uso, según la reivindicación 21, en el que el microorganismo es un virus seleccionado entre virus de herpes α, virus de herpes β, virus de herpes γ, Morbilivirus, pneumovirus, coronavirus, papilomavirus, oncornavirus, ortomixovirus, paramixovirus, lentivirus y oncovirus; o en el que el microorganismo es una bacteria seleccionada entre Pasteurella, Mycoplasma, Mycobacterium, Leptospira, Brucella, Bordetella, Haemophilus, Treponema y Campylobacter; o en el que el microorganismo es un hongo seleccionado de Actinomyces, Coccidiodomicosis, Histoplasma, Criptococcus, Blastomyces, Aspergilus y Candida; o en el que el microorganismo es un protozoario seleccionado de Leishmania, Entamoeba, Toxoplasma, Isospora, Erlichia, Neospora, Criptosporidium y Balantidium.

24. Uso, según la reivindicación 21, en el que la infección causada por virus es seleccionada de rinotraqueitis bovina infecciosa, mamilitis ulcerativa, fiebre catarral maligna, influenza, peste bovina, parainfluenza-3, virus bovino sincicial, diarrea neonatal del carnero, papilomatosis, leucosis bovina, rinoneumonitis equina, exantema coital equina, anemia infecciosa equina, parainflueza SV-5, herpesvirus canino, Rinotraqueitis felina, urolitiasis felina, peritonitis infecciosa felina, leucemia viral felina, herpes virus del cerdo lactante, rinitis atrófica, gastroenteritis transmisible, encefalomielitis hemoaglutinante, enfermedad del ojo azul, adenomatosis pulmonar, laringotraquitis infecciosa, enfermedad de Marek, plaga de aves, enfermedad de Newcastle, bronquitis infecciosa y leucosis aviar; o en el que la infección causada por bacterias se selecciona de septicemia hemorrágica, pleuroneumonía contagiosa, mastitis bovina, paratuberculosis, tuberculosis, leptospirosis, brucelosis, neumonía enzoótica porcina, disentería porcina, campilobacteriosis, enfermedad respiratoria crónica, sinovitis infecciosa y cólera aviar; o en el que la infección causada por hongos se selecciona de actinomicosis, coccidiomicosis, histoplasmosis, criptococosis, blastomicosis, aspergilosis y candidiasis; o en el que la infección causada por protozoarios se selecciona de toxoplasmosis, leishmaniasis, balantidiasis, amibiasis, coccidiosis, erliquiosis y neosporosis.

25. Uso, según la reivindicación 21, en el que el extracto es preparado a partir de tejidos de un animal no humano de la misma especie o de otra especie diferente que el animal no humano que recibe el tratamiento.

26. Uso, según la reivindicación 14, caracterizado porque la infección causada por virus es seleccionada del grupo que consiste en moquillo canino y enfermedad de Aujesky.

27. Uso, según la reivindicación 26, caracterizado porque el extracto dializado de leucocitos es administrado con una dosis equivalente a 1 X 10⁵ a 5 X 10⁹ leucocitos por Kg de peso corporal; o porque el extracto dializado de leucocitos es administrado con una dosis equivalente a 1,5 X 10⁶ leucocitos por Kg de peso corporal.

28. Extracto dializado estéril, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para ser usado en el tratamiento de un animal vertebrado no-humano con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que comprende bacterias, hongos, protozoarios y virus, que incluye administrar al animal no-humano infectado una cantidad terapéuticamente efectiva del extracto.

29. Extracto dializado estéril para ser usado de acuerdo a la reivindicación 28, caracterizado porque el extracto es administrado con una dosis equivalente a 1 X 10⁶ a 5 X 10⁶ leucocitos por Kg de peso corporal; o porque el extracto es administrado con una dosis equivalente a 1,5 X 10⁶ leucocitos por Kg de peso corporal.

30. Extracto dializado estéril para ser usado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 29 para el tratamiento de un animal vertebrado no-humano con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste en moquillo canino y enfermedad de Aujesky.

31. Extracto dializado de leucocitos estéril, libre de células completas o viables que contienen moléculas menores a 12 KDal de peso para usarse en el tratamiento de un animal vertebrado no-humano con una infección causada por un microorganismo seleccionado del grupo que consiste en moquillo canino y enfermedad de Aujesky.