DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDAD.

La presente invención se refiere al diagnóstico de enfermedades asociadas con la adhesión célula-célula reducida. Más particularmente, la invención se refiere al diagnóstico de ciertas enfermedades epidérmicas o de la piel. Antecedentes La piel es una barrera que retiene agua dentro del cuerpo y evita la penetración de agentes ambientales en el cuerpo. Por consiguiente, la función de barrera de la piel es esencial para la conservación de la homeostasis interna (Cork 1997). La epidermis se compone de capas de queratinocitos comprimidas estrechamente que se forman mediante la división en el estrato basal (o capa germinativa). A medida que los queratinocitos ascienden a través de las capas espinosa y granular, se diferencian y se forma una estructura interna rígida de queratina, microfilamentos y microtúbulos. El estrato córneo (capa córnea) está compuesto por capas de células muertas aplanadas que perdieron sus núcleos, entre las que se encuentra una mezcla compleja de lípidos y proteínas. La barrera epidérmica está ubicada en el estrato córneo y depende de la adhesión fuerte entre los corneocitos (Egelrud, 2000). Esta adhesión está mediada por corneodesmosomas (Menton and Elisen, 1971 Chapman and Walsh, 1990; North et al, 1999). La corneodesmosina es una glicoproteína de los corneodesmosomas. El otro componente de la barrera epidérmica son los lípidos laminares. Este lípido se secreta en los cuerpos laminares en el estrato granuloso (Elias 1983). En la interfaz entre el estrato granuloso y el estrato córneo, los lípidos se extraen de las células granulares hacia el espacio intercorneocitario. A continuación los lípidos se organizan en estructuras de dos capas multilaminares altamente organizadas (Landmann 1988). El estrato córneo puede visualizarse como una pared de ladrillos donde los corneocitos forman los ladrillos y los lípidos laminares la argamasa (Elias 1983). Los corneocitos contienen una sustancia que retiene el agua, el factor hidratante natural (FHN), que retiene el agua dentro de los mismos. El alto contenido de agua provoca que los corneocitos se hinchen, evitando la formación de fisuras y grietas entre ellos. La flexibilidad y elasticidad de la piel están directamente relacionadas con su contenido de agua. El estrato córneo sano normal tiene relativamente un alto contenido de agua. Por consiguiente, el estrato córneo es una barrera que se reemplaza continuamente mediante la proliferación y diferenciación de queratinocitos en la epidermis viable. Para mantener un espesor constante del estrato córneo en un punto del cuerpo dado, las partes superficiales del estrato córneo deben desprenderse continuamente en el proceso de descamación a una velocidad que equilibra su producción. La descamación alterada de corneocitos es característica de varias enfermedades tales como psoriasis, acné vulgar, ictiosis y queratinosis pilaris, entre otras. En la psoriasis, la descamación alterada de corneocitos provoca un espesor aumentado del estrato córneo y la barrera por lo general se incrementa. Haftek, M et al, (1997) usaron estudios inmunohistoquímicos e inmunoultraestructurales sobre la expresión de la corneodesmosina en varias lesiones cutáneas caracterizadas por la producción anormal y/o de la retención de la capa córnea de la epidermis para estudiar la expresión de la corneodesmosina en la capa granular y el estrato córneo de la epidermis normal y enferma. Simon, M et al, (2001) J Invest Dermatol No. 116:23-30 investigan la persistencia de los corneodesmosomas periféricos y no periféricos en el estrato córneo superior de la xerosis cutánea de invierno con respecto solo a los periféricos en la piel normal. Sumario ES 2 365 601 T3 Los inventores demostramos que la proteólisis de las proteínas corneodesmosomales es un proceso clave implicado en la descamación. Por lo tanto, los inventores descubrimos que la proteólisis aumentada, alterada o de otra forma anormal de las proteínas corneodesmosomales está implicada en varios trastornos cutáneos. En particular, descubrimos que la proteólisis aumentada de las proteínas de adhesión está implicada en enfermedades caracterizadas por la función de barrera alterada y la proteólisis disminuida de las proteínas de adhesión está implicada en enfermedades caracterizadas por la descamación alterada de corneocitos. Demostramos además que mutaciones en genes que codifican proteínas de adhesión resultan en adhesión reducida entre las células epiteliales. Las reivindicaciones independientes 1 y 5 definen la invención en su alcance más amplio: Específicamente la presente invención proporciona un procedimiento para proporcionar indicaciones útiles en el diagnóstico de una enfermedad o susceptibilidad a una enfermedad asociada con la adhesión célula-célula disminuida entre células epiteliales en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en eccema 2 atópico, eccema seborreico, dermatitis de contacto irritativa, dermatitis de contacto alérgica, asma atópica pulmonar, asma postviral, hiperreactividad bronquial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad celíaca, úlcera péptica, impétigo, verrugas virales, Molluscum contagiosum, meningitis bacteriana, meningitis viral, úlcera péptica asociada a la penetración de Helicobacteria pylori, 5 melanoma cutáneo, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, linfoma cutáneo, un cáncer de piel, un proceso maligno del tracto gastrointestinal y un proceso maligno de los pulmones, comprendiendo el procedimiento la detección de una mutación en corneodesmosina seleccionada de la detección de uno cualquiera o más de: (a) la presencia de una T en la posición +1243 de un ácido nucleico de corneodesmosina; 10 (b) la ausencia de un sitio de enzima de restricción Hph1 en la posición de +1243 de un ácido nucleico de corneodesmosina; (c) la presencia de un residuo de leucina (L) en la posición 394 de un polipéptido de corneodesmosina (L20815); (d) una mutación en un ácido nucleico de corneodesmosina que conduce a (c); (e) los siguientes nucleótidos o uno cualquiera o más de los siguientes aminoácidos en las posiciones relevantes 15 de un ácido nucleico o polipéptido de corneodesmosina: Posición del nucleótido 442 468 619 1215 1236 1243 1515 1593 Ácido(s) nucleico(s) A AGT T A T T G T Posición del residuo (1) 127 137 186 385 392 394 485 511 Posición del residuo (2) 143 153 202 401 408 410 501 527 Residuo D S/- F S S L D D/N en el que "Posición del residuo (1)" se refiere a la numeración de la secuencia con el número de acceso L20815 y "Posición del residuo (2)" se refiere a la numeración de la secuencia con el número de acceso AF030130; 20 (f) la presencia de una T en la posición 180 de un ácido nucleico de corneodesmosina; (g) la presencia de una F en la posición 40 de un polipéptido de corneodesmosina que tiene el número de acceso L20815; (h) la presencia de una F en la posición 56 de un polipéptido de corneodesmosina que tiene el número de acceso AF030130; 25 (i) una mutación en un ácido nucleico de corneodesmosina que conduce a (g) o (h); (j) la presencia de una T en la posición 619 de un ácido nucleico de corneodesmosina; (k) la presencia de una F en la posición 186 de un polipéptido de corneodesmosina; y (l) una mutación en un ácido nucleico de corneodesmosina que conduce a (k), en una muestra de células o fluido corporal obtenida de un sujeto. Específicamente la presente invención también proporciona un procedimiento para proporcionar indicaciones útiles en el diagnóstico de una enfermedad o susceptibilidad a una enfermedad asociada con la adhesión célula-célula desminuida entre células epiteliales en un individuo, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en: eccema atópico, eccema seborreico, dermatitis de contacto irritativa, dermatitis de contacto 35 alérgica e impétigo, comprendiendo el procedimiento detectar la presencia, ausencia o un nivel modulado de corneodesmosina o un fragmento de la misma, en una muestra de células o fluido corporal obtenida de un sujeto. Breve descripción de las figuras La Figura 1 muestra la secuencia de corneodesmosina AF030130.1 de GenBank. La Figura 2 muestra la secuencia de corneodesmosina L20815.1 de GenBank. 40 Descripción detallada ES 2 365 601 T3 Los inventores demostramos que la proteólisis regulada de las proteínas de adhesión es importante para una piel sana. Mostramos que una causa subyacente de varias enfermedades de la piel es la degradación en la regulación de la proteólisis de las proteínas de adhesión, que conduce a una adhesión aumentada, disminuida o de otra forma anormal entre corneocitos. Tal proteólisis anormal puede tener varias causas, incluyendo mutaciones en 45 genes de proteínas de adhesión, mutaciones en proteasas que actúan sobre... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para proporcionar indicaciones útiles para el diagnóstico de una enfermedad o susceptibilidad a una enfermedad asociada con adhesión célula-célula disminuida entre células epiteliales en el que la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en eccema atópico, eccema seborreico, dermatitis 5 de contacto irritativa, dermatitis de contacto alérgica, asma atópica pulmonar, asma postviral, hiperreactividad bronquial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad celíaca, úlcera péptica, impétigo, verrugas virales, Molluscum contagiosum, meningitis bacteriana, meningitis viral, úlcera péptica asociada a la penetración de Helicobacteria pylori, melanoma cutáneo, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, linfoma cutáneo, un cáncer de piel, un proceso maligno del tracto gastrointestinal y 10 un proceso maligno de los pulmones, comprendiendo el procedimiento la detección de una mutación en corneodesmosina seleccionada de la detección de uno cualquiera o más de: (a) la presencia de una T en la posición +1243 de un ácido nucleico de corneodesmosina; (b) la ausencia de un sitio de enzima de restricción Hph1 en la posición +1243 de un ácido nucleico de corneodesmosina; 15 (c) la presencia de un residuo de leucina (L) en la posición 394 de un polipéptido de corneodesmosina (L20815.1); (d) una mutación en un ácido nucleico de corneodesmosina que conduce a (c); (e) los siguientes nucleótidos o uno cualquiera o más de los siguientes aminoácidos en las posiciones relevantes de un ácido nucleico o polipéptido de corneodesmosina: ES 2 365 601 T3 Posición del nucleótido 442 468 619 1215 1236 1243 1515 1593 Ácido(s) nucleico(s) A AGT T A T T G T Posición del residuo (1) 127 137 186 392 394 511 Posición del residuo (2) 143 153 202 401 408 501 527 Residuo D S/- F S S L D D/N en el que "Posición del residuo (1)" se refiere a la numeración de la secuencia con el número de acceso L2081.1 y "Posición del residuo (2)" se refiere a la numeración de la secuencia con el número de acceso AF030130.1; (f) la presencia de una T en la posición 180 de un ácido nucleico de corneodesmosina; (g) la presencia de una F en la posición 40 de un polipéptido de corneodesmosina que tiene el número de acceso 25 L20815.1; (h) la presencia de una F en la posición 56 de un polipéptido de corneodesmosina que tiene el número de acceso AF030130.1; (i) una mutación en un ácido nucleico de corneodesmosina que conduce a (g) o (h); (j) la presencia de una T en la posición 619 de un ácido nucleico de corneodesmosina; 30 (k) la presencia de una F en la posición 186 de un polipéptido de corneodesmosina; y (l) una mutación en un ácido nucleico de corneodesmosina que conduce a (k), en una muestra de células o fluido corporal obtenida de un sujeto. 2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la adhesión es entre corneocitos. 3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en el que la enfermedad se selecciona 35 del grupo que consiste en: eccema atópico, eccema seborreico, dermatitis de contacto irritativa, dermatitis de contacto alérgica e impétigo. 4. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende detectar un alelo de corneodesmosina CD5 o un alelo de corneodesmosina CD6 en un individuo. 5. Un procedimiento para proporcionar indicaciones útiles para el diagnóstico de una enfermedad o 40 susceptibilidad a una enfermedad asociada con adhesión célula-célula disminuida entre células epiteliales en un individuo en el que la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en: eccema atópico, eccema seborreico, dermatitis de contacto irritativa, dermatitis de contacto alérgica e impétigo, comprendiendo el procedimiento detectar la presencia, ausencia o un nivel modulado de corneodesmosina o un 45 fragmento de la misma, en una muestra de células o fluido corporal obtenida de un sujeto. 6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el procedimiento comprende detectar uno o más de: (a) abundancia relativa de los polipéptidos de corneodesmosina de 36 kDa, 46-43 kDa y 52-56 kDa; (b) la presencia o un nivel elevados de uno o más polipéptidos de corneodesmosina de 36, 46-43 kDa; (c) la ausencia o un nivel modulado, preferiblemente un nivel más bajo de polipéptidos de corneodesmosina de 52-56 kDa en un 50 individuo. ES 2 365 601 T3 7. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que un polipéptido o fragmento se detecta en una epidermis de un individuo, preferiblemente ex-vivo en forma de una biopsia de piel o en el estrato córneo de un individuo, preferiblemente en forma de tira de cinta. 8. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende detectar la regulación hacia abajo de la expresión de un polipéptido o ácido nucleico de proteína de adhesión que es S/corneodesmosina (AF030130.1). 36 ES 2 365 601 T3 37 ES 2 365 601 T3 38 ES 2 365 601 T3 39 ES 2 365 601 T3