ANTICUERPOS CONTRA LA PROTEÍNA P51.

La presente invención se refiere anticuerpos contra la proteína p51. Antecedentes de la técnica ES 2 366 234 T3 La proteína p53 se descubrió como una proteína nuclear que se une al antígeno T grande del virus tumoral de ADN SV40 y su gen (gen p53) se ha clonado. Al principio, se consideró que p53 era un oncogén porque la transferencia de este gen y el gen ras juntos a células daba como resultado la transformación de células embrionarias. Estudios posteriores, sin embargo, revelaron que el gen p53 inicialmente clonado era un tipo mutante y que el tipo natural más bien suprimía la actividad transformante del tipo mutante. En la actualidad, se han detectado deleciones o anomalías en el gen p53 en muchos cánceres humanos y se descubrió también una mutación en los gametos del gen p53 en el síndrome de Li-Fraumeni que se sabe que es una enfermedad hereditaria con un alto riesgo de conversión maligna. Debido a estos y otros hallazgos, se considera actualmente que el gen p53 es un importante oncogén supresor [Baker, S. J., et al., Science, 244, 217-221 (1989): Nigro, J. M., Nature, 342, 705-708 (1989)]. La proteína p53 humana consiste en 393 residuos de aminoácido y puede dividirse aproximadamente en el dominio N-terminal (la región de los aminoácidos 1~101), el dominio núcleo (la región de los aminoácidos 102~292) y el dominio C-terminal (la región de los aminoácidos 293~393). El dominio N-terminal contiene secuencias necesarias para la regulación de la transcripción, tales como aminoácidos ácidos y una región con alto contenido en prolina, y se considera que es un dominio activador de la transcripción. El dominio núcleo central contiene 3 sitios hidrófobos y es un dominio asociado con unión a ADN específica de secuencia de nucleótidos. El dominio C-terminal contiene muchos aminoácidos básicos y una secuencia necesaria para la tetramerización y se considera que es responsable del reconocimiento de la unión a ADN no específica y el daño en el ADN y la inhibición de la transformación. Muchas de las anomalías del gen p53 detectadas en cánceres humanos son mutaciones de cambio de sentido y la mayoría de ellas se concentran en el dominio núcleo correspondiente a la secuencia de los aminoácidos 100~300 del extremo N-terminal, particularmente en la región denominada punto caliente que se ha conservado entre especies. La región de punto caliente en el dominio núcleo es la secuencia asociada con la unión entre la proteína p53 y el ADN y, realmente, la mutación de esta región da como resultado la inhibición de la unión específica al ADN. Resulta evidente a partir de lo expuesto anteriormente que la proteína p53 desempeña el papel de un factor de control de la transcripción que se une específicamente a otros genes para modular la expresión de los genes. El gen cuya transcripción se induce por la proteína p53 incluye, entre otros, el gen p21 [conocido como WAF1, CIP1, o SDI1 (EI-Dairy, W. S., et al., Cell, 75, 817 (1993)); MDM2 (Wu. X., et al., Genes Dev., 7, 1126 (1993)); MCK (Weintraub. H., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 4570 (1991): Zambetti. G. P., et al., Genes Dev., 6, 1143 (1992))], GADD95 [Kastan, M. B., et al., Cell, 71, 587 (1992)], ciclina G [Cyclin G: Okamoto, K., EMBO J., 13, 4816 (1994)], BAX [Miyashita, T., et al., Cell, 80, 293 (1995)], y proteína 3 de unión a factor de crecimiento similar a la insulina [IGF-BP3: Buckbinder, L., et al., Nature, 377, 646 (1995)]. La proteína codificada por el gen p21 es una proteína inhibidora para cinasa dependiente de ciclina (CDK), y se ha encontrado que la proteína p53 de tipo natural regula el ciclo celular de una manera inhibitoria a través de p21 [Harper, J. W., et al., Cell, 75, 805 (1993): Xiong, Y., et al., Nature, 366, 707 (1993): Gu, Y., et al., Nature, 366, 701 (1993)]. Además, el gen p21 se une de manera notificada al antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) para inhibir directamente la replicación del ADN [Waga, S., et al., Nature, 369, 574 (1994)]. Además, el gen p21 se ha encontrado en el mismo gen que el gen SDI1 que induce la senescencia de células para inhibir la síntesis de ADN [Noda., A., et al., Exp. Cell Res., 211, 90 (1994)]. MDM2 se une a la proteína p53 para inactivar la actividad de regulación de la transcripción de la proteína del gen, lo que conduce a la supuesta conclusión de que MDM2 actúa como factor de regulación de retroalimentación negativa. IGF-BP3 es un factor de regulación negativa en la señalización por IGF. Por tanto, el aumento del gen de IGF-BP3 por la proteína p53 sugiere el posible resultado de que la proteína p53 induce la supresión del crecimiento de células dependientes de IGF. Mientras tanto, la proteína p53 de tipo natural induce de manera notificada la apoptosis de células de leucemia mielocítica [Yonish-Rouach, E., et al., Nature, 352, 345 (1991)]. La inducción de la apoptosis de timocitos mediante irradiación no tiene lugar en ratones defectuosos en p53 [Lowe, S. W., Nature, 362, 847 (1993): Clarke, A. R., et al., Nature 362, 849 (1993)] y, en la lente del cristalino, la retina y el cerebro, la proteína p53 induce la muerte apoptótica de células privadas de actividad normal del gen de retinoblastoma (gen RB) [Pan, H., y Griep, A. E., Genes Dev., 8, 1285 (1999): Morgenbesser, S. D., et al., Nature 371, 72 (1999): Howes, K. A., Genes Dev., 8, 1300 (1994): 2 ES 2 366 234 T3 Symonds, H., et al., Cell, 78, 703 (1994)]. E. White propone que la proteína p53 es útil para una vigilancia de la mutación del gen RB y que es probable que la proteína induzca la apoptosis de las células en las que está implicada una mutación del gen RB [White, E., Nature, 371, 21 (1994)]. Además, en la línea celular de leucemia eritroide de ratón en la que sólo se expresa el gen p53 sensible a la temperatura, una disminución en la temperatura da como resultado la reconversión del gen p53 mutante al tipo natural para inducir apoptosis y el gen p53 mutante aislado a partir del mismo confiere la capacidad de crecer en medio de agar blando a una línea de fibroblastos defectuosos en p53 (confiere independencia de anclaje) [Xu et al., Jpn, J. Cancer Res. 86: 284-291 (1995); Kato et al., Int. J. Oncol. 9: 269-277]. BAX puede unirse a bcl-2, que es un inhibidor de la apoptosis, y estimula la muerte de células apoptóticas [Oltvai, Z. M., et al., Cell, 74, 609 (1993)]. El aumento en el gen BAX y la disminución en bcl-2 por la proteína p53 están implicadas en la apoptosis de la línea celular de leucemia de ratón M1 [Miyashita, T., et al., Oncogene, 9, 1799 (1994)] y Fas, que es uno de los transductores de la señal para la apoptosis, está aumentado en cáncer de pulmón de células no pequeñas y eritroleucemia [Owen-Schaub, L. B., et al., Mol. Cell Biol., 15, 3032 (1995)]. Las diversas investigaciones a las cuales se hace referencia anteriormente han revelado que la proteína p53 o bien activa o bien suprime la transcripción de diversos genes sin limitarse al gen p21. Además, incluso la proteína p53 mutante defectuosa en la función de regulación de la transcripción puede interaccionar con otras proteínas intracelulares para transmitir señales y desencadenar una función de reparación del daño en el ADN. Entre las funciones de la proteína p53 que se han identificado hasta la fecha están una función de regulación de la transcripción, una función de transductor de señales a través de la unión a otras proteínas intracelulares, un elemento constituyente de un complejo proteico relacionado con la replicación del ADN, una función de unión a ADN y actividad exonucleasa, y se conjetura que es el resultado de una interacción de compuesto de estas funciones la que provoca la detención del ciclo celular en células, la inducción de la apoptosis, la reparación del ADN, la regulación de la replicación del ADN y la inducción de la diferenciación. Además, no es cierto que las funciones de la proteína p53 se expresan sólo en el caso de un daño en el gen, sino que se ha constatado que cuando el tejido vivo se somete a diversas tensiones tales como infección viral, estimulación con citocinas, hipoxia, un cambio en la reserva de nucleótidos, anormalidad metabólica inducida por fármacos, etc., los estímulos desencadenan cambios cuantitativos o cualitativos en la proteína p53. La proteína p53 sometida a la regulación cuantitativa o cualitativa expresa sus funciones, tal como la transducción de señales, a través de interacciones con otras proteínas y el control de la transcripción de otros genes, para regular la replicación del ADN en células de los tejidos vivos sometidos a tensiones biológicas, reparar las células suspendiendo el ciclo celular, eliminar células por medio de apoptosis o promover la diferenciación de células, contribuyendo de ese modo a la protección del tejido vivo frente a las tensiones... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo aislado que se une específicamente a una proteína p51 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 1, en el que dicha proteína p51 se produce mediante tecnología recombinante o síntesis química. 2. Anticuerpo aislado según la reivindicación 1, en el que la unión se determina utilizando inmunoprecipitación, inmunotinción, inmunotransferencia de tipo Western, ELISA o radioinmunoanálisis (RIA). 3. Kit para detectar la proteína p51 que comprende (i) un anticuerpo aislado según la reivindicación 1, y (ii) un medio para detectar el anticuerpo. 15 4. Kit según la reivindicación 3, en el que el medio para detectar el anticuerpo es uno o más de entre una enzima, una coenzima, un sustrato, un polipéptido, un anticuerpo o un marcador detectable. ES 2 366 234 T3 5. Kit según la reivindicación 4, en el que el medio para detectar el anticuerpo es un segundo anticuerpo que se une específicamente al anticuerpo. 6. Kit según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. 7. Kit según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo está en forma de una preparación purificada de anticuerpo policlonal. ES 2 366 234 T3 51 ES 2 366 234 T3 52 ES 2 366 234 T3 53 ES 2 366 234 T3 54 ES 2 366 234 T3 ES 2 366 234 T3 56 ES 2 366 234 T3 57 ES 2 366 234 T3 58 ES 2 366 234 T3 59 ES 2 366 234 T3 ES 2 366 234 T3 61 ES 2 366 234 T3 62 ES 2 366 234 T3 63 ES 2 366 234 T3 64 ES 2 366 234 T3