VECTORES LENTIVIRALES PARA LA PREPARACION DE COMPOSICIONES INMUNOTERAPEUTICAS.

Uso de:

a) un transgén que es la secuencia de un gen de un agente patógeno o un fragmento de dicho gen que codifica para uno o varios epítopos de 8 a 15 aminoácidos,

situado bajo el control de señales reguladoras de transcripción y expresión,

b) una secuencia que contiene señales reguladoras de retrotranscripción, expresión y encapsidación de origen retroviral o similar a retroviral, y

c) regiones de iniciación central de acción en cis (cPPT) y de terminación de acción en cis (CTS) que pueden adoptar una estructura de tres cadenas tras transcripción inversa, siendo estas regiones de origen retroviral o similar a retroviral e insertándose en una orientación funcional con respecto a las señales reguladoras de origen retroviral o similar a retroviral mencionadas anteriormente, en la preparación de un vector

Vectores lentivirales para la preparación de composiciones inmunoterapéuticas.

La presente invención se refiere al uso de vectores retrovirales, y especialmente a vectores lentivirales para la preparación de composiciones que son capaces de inducir o contribuir a que tenga lugar o la mejora de una reacción inmunológica in vitro, y en una realización preferida in vivo, frente a epítopos que son codificados por secuencias de nucleótidos presentes en los vectores.

Los inventores han mostrado que los vectores preparados según la presente invención permiten obtener una respuesta inmune mediada por células, especialmente una reacción de linfocitos T citotóxicos (LTC) frente a epítopos.

La invención se refiere al uso de (a) un transgén que es la secuencia de un gen de un agente patógeno o un fragmento de dicho gen que codifica para uno o varios epítopos de 8 a 15 aminoácidos, situado bajo el control de señales reguladoras de transcripción y expresión, (b) una secuencia que contiene señales reguladoras de retrotranscripción, expresión y encapsidación de origen retroviral o similar a retroviral, y (c) regiones de iniciación central de acción en cis (cPPT) y de terminación de acción en cis (CTS) que pueden adoptar una estructura de tres cadenas tras transcripción inversa, siendo estas regiones de origen retroviral o similar a retroviral e insertándose en una orientación funcional con respecto a las señales reguladoras de origen retroviral o similar a retroviral mencionadas anteriormente, en la preparación de un vector.

Además han obtenido datos que muestran que esta respuesta inmune mediada por células puede ser una respuesta específica, obtenida frente a uno o varios epítopos codificados por la secuencia de nucleótidos contenidos en los vectores.

También la solicitud da a conocer medios que podrían utilizarse para el tratamiento o profilaxis de enfermedades infecciosas, especialmente enfermedades asociadas con infección por virus y por ejemplo, con infección por retrovirus.

Los inventores además han obtenido resultados que muestran que la respuesta inmune mediada por células y especialmente la respuesta LTC asociada con el tratamiento mediante las composiciones de la invención puede ser específica para el antígeno del tumor o del virus o células infectadas por el virus, y también puede limitarse a moléculas específicas del CMH (complejo mayor de histocompatibilidad).

Particularmente la invención se refiere al uso de los vectores en composiciones inmunógenas, con el fin de obtener una respuesta inmune mediada por células limitada a las moléculas de clase I del complejo CMH y por ejemplo limitada a moléculas HLA-A2 o B7.

En consecuencia, la solicitud se refiere a una composición inmunógena que comprende un vector recombinante que comprende un polinucleótido que engloba la región de iniciación central de acción en cis (cPPT) y la región de terminación de acción en cis (CTS). Durante la transcripción inversa, las secuencias cPPT y CTS inducen la formación de una estructura de ADN de tres cadenas denominada aquí en el presente documento como ADN tricatenario. El ADN tricatenario estimula la importación nuclear de genomas del ADN del vector, siendo estas regiones de origen retroviral o similar a retroviral, comprendiendo dicho vector además una secuencia de nucleótidos definida (transgén o secuencia de interés) y señales reguladoras de retrotranscripción, expresión y encapsidación de origen retroviral o similar a retroviral, en el que la composición es capaz de inducir o estimular una respuesta de LTC (linfocitos T citotóxicos) o de CD4 frente a uno o varios epítopos codificados por la secuencia de transgén presente en el vector.

En una realización preferida de la invención, la respuesta inmune mediada por células y especialmente la respuesta de LTC o la respuesta de CD4 frente a uno o varios epítopos es una respuesta de LTC o de CD4 de memoria.

Se enfatiza que la presencia, en el vector, de las regiones cPPT y CTS permiten que de ese modo se forme una estructura de ADN tricatenario influyendo y especialmente mejorando la importación nuclear del genoma del vector en células recombinadas con dicho vector.

Esta capacidad de la composición inmunógena según la presente invención para inducir, mejorar o en general para asociarse a los acontecimientos de la respuesta de LTC de memoria, permite proponer el uso de la composición inmunógena en los protocolos de terapia antitumoral o terapia antivírica o antipatógena, incluyendo si la respuesta inmune tiene que inducirse en un largo periodo de tiempo o ser al menos inducible cuando se busca una respuesta en un periodo de tiempo que puede ser inducción a largo plazo de la respuesta, tras la administración de la composición inmunógena. En otras palabras, puede usarse la composición inmunógena para la preparación de composición terapéutica para el tratamiento de enfermedades infecciosas, por ejemplo mediante bacterias o virus, induciendo o estimulando o participando en la aparición de una respuesta inmune mediada por células, especialmente una respuesta de LTC o una respuesta de memoria.

Se enfatiza que la composición inmunógena de la invención, como consecuencia de la presencia de la estructura tricatenaria en la secuencia del vector, que resulta de la presencia de las regiones CTS y cPPT en el vector y en las partículas del vector, permiten la estimulación de la importación nuclear del genoma del vector, en células diana.

La presente invención abarca también el uso de una secuencia nucleotídica que comprende las secuencias CTS y cPPT de origen retroviral o sintético para aumentar la entrada de las secuencias de nucleótidos o de péptidos en el núcleo de las células diana o células receptoras.

Por tanto, la invención describe una composición que podría utilizarse en protocolos terapéuticos que presentan analogías con los protocolos de vacunación, para el tratamiento de enfermedades antiinfeccioso.

Varios epítopos que forman un múltiple epítopo, pueden codificarse por el transgén de la invención. Puede ensayarse la respuesta inmune mediada por células in vitro o en una realización preferida in vivo. Los protocolos que permiten llevar a cabo tales ensayos se describen en los ejemplos.

Según otro aspecto de la invención, puede utilizarse la composición inmunógena con el fin de obtener una respuesta inmune mediada por células, en enfermedades infecciosas, incluyendo infección asociada a virus, o infección ligada a cualquier tipo de patógeno, incluyendo Mycobacteria, por ejemplo M. tuberculosis.

En este caso pueden identificarse antígenos específicos capaces de provocar una respuesta inmune mediada por células y pueden insertarse sus secuencias codificantes en el vector utilizado en la composición inmunógena. Puede utilizarse como ejemplo el gen des de M. tuberculosis.

Se añade también que los vectores preparados según la invención que se utilizan en las composiciones inmunógenas pueden expresar epítopos o pueden estar presentes en proteínas (incluyendo glucoproteínas u otros compuestos derivados de proteínas) identificadas como antígenos diana en células infectadas por virus.

Además, se observa que epítopos, polipéptidos o proteínas utilizadas para proporcionar epítopos, pueden modificarse, por ejemplo mediante mutación, deleción o inserción y por ejemplo pueden modificarse para mejorar su estabilidad.

La solicitud se refiere también una composición inmunógena que comprende partículas retrovirales recombinantes que comprenden:

en la que la composición inmunógena es capaz de inducir o de estimular una respuesta de LTC (linfocitos T citotóxicos)...

1. Uso de:

2. Uso según la reivindicación 1, en el que dichas secuencias de origen retroviral se derivan de un genoma de lentivirus.

3. Uso según la reivindicación 1, en el que dichas secuencias de origen similar a retroviral se derivan de un retrotransposón.

4. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho transgén está contenido en un casete de expresión que incluye señales reguladoras de transcripción y expresión.

5. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dichas señales reguladoras de retrotranscripción, expresión y encapsidación son de origen lentiviral, y dichas regiones de cPPT y de CTS son de origen lentiviral.

6. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dichas señales reguladoras de retrotranscripción, expresión y encapsidación y dichas regiones de cPPT y de CTS, se derivan de un virus seleccionado de lentivirus, tal como CAEV, EIAV, VISNA, VIH, VIS o VIF.

7. Uso según la reivindicación 6, en el que dichas señales reguladoras de retrotranscripción, expresión y encapsidación y dichas regiones de cPPT y de CTS se derivan de un retrovirus de tipo VIH, en particular VIH-1 o VIH-2.

8. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dichas regiones de cPPT y de CTS tienen una localización central dentro de la secuencia del vector.

9. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho transgén se inserta en la región U3 de las señales de regulación para retrotranscripción.

10. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicho transgén es un gen que codifica para un antígeno de una bacteria.

11. Uso según la reivindicación 10, en el que dichas bacterias son Mycobacteria.

12. Uso según la reivindicación 11, en el que dichas micobacterias son Mycobacterium tuberculosis.

13. Uso según la reivindicación 12, en el que dicho transgén es la secuencia completa del gen DES de M. tuberculosis.

14. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicho transgén es un gen que codifica para un antígeno de un virus.

15. Uso según la reivindicación 14, en el que dicho virus es un retrovirus.

16. Uso según la reivindicación 15, en el que dicho transgén es una secuencia de múltiples epítopos de LTC específica de VIH.

17. Uso según la reivindicación 15, en el que dicho transgén es una secuencia de un epítopo de LTC específica de VIH.

18. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho uno o varios epítopos codifica(n) para de 9 a 12 aminoácidos.

19. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en el que dicho vector es adecuado para provocar o estimular una respuesta inmunitaria mediada por células frente a uno o varios epítopos codificados por dicho transgén.

20. Uso según la reivindicación 19, en el que dicha respuesta inmunitaria mediada por células es una respuesta de linfocitos T citotóxicos (LTC) o una respuesta de CD4.