Uso de una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un antígeno para la fabricación de partículas recubiertas,

en forma de medicamento, que comprenden partículas vehículo núcleo recubiertas con dicha molécula de ácido nucleico para su uso en inmunización de ácido nucleico mediada por partículas, en el que dichas partículas recubiertas se coadministran con un adyuvante en una forma distinta al ADN que es eficaz para potenciar al menos un componente de una respuesta inmune provocada contra el antígeno, en el que el adyuvante recubre distintas partículas vehículo núcleo

Vacunas genéticas con adyuvantes.

Divulgación

La invención se refiere al campo general de biología molecular e inmunología, y se refiere, en general, a reactivos útiles en técnicas de inmunización con ácidos nucleicos. Más particularmente, la invención se refiere a composiciones de vacunas y procedimientos de uso de dichas composiciones para inducir una respuesta inmune potenciada contra un antígeno seleccionado.

Las técnicas para la inyección de ADN y ARNm en tejido de mamíferos para fines de inmunización contra un producto de expresión ya se han descrito anteriormente. Véase, por ejemplo, la memoria descriptiva de patente europea EP 0 500 799 y la patente de Estados Unidos Nº 5.589.466. Las técnicas, denominadas "inmunización con ácido nucleico" en este documento, han demostrado provocar respuestas inmunes tanto humorales como mediadas por células. Por ejemplo, los sueros de ratones inmunizados con una construcción de ADN que codifica la glicoproteína de la envuelta, gp160, demostraron reaccionar con gp160 recombinante en inmunoensayos y los linfocitos de los ratones inyectados demostraron proliferar en respuesta a gp120 recombinante. Wang et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 4156-4160. Análogamente, los ratones inmunizados con un gen de la hormona del crecimiento humana (hGH) demostraron una respuesta inmune basada en anticuerpos. Tang et al. (1992) Nature 356: 152-154. La inyección intramuscular de ADN que codifica la nucleoproteína del virus de la gripe impulsada por un promotor de mamífero ha demostrado provocar una respuesta de linfocitos T citolíticos CD8+ (CTL) que puede proteger a los ratones contra una exposición posterior letal al virus. Ulmer et al. (1993) Science 259: 1745-1749. Los estudios inmunohistoquímicos de los sitios de inyección mostraron que el ADN era captado por los mieloblastos y la producción citoplasmática de la proteína viral pudo demostrarse durante al menos 6 meses.

Estas llamadas "vacunas genéticas" han demostrado por lo tanto provocar una respuesta inmune en animales tratados, similar a la que se observa después de la administración de vacunas atenuadas vivas, la forma de vacuna más eficaz usada en la actualidad. La teórica eficacia de las vacunas basadas en ácidos nucleicos parte de la capacidad de las composiciones de vacuna para provocar la producción de novo de antígenos de proteína plegados correctamente, lo que puede dar como resultado la producción de respuestas de anticuerpo que reconocen a los epítopos tridimensionales complejos. Además, la producción in vivo de estos antígenos en células de presentación de antígeno profesionales, da como resultado la presentación de fragmentos peptídicos procesados por moléculas MHC de clase I, dando como resultado la activación y la participación de linfocitos T citolíticos (CTL) específicos de antígeno.

Hasta la fecha, la técnica de inmunización con ácido nucleico más eficaz implica el suministro de una composición de vacuna de ADN mediante el suministro intracelular mediado por partículas en la epidermis. Véase por ejemplo, la Patente Europea Nº 0 500 799. Esta técnica evita las dificultades del suministro extracelular (por ejemplo, mediante suministro con aguja y jeringa a la piel o al músculo) ya que se cree que la mayor parte de dicho ADN suministrado de forma extracelular se degrada rápidamente, lo que hace necesario inocular una cantidad excesiva de ADN para conseguir un nivel suficiente de expresión del antígeno. El suministro de ADN mediado por partículas a la epidermis, por otro lado, consigue el depósito directo e intracelular de ADN de plásmidos en las células epidérmicas, incluyendo las células de Langerhans epidérmicas. Debido al suministro directo intracelular, el ADN está protegido de las nucleasas extracelulares y es necesario suministrar solamente pequeñas cantidades de ADN. De hecho, la inmunización mediada por partículas con cantidades cercanas al nanogramo de un ADN de plásmido dado puede dar como resultado la producción de respuestas humorales y de CTL muy fuertes, a menudo después de una única in- munización.

La malaria está muy extendida y es una enfermedad humana significativa, particularmente en países tropicales. La enfermedad está causada por el mosquito portador de los parásitos Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax. La investigación sobre la vacuna de la malaria aún no ha dado como resultado el desarrollo de un producto de vacuna seguro, practico, profiláctico y eficaz. Aunque se han producido muchos ejemplos de respuesta inmune significativa en modelos animales y en voluntarios humanos usando diversas vacunas experimentales, la protección real provocada por dicha vacunación en ensayos clínicos humanos ha sido lamentablemente baja. La cada vez mayor comprensión científica del ciclo vital del parásito de la malaria y la identificación de importantes antígenos para diversas etapas de la vida del parásito han permitido el desarrollo de diversas estrategias de vacuna diseñadas para provocar la formación de anticuerpos protectores así como de células efectoras celulares tales como CTL.

El ciclo de la enfermedad de la malaria comienza con una picadura del mosquito que inyecta los esporozoitos infecciosos de la malaria en el torrente sanguíneo. Por lo tanto sería razonable que los anticuerpos específicos para el esporozoito fueran un medio eficaz para prevenir o limitar significativamente la infección de los hepatocitos en esta etapa. Sin embargo, después de la infección de los hepatocitos, el parásito se desarrolla de forma intracelular en el hepatocito y puede escapar a los anticuerpos circulantes. En esta etapa, la presentación de antígenos específicos del esporozoito en la superficie del hepatocito infectado antes del merozoito y del merozoito o de la liberación del de la etapa sanguínea, proporciona una diana atractiva para las CTL específicas de la malaria. Dichas células efectoras podrían eliminar los hepatocitos infectados o provocar la destrucción de los parásitos intracelulares, antes de la primera liberación de merozoitos de la etapa sanguínea maduros.

Sumario de la invención

Es un objeto principal de la presente divulgación proporcionar nuevas composiciones para su uso en procedimientos de vacunación con ácido nucleico (genética). Estas composiciones combinan moléculas de ácido nucleico que contienen secuencias que codifican un antígeno de interés y un adyuvante, en las que el adyuvante está presente en la composición en una forma diferente al ADN y pretenden el suministro directo intracelular de la composición, la secuencia que codifica el antígeno y el adyuvante no de ADN. Por consiguiente, las composiciones presentes representan un alejamiento significativo de las composiciones de vacuna de ADN anteriores que pueden combinar secuencias que codifican el antígeno con secuencias que codifican el adyuvante. Además, el suministro determinado del adyuvante no de ADN en una célula diana es contrario a la intuición, puesto que se sabe que los adyuvantes funcionan en base extracelular, por ejemplo formando un deposito extracelular y es cuando estos restos están presentes en el entorno extracelular que las células inmunocompetentes pueden encontrarse e interactuar con el adyuvante para producir un efecto adyuvante deseado. El componente adyuvante de estas nuevas partículas recubiertas puede proporcionarse en varias formas diferentes tales como, aunque sin limitación, en forma de una proteína, un lípido, una hormona no proteica o un análogo de la misma, una vitamina o un análogo de la misma, un derivado de proteína purificado a partir de un cultivo bacteriano (por ejemplo, Bacilus calmette guerin), un material esquelético de la pared celular de micobacterias, una saponina o un derivado de la misma, o similares.

Por consiguiente, la invención proporciona una composición que contiene (a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un antígeno de interés; y (b) un adyuvante que es eficaz para potenciar al menos un componente de una respuesta inmune provocada contra el antígeno cuando está expresado en las células de un individuo vacunado, en el que el adyuvante está presente en dicha composición en una forma diferente a ADN y en el que el ácido nucleico y el adyuvante recubren partículas vehículo de núcleo separadas, por ejemplo partículas vehículo balística de oro o de tungsteno. En realizaciones particulares, la molécula de ácido nucleico se proporciona en el contexto de una construcción...

1. Uso de una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un antígeno para la fabricación de partículas recubiertas, en forma de medicamento, que comprenden partículas vehículo núcleo recubiertas con dicha molécula de ácido nucleico para su uso en inmunización de ácido nucleico mediada por partículas, en el que dichas partículas recubiertas se coadministran con un adyuvante en una forma distinta al ADN que es eficaz para potenciar al menos un componente de una respuesta inmune provocada contra el antígeno, en el que el adyuvante recubre distintas partículas vehículo núcleo.

2. Uso de un adyuvante en forma distinta al ADN que es eficaz para potenciar al menos un componente de una respuesta inmune provocada contra el antígeno, para la fabricación de partículas recubiertas, en forma de medicamento, que comprenden partículas vehículo núcleo recubiertas con dicho adyuvante para su uso en inmunización de ácido nucleico mediada por partículas, en el que dichas partículas recubiertas se coadministran con una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica un antígeno, en el que la molécula de ácido nucleico recubre distintas partículas vehículo núcleo.

3. Productos que comprenden partículas vehículo núcleo recubiertas con una molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 1 ó 2 y partículas vehículo núcleo recubiertas con un adyuvante como se define en una cualquiera de la reivindicación 1 ó 2 en forma de una preparación combinada para la administración separada, o al mismo tiempo, en una administración de ácido nucleico mediada por partículas.