SECUENCIAS, COMPOSICIONES Y VACUNAS DEL VIRUS DE LA ENFERMEDAD DEL PICO Y LAS PLUMAS Y EL USO DE LAS MISMAS EN TERAPIA, DIAGNOSIS Y ENSAYOS.
Una composición que comprende un polipéptido de la proteína de envuelta del virus de la enfermedad del pico y las plumas (BFDV):
(a) que tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad con una secuencia indicada en una cualquiera de las Figuras 5 a 8 que es capaz de generar una respuesta inmunogénica dirigida contra un circovirus y en donde en dicha composición dicha proteína encapsida una secuencia nucleotídica circular de una sola hebra derivada de circovirus que contiene secuencias de origen de replicación y de acción cis necesarias para la replicación, en donde:
(b) la secuencia nucleotídica circular de una sola hebra encapsidada se replica mediante Rep de BFDV expresada en trans;
(c) la secuencia nucleotídica circular de una sola hebra encapsidada es un genoma de BFDV natural, y constituye un virión infeccioso cuando es encapsidada por la proteína de envuelta del BFDV;
(d) la secuencia nucleotídica circular de una sola hebra encapsidada en un genoma de BFDV con su gen Rep reemplazado, y no es replicativa en células transfectadas o en aves; o
(e) la secuencia nucleotídica circular de una sola hebra encapsidada es un genoma de BFDV con su gen de proteína de envuelta reemplazado por otro gen, y es competente para la replicación en células transfectadas o en aves;
para el uso en un método para prevenir y/o tratar una infección por circovirus
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2005/000405.
Solicitante: UNIVERSITY OF CAPE TOWN.
Nacionalidad solicitante: Sudáfrica.
Dirección: BREMNER BUILDING LOVER'S WALK,RONDEBOSCH 7701.
Inventor/es: RYBICKI,EDWARD,PETER, WILLIAMSON,ANNA-LISE, HEATH,LIVIO.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 7 de Abril de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/01 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › virus ADN.
- C12N7/00 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00).
Clasificación PCT:
- C07K14/005 C07K 14/00 […] › de origen vírico.
- C12N15/11 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
- C12N7/04 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
Clasificación antigua:
- C07K14/005 C07K 14/00 […] › de origen vírico.
- C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
- C12N7/04 C12N 7/00 […] › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
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Fragmento de la descripción:
Secuencias, composiciones y vacunas del virus de la enfermedad del pico y las plumas y el uso de las mismas en terapia, diagnosis y ensayos.
Antecedentes de la invención
La presente invención se refiere a secuencias aisladas del virus de la enfermedad del pico y las plumas (BFDV, por sus siglas en inglés) y al uso de proteínas y secuencias de ácido nucleico del BFDV para preparar composiciones farmacéuticas destinadas a generar una respuesta inmunológica contra el BFDV. La invención se refiere además a composiciones para el tratamiento de la enfermedad del pico y las plumas (BFD, por sus siglas en inglés) y a estuches diagnósticos para el uso en la diagnosis de infecciones por BFDV.
En esta memoria descriptiva, ha de entenderse que los siguientes términos, expresiones y/u oraciones significan:
Un número creciente de enfermedades aviarias se ha atribuido recientemente a infecciones por circovirus o similares a circovirus (Todd, 2000; Woods & Latimer, 2000). Estos virus se caracterizan por genomas de DNA circular pequeño de una sola hebra encapsulados por cápsidas esféricas no envueltas (Ritchie et al., 1989). Actualmente, la familia taxonómica Circoviridae incluye el virus de la anemia del pollo (Notebom et al., 1991), el único miembro del género Gyrovirus; circovirus porcinos 1 y 2 (Meehan et al., 1997; Meehan et al., 1998); y el virus de la enfermedad del pico y las plumas (Bassami et al., 1998; Niagro et al., 1998), todos los cuales constituyen el género Circovirus. La estructura general del genoma y la organización de los miembros provisionales de la familia de los circovirus, circovirus de los colúmbidos, circovirus de la paloma, circovirus del pato, circovirus del canario y circovirus del ganso, sugieren que estos virus también deben asignarse al género Circovirus (Phenix et al., 2001).
La enfermedad del pico y las plumas de las psittaciformes (PBFD, por sus siglas en inglés) fue descrita en primer lugar en 1975 por el Dr Ross Perry y desde entonces se ha reconocido como la enfermedad infecciosa más significativa en aves psittaciformes (Pass & Perry, 1984; Raidal et al., 1993). La enfermedad se caracteriza por distrofia y pérdida de plumas, a veces acompañada de deformidades del pico y las garras. Las infecciones por circovirus están comúnmente asociadas con enfermedades relacionadas con inmunodeficiencia provocadas por el empobrecimiento de tejido linfoide (Ritchie et al., 1989). En el caso de la enfermedad del pico y las plumas, el daño al tejido linforreticular es el más pronunciado en la bolsa de Fabricius y el timo (Latimer et al., 1991). Las aves afectadas frecuentemente sucumben a infecciones secundarias.
El virus puede trasmitirse horizontalmente entre aves así como verticalmente al huevo (Ritchie & Carter, 1995). Las infecciones son adquiridas habitualmente mediante ingestión e inhalación de polvo de plumas contaminado. También es posible establecer infecciones virales agudas introduciendo material infeccioso a través de las rutas intracloacal, intranasal, subcutánea e intermuscular (Ritchie & Carter, 1995). Los datos experimentales sugieren que la gravedad de la enfermedad depende de la dosis y la ruta de infección así como de la especie implicada (Wylie & Pass, 1987; Raidal et al., 1993). Se ha dado cuenta de la enfermedad en muchas especies de aves psittaciformes cautivas y salvajes del Viejo Mundo (Pass & Perry, 1984; McOrist, 1989). También se han documentado infecciones virales en loros del Nuevo Mundo, pero las observaciones clínicas sugieren que estas psittaciformes son menos sensibles al virus que las especies del Viejo Mundo (Huff et al., 1988; Ritchie et al., 1990; Greenacre et al., 1992). El virus es endémico en Australia, pero se ha extendido a Asia, Europa, América del Norte y del Sur y África (Bassami et al., 2001). Se estima que la prevalencia de la enfermedad en bandadas de cacatúas salvajes en Australia es tan alta como 20%, con una seroprevalencia de entre 60 y 80% (Raidal et al., 1993). La enfermedad supone una seria amenaza a la supervivencia de varias especies de psittaciformes, incluyendo los altamente amenazados lorito de El Cabo e inseparable de mejillas negras.
No existe curación para aves afectadas por PBFD y las aves con infecciones crónicas no se recuperan de la enfermedad. Se ha encontrado que las aves con infecciones activas por BFDV tienen concentraciones de anticuerpo significativamente inferiores en comparación con aves que se han expuesto al virus pero permanecen clínicamente normales (Ritchie et al., 1992), sugiriendo que algunas aves son capaces de montar una respuesta inmunitaria que controla eficazmente la infección y reduciendo de ese modo la gravedad de la enfermedad. Teniendo esto en cuenta, se ha desarrollado una vacuna inactivada, que es capaz de estimular la inmunidad al virus (Ritchie et al., 1992; Raidal et al., 1993). Sin embargo, esta vacuna solo confiere protección parcial contra la estimulación con BFDV purificado.
Una desventaja significativa de las vacunas inactivadas es la amenaza de la infectividad residual. En un estudio de estimulación, tres cacatúas de moño amarillo hermanas capturadas en estado salvaje morían poco después de ser vacunadas. Esto se debía probablemente a preparaciones de vacuna inapropiadamente inactivadas (Raidal et al., 1993). Sin embargo, este problema puede evitarse mediante la producción de vacuna subunitarias. Las vacunas subunitarias consisten en solo parte del virus y así no plantean la amenaza de introducir material infeccioso durante la vacunación.
El genoma de PBFD contiene dos marcos de lectura abiertos, que se presentan en el virus y las hebras de sentido complementario y codifican proteínas asociadas a la replicación y de la cápsida, respectivamente (Niagro et al., 1998). La proteína de la envuelta es el principal constituyente de la partícula viral infecciosa y es el blanco probable del sistema inmunitario. Se ha mostrado que la secuencia de aminoácidos deducida de la proteína de la envuelta de varios aislados de BFDV difiere en tanto como 27% (Bassami et al., 2001). Sin embargo, estos aislados parecen ser antigénicamente similares en los ensayos de hemaglutinación e inhibición de la hemaglutinación (Ritchie et al.,...
Reivindicaciones:
1. Una composición que comprende un polipéptido de la proteína de envuelta del virus de la enfermedad del pico y las plumas (BFDV):
para el uso en un método para prevenir y/o tratar una infección por circovirus.
2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el circovirus es el virus de la enfermedad del pico y las plumas.
3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la secuencia nucleotídica circular de una sola hebra derivada de circovirus es una secuencia de BFDV que tiene al menos 95% de identidad con una secuencia como la indicada en una cualquiera de las Figuras 1 a 4.
4. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la secuencia de aminoácidos tiene al menos 95% de identidad con una secuencia indicada en una cualquiera de las Figuras 5 a 8.
5. Una vacuna que comprende una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para el uso en la prevención y/o el tratamiento de una infección por circovirus.
6. Una vacuna recombinante para BFDV que comprende un pseudovirión que comprende un polipéptido de BFDV que tiene una secuencia de aminoácidos indicada en una cualquiera de las Figuras 5 a 8, producida a partir de un constructo de DNA en cultivo celular que encapsida una secuencia nucleotídica recombinante derivada de virus circular de una sola hebra (ssc) elaborada en las mismas células por medio de la Rep (proteína asociada a la replicación) viral, expresada en cis o en trans.
7. Un ensayo para la cuantificación de la respuesta inmunitaria de anticuerpos séricos en aves vacunadas, ensayo que incluye la composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o viriones infecciosos formados de ese modo.
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