Procedimiento para el tratamiento de una muestra biológica de un sujeto con una enfermedad autoinmune con artritis reumatoide o el lupus eritematoso sistémico (LES),

donde el sujeto con la enfermedad autoinmune ha sido tratado con un anticuerpo terapéutico o inmunoadhesina, que comprende:

(a) delipidar la muestra;

(b) purificar las inmunoglobulinas de afinidad en la muestra;

(c) concentrar las inmunoglobulinas purificadas; y

(d) someter las inmunoglobulinas concentradas a un ensayo de actividad biológica basado en células

Pretratamiento de una muestra biológica de un sujeto que sufre una enfermedad autoinmune.

Campo de la invención

La presente invención se refiere un procedimiento de pretratamiento de una muestra biológica de un sujeto de enfermedad autoinmune para evitar interferencias, sobre todo cuando la muestra tiene que someterse a un ensayo de actividad biológica basado en células, tales como un análisis de anticuerpo neutralizante.

Antecedentes de la invención

Los linfocitos son uno de los muchos tipos de células blancas de la sangre producidas en la médula ósea durante el proceso de hematopoyesis. Existen dos poblaciones principales de linfocitos: linfocitos B (células B) y linfocitos T (células T). Los linfocitos de especial interés aquí son las células B.

Las células B maduran dentro de la médula ósea y salen de la médula expresando un anticuerpo de unión al antígeno en su superficie celular. Cuando una célula B virgen primero se encuentra con el antígeno para el que su anticuerpo unido a la membrana es específico, la célula comienza a dividirse rápidamente y su progenie se diferencia en células B de memoria y células efectoras llamadas "células de plasma". Las células B de memoria tienen una vida útil más larga y siguen expresando el anticuerpo unido a la membrana con la misma especificidad que la célula madre original. Las células plasmáticas no producen anticuerpos unidos a la membrana, sino que producen el anticuerpo en una forma que puede ser secretada. Los anticuerpos secretados son las principales moléculas efectoras de la inmunidad humoral.

El antígeno CD20 (también llamado antígeno de diferenciación linfocitos B restringido humano, Bp35) es una proteína transmembrana hidrofóbica con un peso molecular de aproximadamente 35 kD situada en linfocitos pre-B y B maduros. Valentine et al., J. Biol Chem. 264 (19):11282-11287 (1989) y Einfeld et al., EMBO J. 7(3):711-717 (1988). El antígeno también se expresa en más de 90% de los linfomas no Hodgkin de células B (NHL) (Anderson et al. Blood 63 (6):1424-1433 (1984)), pero no se encuentra en las células madre hematopoyéticas, células pro-B, células plasmáticas normales u otros tejidos normales (Tedder et al. J. Immunol. 135 (2):973-979 (1985)). CD20 regula una etapa(s) temprana en el proceso de activación para el inicio del ciclo celular y la diferenciación (Tedder et al., supra), y posiblemente funciona como un canal de calcio iónico. Tedder et al., J. Cell Biochem. 14D:195 (1990).

Teniendo en cuenta la expresión de CD20 en los linfomas de células B, este antígeno puede servir como un candidato para "marcar" los linfomas tipo. En esencia, dicho marcado se puede generalizar de la siguiente manera: anticuerpos específicos para el antígeno de superficie CD20 de las células B se administran a un paciente. Estos anticuerpos anti-CD20 se unen específicamente al antígeno CD20 de (aparentemente) tanto células B normales como malignas, y el anticuerpo unido al antígeno de superficie CD20 puede llevar a la destrucción y agotamiento de las células neoplásicas B. Además, agentes químicos o etiquetas radiactivas que tienen el potencial de destruir el tumor puede ser conjugados con el anticuerpo anti-CD20 de tal manera que el agente es específicamente "entregado" a las células B neoplásicas. Independientemente del enfoque, el objetivo principal es destruir el tumor, el enfoque específico puede ser determinado por el anticuerpo anti-CD20 particular que se utiliza, y por lo tanto, los enfoques disponibles para marcar los antígenos CD20 pueden variar considerablemente.

El anticuerpo rituximab (RITUICAN®) es un anticuerpo murino genéticamente quimérico/monoclonal humano dirigido contra el antígeno CD20. Rituximab es el anticuerpo llamado "C2B8" en Patente US 5.736.137 expedida 07 de abril 1998 (Anderson et al.). Rituximab está indicado para el tratamiento de pacientes con linfoma en recaída o refractarios de bajo grado o folicular, CD20 positivo, linfoma no Hodgkin de células B. In vitro, rituximab se ha demostrado que media la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y para inducir la apoptosis (Reff et al., Blood 83 (2): 435-445 (1994); Maloney et al., Blood 88:637a (1996); Manches et al., Blood 101:949-954 (2003)). La sinergia entre rituximab y quimioterapia y toxinas también se ha observado experimentalmente. En particular, el rituximab sensibiliza líneas celulares de linfoma de células B humano resistentes a los fármacos a los efectos citotóxicos de la doxorrubicina, CDDP, VP-16, toxina diftérica, y ricino (Demidem et al., Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12 (3):177-186 (1997)). Los estudios preclínicos in vivo han demostrado que rituximab reduce las células B de la sangre periférica, ganglios linfáticos y médula ósea de macacos cangrejeros. Reff et al., Blood 83:435-445 (1994).

Rituximab también ha sido estudiado en una variedad de enfermedades autoinmunes no malignas, en que las células B y anticuerpos parecen jugar un papel en la fisiopatología de la enfermedad. Edwards et al., Biochem Soc. Trans. 30:824-828 (2002). El rituximab se ha reportado para aliviar potencialmente signos y síntomas de, por ejemplo, artritis reumatoide (RA) (Leandro et al., Ann. Rheum. Dis 61:883-888 (2002); Edwards et al. Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S46 (2002); Stahl et al., Ann. Rheum. Dis., 62 (Suppl. 1): OP004 (2003); Emery et al. Arthritis Rheum. 48 (9): S439 (2003)), Lupus (Eisenberg, Arthritis. Res. Ther. 5:157-159 (2003); Leandro et al. Arthritis Rheum. 46: 2673-2677 (2002); Gorman et al., Lupus, 13: 312-316 (2004)), púrpura trombocitopénica inmune (D'Arena et al, Leuk. Lymphoma 44:561-562 (2003); Stasi et al., Blood, 98: 952-957 (2001); Saleh et al. Semin. Oncol., 27 (Suppl 12):99-103 (2000); Zaia et al., Haematolgica, 87: 189-195 (2002); Ratanatharathorn et al., Ann. Int. Med., 133: 275-279 (2000)), aplasia pura de células rojas (Auner et al., Fr. Haematol J., 116: 725-728 (2002)), anemia autoinmune (Aja et al. Haematologica 87:189-195 (2002) (errata aparece en Haematologica 87:336 (2002)), enfermedad por crioaglutininas (Layios et al., Leukemia, 15: 187-8 (2001); Berentsen et al., Blood, 103:2925-2928 (2004); Berentsen et al., Fr. Haematol J., 115:79-83 (2001); Bauduer, Br. J. Haematol., 112:1083-1090 (2001); Damiani et al., Fr. Haematol J., 114:229-234 (2001)), síndrome de tipo B de resistencia severa a la insulina (Coll et al., N. Engl. J. Med., 350:310-311 (2004), crioglobulinemia mixta (DeVita et al. Arthritis Rheum. 46 Suppl. 9: S206/S469 (2002)), miastenia gravis (Zaja et al., Neurology, 55:1062-1063 (2000); Wylam et al., J. Pediatr., 143:674-677 (2003)), granulomatosis de Wegener (Specks et al., Arthritis & Rheumatism 44:2836-2840 (2001)), pénfigo refractario vulgar (Dupuy et al., Arch Dermatol., 140:91-96 (2004)), dermatomiositis (Levine, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9):S1299 (2002)), síndrome de Sjogren (Somer et al., Arthritis & Rheumatism, 49:394-398 (2003)), crioglobulinemia mixta tipo II activa (Zaja et al., Blood, 101:3827-3834 (2003)), pénfigo vulgar (Dupay et al., Arch. Dermatol., 140:91-95 (2004)), neuropatía autoinmune (Pestronk et al., J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 74:485-489 (2003)), síndrome paraneoplásico opsoclono-mioclono (Pranzatelli et al. Neurology 60 (Suppl. 1) PO5.128: A395 (2003)), y esclerosis múltiple de recaída-remisión (RRMS). Cross et al. (Abstract) "Preliminary results from a phase II trial of rituximab in MS" Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis, 20-21 (2003).

Se ha llevado a cabo un estudio en fase II (WA16291) en pacientes con artritis reumatoide (AR), que prevé datos de 48 semanas de seguimiento sobre seguridad y eficacia de rituximab. Emery et al. Arthritis Rheum 48 (9): S439 (2003); Szczepanski et al. Arthritis Rheum 48 (9): S121 (2003); Edwards et al. "Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patients with rheumatoid arthritis" N Engl. J. Med. 350:2572-82 (2004). Un total de 161 pacientes fueron seleccionados al azar uniformemente para cuatro grupos de tratamiento: metotrexato, rituximab solo, rituximab más metotrexato, y rituximab más ciclofosfamida (CTX). El régimen de tratamiento de rituximab fue de un gramo administrado por vía intravenosa en los días 1 y 15. Las infusiones de rituximab en la mayoría...

1. Procedimiento para el tratamiento de una muestra biológica de un sujeto con una enfermedad autoinmune con artritis reumatoide o el lupus eritematoso sistémico (LES), donde el sujeto con la enfermedad autoinmune ha sido tratado con un anticuerpo terapéutico o inmunoadhesina, que comprende:

(a) delipidar la muestra;

(b) purificar las inmunoglobulinas de afinidad en la muestra;

(c) concentrar las inmunoglobulinas purificadas; y

(d) someter las inmunoglobulinas concentradas a un ensayo de actividad biológica basado en células.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el ensayo en (d) es un ensayo de anticuerpos neutralizantes.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la muestra en (a) es una muestra de suero.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el sujeto tiene artritis reumatoide.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el sujeto tiene lupus eritematoso sistémico (LES).

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (b) comprende purificar esencialmente todos los isotipos de inmunoglobulinas.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (b) comprende purificación de afinidad de proteína A + G.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, en el que la purificación de afinidad de proteína A + G se repite dos o más veces.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, en el que la purificación de afinidad de proteína A + G se repite tres veces.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la muestra en la etapa (a) comprende interferencia.

11. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el sujeto con enfermedad autoinmune ha sido tratado con un anticuerpo terapéutico.

12. Procedimiento según la reivindicación 11, en el que el anticuerpo terapéutico es un anticuerpo CD20.

13. Procedimiento según la reivindicación 12, en el que el anticuerpo terapéutico es rituximab o 2H7 humanizado.

14. Procedimiento según la reivindicación 13, en el que el anticuerpo terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en rituximab, 2H7 humanizado, anticuerpo CD20 humano 2F2 (HuMax-CD20), anticuerpo humanizado A20 o IMMU-106, TRU 015, anticuerpo de factor de necrosis tumoral (TNF)-a, infliximab, CDP571, MAK-195, adalimumab, fragmento de anticuerpo TNF-a pegilado, CDP-870, anticuerpo policlonal anti-TNF-a, PassTNF, anticuerpo de integrina, efalizumab, natalizumab, anticuerpo BAFF, anticuerpo BR3, anticuerpo de receptor BAFF, anticuerpo BLyS, belimumab, anticuerpo CD37, TRU 016, anticuerpo CD22, epratuzumab, anticuerpo CD22 Abiogen, CMC 544, combotox, BL22, LIF 226, anticuerpo VEGF, anticuerpo receptor VEGF, bevacizumab, ranibizumab, anticuerpo anti-HER, trastuzumab, pertuzumab, cetuximab, anticuerpo anti-IgE, omalizumab, anticuerpo IL-21, anticuerpo anti-células B, 1D09C3 Impheron, anticuerpo Lym-1, oncolima, ISF 154, gomilixima, anticuerpo receptor IL-6, atlizumab, anticuerpo IL-15, HuMax- Il-15, anticuerpo receptor de quimioquinas, anticuerpo CCR2, MLN1202, anticuerpo anti-complemento, anticuerpo C5, eculizuma, formulación oral de inmunoglobulina humana, IgPO, anticuerpo IL-12, ABT-874, teneliximab, anticuerpo CD40, S2C6 humanizado, TNX 100, anticuerpo CD52, Campath-1H, y anticuerpo avß3.

15. Procedimiento según la reivindicación 11, en el que el anticuerpo terapéutico es un anticuerpo de integrina.

16. Procedimiento según la reivindicación 15, en el que el anticuerpo de integrina es efalizumab o natalizumab.

17. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el sujeto con enfermedad autoinmune ha sido tratado con una inmunoadhesina.

18. Procedimiento según la reivindicación 17, en el que la inmunoadhesina se selecciona entre el grupo que consiste en BR3-Ig, inmunoadhesina TNF-a, etanercept, pepticuerpo anti-BAFF, TACI-Ig, BCMA-Ig, CTLA4-Ig, abatacept y BAFF-R-Ig.

19. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el sujeto con enfermedad autoinmune ha sido tratado con un anticuerpo de factor de necrosis tumoral (TNF)-a o una inmunoadhesina TNF-a.

20. Procedimiento según la reivindicación 19, en el que el sujeto con enfermedad autoinmune ha sido tratado con infliximab, adalimumab, etanercept, CDP-870 o D2E7.

21. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el sujeto con enfermedad autoinmune ha sido tratado con un fármaco seleccionado entre el grupo que consiste en TNF-R soluble pegilado, pegsunercept, antagonista del receptor IL-1 (IL-1Ra), anakira, DN-BAFF, y vacuna.