PEPTIDOS Y DERIVADOS DE PEPTIDOS, LA PRODUCCION DE LOS MISMOS ASI COMO SU USO PARA PREPARAR UNA COMPOSICION FARMACEUTICA TERAPEUTICA Y/O PREVENTIVAMENTE ACTIVA.

Péptido y derivado de péptido de las siguientes Fórmulas generales Ia y Ib ** ver fórmulas** en las que:

X1-X15 denotan uno de los 20 aminoácidos codificados genéticamente, X 17 denota un resto OR1 en el que R1 = hidrógeno o (alquilo (C1-C10), o un residuo NR2R3, siendo R2 y R3 idénticos o diferentes y denotando hidrógeno o alquilo (C1-C10), o un residuo -PEG5-60K-CO-NR4R5, siendo R4 y R5 idénticos o diferentes e hidrógeno, alquilo (C1-C10), o un resto NH-CH(CONH2)-(CH2)4-NH-CO-Y-PEG5-60K, en el que Y puede ser a la vez un átomo de oxígeno o un grupo NH, o un resto NH-Y-Z-PEG5-60K, en el que Y denota un enlace químico o un aminoácido codificado genéticamente de entre el grupo de S, C, K o R, y Z denota un separador por medio del cual se une un resto de polietilenglicol (PEG), así como las sales fisiológicamente aceptables de los mismos

Péptidos y derivados de péptidos, la producción de los mismos así como su uso para preparar una composición farmacéutica terapéutica y/o preventivamente activa.

La presente invención se refiere a péptidos y derivados de péptidos, a la producción de los mismos así como a su uso para preparar un fármaco terapéutica y/o preventivamente activo y a dicho fármaco farmacéutico.

El documento EP1586586 describe el uso de péptidos procedentes de la secuencia de la fibrina que poseen efectos antiinflamatorios.

Dicho efecto puede estar basado en el hecho de que la fibrina y los fragmentos de fibrina generados durante su rotura se unen a células endoteliales mediante su término neo-N de la cadena Bbeta y a las células del torrente sanguíneo mediante la secuencia de la cadena Aalfa, conduciendo de esta manera a la adhesión y a la transmigración de estas células en el tejido. El compañero de unión de la fibrina y los fragmentos de fibrina con las células endoteliales es la proteína endotelial vascular (VE) caderina, que se expresa exclusivamente en las uniones adherentes entre las células endoteliales adyacentes. Los péptidos según la invención bloquean esta interacción y contraactúan de esta manera la transmigración de las células de la sangre. La defensa natural contra las infecciones por los leucocitos en sangre no se ve afectada adversamente, sin embargo. De esta manera, la composición de la misma, tal como granulocitos, linfocitos y monocitos, permanece sin afectar, de tal manera que se mantiene el proceso natural de defensa.

El fibrinógeno se produce en el hígado y, de esta forma, es biológicamente inactivo y normalmente se proporciona a la sangre en concentraciones de alrededor de 3 g/l. La rotura proteolítica de la proenzima protrombina da como resultado la formación de trombina, que elimina por rotura los fibrinopéptidos A y B del fibrinógeno. De esta manera, el fibrinógeno se transforma en su forma biológicamente activa. Se generan fibrina y los productos de rotura de la fibrina.

Se forma trombina cuando se activa la coagulación de la sangre, es decir, con daño al tejido, siendo éste de génesis inflamatoria, traumática o degenerativa. La formación de fibrina mediada por trombina es básicamente un proceso protector destinado a un cierre estanco rápido de cualquier defecto producido en el sistema vascular. Sin embargo, la formación de fibrina es también un proceso patogénico. La aparición de un coágulo de fibrina como causa desencadenante de infarto cardiaco es uno de los problemas más destacados en la medicina humana.

El papel que juega la fibrina durante la extravasación de las células inflamatorias desde el torrente sanguíneo hasta el tejido que, por otra parte, es un proceso deseado para la defensa contra microorganismos patogénicos o células tumorales en el tejido pero, por otra parte, es un proceso que, por sí mismo, induce o prolonga el daño hecho al tejido, no se ha examinado hasta ahora en su conjunto, o no se ha hecho en extensión suficiente. La fibrina se une a las células endoteliales mediante su término neo-N de Bbeta por medio de la secuencia Bbeta y a las células del torrente sanguíneo por medio de la secuencia Aalfa, conduciendo de esta manera a la adhesión y a la transmigración de las células hasta el tejido.

Los péptidos o proteínas según la invención pueden evitar la adhesión de las células desde el torrente sanguíneo a las células endoteliales de la pared vascular y/o su transmigración posterior desde la sangre hasta el tejido.

El documento WO 92/16221 describe polipéptidos que se unen covalentemente a polímeros de cadena larga, como por ejemplo metoxipolietilenglicol (PEG). La unión de los polipéptidos a dichos polímeros da frecuentemente como resultado una prolongación de la semivida biológica de estos polipéptidos y retrasa su excreción renal. Se puede encontrar un resumen de estas propiedades en Davis y col., Polimeric Materials Pharmaceuticals for Biomedical Use, pp. 441-451 (1980). La adición de grupos PEG ejerce este efecto de una manera proporcional al peso molecular del péptido PEGilado, ya que, hasta un cierto tamaño de la molécula, la velocidad de filtración glomerular es inversamente proporcional al peso molecular.

El documento WO 04/101600 describe también nuevos compuestos modificados con poli(etilenglicol) y su uso, en concreto, con énfasis en péptidos modificados que activan el receptor de la eritropoyetina.

Ejemplos adicionales de modificación covalente de restos de péptidos y de proteínas PEG son interleucinas (Knauf y col., J. Biol Chem. 1988, 263, 15064; Tsutumi y col., J. Controlled Release 1995, 33, 447), Interferones (Kita y col., Drug Delivery Res. 1990, 6 157), y Catalasa (Abuchowski y col., J. Biol. Chem. 1997, 252, 3582). Se puede encontrar una revisión de la técnica anterior en Reddy, Ann. Of Pharmacotherapy, 2000, 34, 915.

Una semivida biológica prolongada es ventajosa para diversos usos terapéuticos de los péptidos. Esto es en particular verdadero en los casos de enfermedades crónicas en los que la administración del agente activo está indicada durante un periodo prolongado de tiempo. Con dichas indicaciones, esto puede mejorar la adhesión del paciente a la terapia, ya que aplicar el agente activo una vez al día, por ejemplo, se aceptará más fácilmente que la infusión continua. Además del incremento de la masa molecular mediante modificación covalente, se puede obtener una prolongación de la persistencia de los polipéptidos modificándolos de tal manera que se evite su degradación por las enzimas proteolíticas (por ejemplo, exo o endoproteasas o peptidasas).

Usando diversos ejemplos se ha demostrado que es necesario adaptar la modificación apropiada a cada péptido con el fin de evitar una influencia significativa sobre el efecto farmacodinámico en comparación con el péptido no modificado. En este contexto lo siguiente se puede referir a: Calcitonin (Lee y col. Pharm. Res. 1999, 16, (13), Growth Hormone Releasing Hormone (Esposito y col., Advanced Drug Delivery Reviews, 2003, 55, 1279), Glucagon like peptide 1 (Lee y col., Bioconjugate Res. 2005, 16, 377), as well as the growth hormone-receptor antagonist Pegvisomant (Ross y col., J. Clin. Endocrin. Metab. 2001, 86, 1716). Las revisiones de Caliceti y Veronese (Adv. Drug Deliv. Rev. 2003, 55 1261) y de Harris y Chess (Nature Rev. Drug Discovery 2003, 2, 214) describen que en el caso de diseñar conjugados PEG de péptido o proteína es necesario tener en cuenta la consideración de la estructura de la sustancia original, el peso molecular del péptido y del polímero, el número de cadenas poliméricas conjugadas así como la química del ligante, para obtener de esta manera un péptido-PEG-conjugado.

Sorprendentemente, se ha encontrado ahora que los péptidos derivados de la cadena del fragmento Bbeta(15-42) de fibrina, en la que se han sustituido uno o diversos aminoácidos de la secuencia natural de la fibrina por otros aminoácidos, así como los derivados modificados en el extremo C terminal de la secuencia del péptido, tienen también fuertes efectos antiinflamatorios. Lo mismo se aplica a los péptidos o derivados de péptidos cuya modificación evita su destrucción por las proteasas o las peptidasas, así como a los péptido-PEG-conjugados derivados de la secuencia básica del fragmento Bbeta(15-42) de fibrina.

De esta manera, la invención se refiere a los péptidos modificados que se derivan de la cadena del fragmento Bbeta(15-42) de fibrina y en los que se han sustituido uno o diversos aminoácidos de la secuencia de aminoácidos o peptidomiméticos codificada genéticamente o no codificada genéticamente. Pueden existir como péptidos libres o como derivados C terminales y/o estar unidos a un polímero de polietilenglicol (PEG), y tienen efectos antiinflamatorios y/o estabilizantes del endotelio. Por ejemplo, pueden tenerse en consideración ésteres o amidas como derivados C terminales.

Los compuestos inventivos pueden tener sustituciones conservativas de aminoácidos en una o diversas posiciones en comparación con la secuencia natural de fibrina de los animales de sangre caliente. Se define una sustitución conservativa como la sustitución de la cadena secundaria del aminoácido respectivo por una cadena de estructura y polaridad química similar, derivándose la cadena secundaria de un aminoácido codificado genéticamente o no codificado genéticamente. Se conocen en la técnica familias de aminoácidos de este tipo que tienen cadenas secundarias similares. Comprenden, por ejemplo, los aminoácidos que tienen cadenas secundarias...

1. Péptido y derivado de péptido de las siguientes Fórmulas generales Ia y Ib

en las que:

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X₁-X₁₅ denotan uno de los 20 aminoácidos codificados genéticamente,

        X₁₇        denota un resto OR₁ en el que R₁ = hidrógeno o (alquilo (C₁-C₁₀), o un residuo NR₂R₃, siendo R₂ y R₃ idénticos o diferentes y denotando hidrógeno o alquilo (C₁-C₁₀),

                o un residuo -PEG_5-60K-CO-NR₄R₅, siendo R₄ y R₅ idénticos o diferentes e hidrógeno, alquilo (C₁-C₁₀),

                o un resto NH-CH(CONH₂)-(CH₂)₄-NH-CO-Y-PEG_5-60K,

                en el que Y puede ser a la vez un átomo de oxígeno o un grupo NH,

                o un resto NH-Y-Z-PEG_5-60K, en el que Y denota un enlace químico o un aminoácido codificado genéticamente de entre el grupo de S, C, K o R, y Z denota un separador por medio del cual se une un resto de polietilenglicol (PEG),

así como las sales fisiológicamente aceptables de los mismos.

2. Péptidos y derivados de péptidos según la Reivindicación 1 de las Fórmulas generales Ia y Ib, en las que:

X₁, X₉, X₁₀, X₁₄ denotan L, I, S, M o A

X₂, X₆, X₇ denotan E o D

X₃, X₄, X₅, X₁₁ denotan R o K

X₈, X₁₂ denotan A, G, S, o L

X₁₃ denota I, L o V

X₁₅, X₁₆ denota G, A, S, o C

y en la que X₁₇ tiene el mismo significado que en la Reivindicación 1,

así como las sales fisiológicamente aceptables de los mismos.

3. Péptidos y derivados de péptidos según la reivindicación 1 de Fórmulas IIa y IIb

en las que X₁₇ tiene el mismo significado que el proporcionado por la Fórmula I en la Reivindicación 1,

así como las sales fisiológicamente aceptables de los mismos.

4. Los compuestos de las Fórmulas (IIa) y (IIb) según la Reivindicación 3,

en las que

        X₁₇        denota NH₂ o

                NR₂R₃, siendo R₂ y R₃ idénticos o diferentes y denotando hidrógeno o alquilo (C₁-C₃), o un resto -PEG_5-30K-CO-NR₄R₅, siendo R₄ y R₅ el mismo o diferente y denotando hidrógeno o alquilo (C₁-C₃),

                o un resto NH-CH(CONH₂)-(CH₂)₄-NH-CO-Y-PEG_5-30K, en el que Y denota un átomo de oxígeno o un grupo NH

                o un resto C(NR₂R₃)-(S-succinimido)-(PEG_5-40K), estando el resto de succinimido unido mediante 3 átomos de C al átomo de azufre del resto de cisteína,

así como las sales fisiológicamente aceptables de los mismos.

5. Una composición de fármaco farmacéutico que contiene un péptido o derivado de péptido según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4.