Un método para la detección de la displasia cervical o cáncer cervical en un paciente,

que abarca:

la detección de la expresión de Na+, K+-ATPasa en una muestra cervical obtenida del paciente, donde un aumento en la expresión de al menos el doble con respecto al valor de referencia de la expresión de Na+, K+-ATPasa para una muestra cervical negativa para displasia cervical o cáncer cervical indica la presencia de displasia cervical o cáncer cervical en la muestra cervical obtenida del paciente

Expresión de Na⁺ K⁺-ATPasa en displasia y cáncer cervicales.

Campo

Esta aplicación trata sobre los métodos de diagnóstico de la displasia y el cáncer cervical mediante la detección de la expresión de Na⁺ K⁺-ATPasa y los inhibidores de la Na⁺ K⁺-ATPasa para su uso en métodos de tratamiento de la displasia y cáncer cervical mediante la disminución de la actividad biológica de la Na⁺, K⁺-ATPasa.

Antecedentes

El objetivo de la prevención del cáncer cervical (o carcinoma del cuello uterino) es la detección y tratamiento de todas las células precancerosas "comprometidas" antes de que se produzca la invasión de células cancerosas. El papilomavirus humano (HPV) es un factor de desarrollo del cáncer cervical, y su detección en el tejido cervical sirve actualmente para diagnosticar displasias y cánceres cervicales. Sin embargo, la mayoría de las lesiones inducidas por HPV son curadas por el sistema inmunológico natural del paciente y solo unas pocas mujeres con cuello del útero infectado por HPV desarrollan realmente un cáncer cervical. Por tanto, es necesario que los biomarcadores faciliten la detección del grupo de células precancerosas entre los casos clínicos de alto y bajo grado y todos los casos de cáncer. Una vez identificados los biomarcadores para la detección temprana del cáncer cervical, dichos biomarcadores se convierten en candidatos para el tratamiento de la displasia cervical.

US6221623B muestra un método para detectar el cáncer cervical o la displasia cervical en un paciente mediante marcadores de apoptosis y angiogénesis.

WO0182910 A muestra un método para tratar el cáncer o la displasia cervical mediante la administración de progestágenos y RU486 (Mifepristona) en las células del cuello del útero.

Resumen

Los inventores han determinado que la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa en el tejido cervical, como el nivel de la expresión de la subunidad ß1 y la expresión relativa de las subunidades a y ß1, es distinta en el tejido cervical normal en comparación con el tejido de la displasia cervical y el cáncer cervical. Por ejemplo, la expresión ampliada de la subunidad ß1 de Na⁺, K⁺-ATPasa en tejido cervical guarda correlación con la progresión de la displasia de bajo grado a la displasia de mayor grado hasta el cáncer cervical. Además, la proporción de la expresión de la subunidad a a la subunidad ß de la Na⁺, K⁺-ATPasa en el tejido cervical disminuyó con la progresión de la displasia de bajo grado a la displasia de alto grado hasta el cáncer cervical. El patrón de la localización de la Na⁺ K⁺-ATPasa fue diferente en el tejido cervical normal y enfermo. En algunos ejemplos, la expresión normal Na⁺, K⁺-ATPasa era basal, mientras que en el tejido canceroso o con displasia cervical, la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa estaba más localizada en la membrana celular. En base a estas observaciones, se proporcionan unos métodos para utilizar la Na⁺, K⁺-ATPasa como biomarcador en la displasia cervical y el cáncer cervical y como objetivo terapéutico para el tratamiento de la displasia y el cáncer cervical.

Los métodos se proporcionan para la detección en el paciente de displasia cervical o cáncer cervical. En ejemplos concretos, el método incluye la detección de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa (como una expresión de molécula de ácido nucleico o de proteína) en una muestra cervical del paciente. Por ejemplo, es posible detectar la expresión de la subunidad ß (como la subunidad ß1), de la subunidad a, o de ambas. En ejemplos concretos se cuantifican los niveles de la expresión. Por ejemplo, la expresión detectada de Na⁺, K⁺-ATPasa se puede comparar a una muestra de referencia o valor de referencia que represente un estadio particular de la enfermedad (como la displasia cervical o cáncer cervical, o un estadio concreto de la misma). Por ejemplo, el nivel detectado de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa en la muestra puede compararse a un nivel de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa en una o más muestras de tejido cervical de referencia o a un valor de referencia que represente la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa prevista en una muestra del tejido de control. Los ejemplos de muestras y valores de referencia incluyen a aquellos que representan una presencia, ausencia, o grado conocidos de displasia cervical o cáncer cervical. Por ejemplo, si el nivel detectado de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa (como la expresión de la subunidad ß) es sustancialmente similar al nivel de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa (como la expresión de la subunidad ß) en una muestra o valor de referencia concreto, esto es indicativo de que el paciente tiene esa presencia, ausencia o grado de displasia cervical o cáncer cervical representado por la muestra o valor de referencia. En un ejemplo específico, si el valor o muestra de referencia son células cervicales normales (no displásticas, no cancerosas), un incremento detectado en la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa de al menos el doble (y como de al menos el triple) con respecto al valor de referencia indica la presencia de displasia cervical o cáncer cervical en la muestra cervical obtenida del paciente.

El método divulgado puede incluir además la detección de la subunidad a de una expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa en una muestra de tejido cervical y la determinación de la proporción de la expresión de la subunidad a y ß. En algunos ejemplos, la proporción que se determina se compara con una proporción de la expresión de la subunidad a y ß que se observa en uno o más valores o muestras de referencia con una presencia, ausencia o grado conocidos de displasia cervical o cáncer cervical. Por ejemplo, si la proporción detectada de la expresión de la subunidad a y ß se parece bastante a la expresión de la subunidad ß y a, en una muestra o valor de referencia concretos, esto es indicativo de que el paciente tiene dicha presencia, ausencia o grado de displasia cervical o cáncer cervical representado por la muestra o valor de referencia. En un ejemplo específico, si el valor o muestra de referencia son células cervicales normales (no displásticas, no cancerosas), una disminución detectada en la proporción de la expresión de la subunidad a y ß (como una disminución de al menos el 20% o al menos el 50%) con respecto al valor de referencia indica la presencia de displasia cervical o cáncer cervical en la muestra cervical obtenida del paciente.

En algunos ejemplos, los métodos revelados pueden incluir además la detección de otro marcador, como un marcador del ciclo de la célula, por ejemplo un marcador nuclear. Por ejemplo, el método puede incluir la detección de la histona H3 (mediante la utilización de anticuerpos específicos para la histona H3). Dichos marcadores adicionales también pueden utilizarse para diferenciar el tejido cervical normal de la displasia cervical o cáncer cervical. Por ejemplo, un aumento detectado en la división de células, con respecto al tejido cervical normal (es decir, un aumento de al menos el doble, de al menos cinco veces, o al menos diez veces, como 2-3 veces, 2-10 veces, o 2-20 veces) indicaría la presencia de displasia cervical o cáncer cervical.

El método para detectar y clasificar la displasia cervical o cáncer cervical también puede incluir la determinación del patrón de localización de Na⁺, K⁺-ATPasa (como la subunidad a o ß) en una muestra cervical. La localización de cualquiera o ambas subunidades a o ß en una muestra de tejido cervical puede compararse a uno o más valores o muestras de referencia con una presencia, ausencia o grado conocidos de la displasia cervical o cáncer cervical. Por ejemplo, si la localización de la Na⁺, K⁺-ATPasa detectada es sustancialmente similar a la localización de Na⁺, K⁺-ATPasa en una muestra o valor de referencia particular, esto indica que el paciente tiene esa presencia, ausencia o grado de displasia cervical o cáncer cervical representado por la muestra o valor de referencia. En un ejemplo específico, si el valor o muestra de referencia son células cervicales normales (no displásticas, no cancerosas) una localización detectada de Na⁺, K⁺-ATPasa (como una localización mejorada en la membrana celular) con respecto a dicho valor...

1. Un método para la detección de la displasia cervical o cáncer cervical en un paciente, que abarca:

la detección de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa en una muestra cervical obtenida del paciente, donde un aumento en la expresión de al menos el doble con respecto al valor de referencia de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa para una muestra cervical negativa para displasia cervical o cáncer cervical indica la presencia de displasia cervical o cáncer cervical en la muestra cervical obtenida del paciente.

2. El método de la reivindicación 1, donde la detección de la expresión Na⁺, K⁺-ATPasa abarca la detección de la expresión de la proteína Na⁺, K⁺-ATPasa.

3. El método de la reivindicación 2, donde la detección de la expresión de la proteína Na⁺, K⁺-ATPasa abarca:

(a) la puesta en contacto de la muestra cervical con un anticuerpo específico para Na⁺, K⁺-ATPasa bajo condiciones lo suficientemente idóneas como para permitir el enlace del anticuerpo a las proteínas de Na⁺, K⁺-ATPasa en la muestra, formando complejos de anticuerpos Na⁺, K⁺-ATPasa; y detectando los complejos de anticuerpos Na⁺, K⁺-ATPasa; o

(b) la detección de la proteína de Na⁺, K⁺-ATPasa mediante microscopia o citometría de flujo.

4. El método de la reivindicación 1, donde la detección de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa abarca la detección de la expresión de la molécula de ácido nucleico de Na⁺, K⁺-ATPasa, preferiblemente la detección de la expresión mRNA de Na⁺, K⁺-ATPasa.

5. El método de la reivindicación 1, donde la detección de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa abarca la cuantificación de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa.

6. El método de la reivindicación 1, donde el valor de referencia abarca además un segundo valor de referencia de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa para una muestra cervical positiva para displasia cervical o cáncer cervical.

7. El método de la reivindicación 1, donde la detección de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa abarca la detección de la expresión de la subunidad ß de Na⁺, K⁺-ATPasa; y/o donde la detección de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa abarca además la detección de la expresión de la subunidad a de Na⁺, K⁺-ATPasa.

8. El método de la reivindicación 7, abarcando además la determinación de la proporción de la expresión de la subunidad a a ß, donde al menos una disminución del 20% de la proporción de la expresión de la subunidad a a ß con respecto a un valor de referencia de expresión de la subunidad a a ß para una muestra cervical negativa para displasia cervical o cáncer cervical indica la presencia de la displasia cervical o cáncer cervical en la muestra cervical obtenida del paciente; o abarcando además la comparación de la proporción de la expresión de la subunidad a a ß con una muestra o valor de referencia.

9. El método de la reivindicación 1, abarcando además:

la determinación de la localización de Na⁺, K⁺-ATPasa en las células cervicales presentes en la muestra cervical; y,

la comparación de la localización de Na⁺, K⁺-ATPasa con la localización de Na⁺, K⁺-ATPasa de referencia.

10. El método de la reivindicación 1, abarcando además:

la detección de la histona H3 en células cervicales presentes en la muestra cervical; y,

la comparación de la expresión de la histona H3 con una expresión de histona H3 de referencia, donde la expresión de histona H3 significativamente parecida a la expresión de histona H3 de la referencia indica que el paciente tiene la presencia, ausencia o grado de la displasia cervical o cáncer cervical de la referencia.

11. El método de la reivindicación 1, abarcando además:

la selección de los pacientes con un aumento de al menos el doble en la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa con respecto a un valor de referencia de la expresión de Na⁺, K⁺-ATPasa para una muestra cervical negativa para displasia cervical o cáncer cervical para el tratamiento de displasia cervical o cáncer cervical.

12. Una composición que abarca unos o más inhibidores de Na⁺, K⁺-ATPasa para su uso en un método de tratamiento de la displasia cervical y cáncer en un paciente, cuyo método abarca:

la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de dichos inhibidores en las células cervicales.

13. La composición de la reivindicación 12, donde un o más inhibidores de Na⁺, K⁺-ATPasa incluyen digitalis.

14. La composición de la reivindicación 12, cuyo método abarca también:

el seccionado de las células de displasia cervical o cáncer cervical del paciente, la administración de una cantidad terapéutica de un agente quimioterapéutico en el paciente, la administración de una cantidad terapéutica de un agente radioterapéutico en el paciente, o combinaciones de lo anterior.

15. El método de la reivindicación 1, donde el aumento en la expresión con respecto al valor de referencia es al menos el triple o entre dos y diez veces más.

16. Una composición que abarca:

unos o más inhibidores de Na⁺, K⁺-ATPasa; y

un portador tópico farmacéuticamente aceptable para tratar la displasia cervical o cáncer cervical en un paciente, donde el tratamiento abarca:

la administración en el cuello del útero de un paciente, preferiblemente una capa epitelial del cuello del útero, de dicha composición bajo condiciones lo suficientemente idóneas para reducir la actividad biológica de Na⁺, K⁺-ATPasa en las células del cuello del útero.

17. La composición de la reivindicación 16, donde uno o más inhibidores de Na⁺, K⁺-ATPasa incluye digitalis o una molécula de RNA específica para una subunidad ß de Na⁺, K⁺-ATPasa; y/o el portador tópico farmacéuticamente aceptable abarca un agente adecuado para la administración en el tejido cervical in vivo.

18. La composición de la reivindicación 17, donde la digitalis se encuentra en una concentración de al menos 0,01 mg por gramo por peso de la composición.

19. La composición de la reivindicación 18, donde la actividad biológica de Na⁺, K⁺-ATPasa en las células del cuello del útero se reduce en al menos el 50% o al menos el 95%.