EPITOPES DE CELULAS T DE LOS ALERGENOS PRINCIPALES DE DERMATOFAGOIDES (ACAROS DEL POLVO DOMESTICO).
EL PRESENTE INVENTO PROVEE PEPTIDOS AISLADOS DE LAS ALERGIAS DE PROTEINAS MAYORES DEL GEN DERMATOFAGOIDES.
LOS PEPTIDOS DENTRO DEL CAMPO DEL INVENTO COMPRENDE AL MENOS UN EPITOPE DE CELULA T, O PREFERIBLEMENTE AL MENOS DOS EPITOPES DE CELULA T DE UNA ALERGIA DE PROTEINA SELECCIONADA DE LAS ALERGIAS DER P Y, DER P II, DER FI, O DER FII. EL INVENTO TAMBIEN PERTENECE A LOS PEPTIDOS MODIFICADOS QUE TIENEN PROPIEDADES TERAPEUTICAS SIMILARES O INCREMENTADAS COMO LAS CORRESPONDIENTES ALERGIAS QUE SUCEDEN NATURALMENTE O PARTES DE ELLAS, PERO QUE TIENEN EFECTOS SECUNDARIOS REDUCIDOS. EL INVENTO ADEMAS PROVEE LA CODIFICACION DE SECUENCIAS DE ACIDO NUCLEICO PARA LOS PEPTIDOS DEL INVENTO. TAMBIEN SON PROVISTOS LOS METODOS DE TRATAMIENTO O DE LA DIAGNOSIS DE LA SENSIBILIDAD A LOS ACAROS DEL POLVO DE LAS CASAS EN UN INDIVIDUO Y LAS COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN UNO O MAS PEPTIDOS DEL INVENTO
Tipo: Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: W9208637US.
Solicitante: IMMULOGIC PHARMACEUTICAL CORPORATION.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 610 LINCOLN STREET,WALTHAM, MASSACHUSETTS 02154.
Inventor/es: ROGERS, BRUCE, L., KUO, MEI-CHANG, GREENSTEIN, JULIA, L., GARMAN, RICHARD, D.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 30 de Septiembre de 2009.
Clasificación PCT:
- A61K39/35 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Alergenos.
- C12N15/12 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
- C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
- G01N33/53 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
Clasificación antigua:
- A61K39/35 A61K 39/00 […] › Alergenos.
- C07K15/08
- C07K7/10
- C12N15/12 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas animales.
- C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
- G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
Fragmento de la descripción:
Epítopes de células T de los alergenos principales de dermatofagoides (ácaros del polvo doméstico).
Solicitudes relacionadas
Esta solicitud es una continuación en parte de la patente U.S.S.N. 07/881.396, titulada "T Cell Epitopes of the Major Allergens From Dermatophagoides (House Dust Mite)" [Epítopes de células T de los alergenos principales de Dermatophagoides (ácaros del polvo doméstico)], presentada el 8 de mayo de 1992, que es una continuación en parte de la patente U.S.S.N. 07/777.859, titulada "T Cell Epitopes of the Major Allergens From Dermatophagoides (House Dust Mite)" [Epítopes de células T de los alergenos principales de Dermatophagoides (ácaros del polvo doméstico)], presentada el 16 de octubre de 1991, cuyas descripciones se incorporan en el presente documento por referencia.
Antecedentes de la invención
Publicaciones recientes han documentado la importancia de las respuestas a los alergenos de proteínas del grupo I (p. ej., Der p I y Der f I) y del grupo II (p. ej., Der p II y Der f II) en la alergia a los ácaros del polvo doméstico. Por ejemplo, se ha documentado que más del 60% de los pacientes poseen al menos un 50% de sus anticuerpos anti-ácaros dirigidos frente a estas proteínas (p. ej., Lind, P. y col., Allergy, 39:259-274 (1984); van der Zee, J.S. y col., Journal Allergy and Clinical Immunology, 81:884-896 (1988)). Es posible que los niños muestren un mayor grado de reactividad a los alergenos del grupo I y del grupo II (Thompson, P.J., y col., Immunology, 64:301-314 (1988)). La alergia a los ácaros del género Dermatophagoides (D.) se asocia con afecciones como el asma, la rinitis y la dermatitis ectópica. Predominan dos especies, D. pteronyssinus y D. farinae, y, como consecuencia, se han hecho considerables esfuerzos en un intento de identificar los alergenos producidos por estas dos especies.
Se ha realizado un esfuerzo coordinado para caracterizar mediante clonación génica los principales alergenos tanto de D. pteronyssinus como de D. farinae. En consecuencia, varias publicaciones han descrito las secuencias nucleotídicas de varios alergenos, como Der p I (Thomas, W.R., y col., International Archives of Allergy and Applied Immunology, 85:127-129 (1988); y Chua, K.Y., y col., Journal of Experimental Medicine, 167:175-182 (1988)), Der p II (Chua, K.Y., y col., International Archives of Allergy and Applied Immunology, 91:118-123 (1990)), Der f I (Dilworth, R.J., y col., Clinical and Experimental Allergy, 21:25-32 (1891)), Der f II (Yuuki, T., y col., Japan Journal Allergol., 39:557-461 (1990) y Trudinger, M., y col., Clinical and Experimental Allergy, 21:33-37 (1991)) y un alergeno de bajo peso molecular (Ovey, E.R., y col., Journal of Experimental Medicine, 170:1457-1462 (1989)).
Las secuencias nucleotídicas publicadas de los ADNc que codifican Der p I y Der f I demuestran que estas dos proteínas tienen una gran homología a nivel amino-acídico (81% de identidad) y que los productos proteicos maduros están constituidos por 222 y 223 restos, respectivamente (Chua, KY., y col., Journal of Experimental Medicine, 167:175-182 (1988) y Dilworth, RJ., y col., supra)). Los alergenos de las proteínas Der p II y Der f II están constituidos ambos por 129 restos y también tienen una alta homología (88% de identidad) en la secuencia de aminoácidos (Trudinger, M., y col. supra; Yuuki, T., y col. supra); Chua, K.Y., y col, International Archives of Allergy and Applied Immunology, 91:118-123 (1990)).
El aislamiento de los clones de ADNc que codifican Der p I y Der p II ha permitido estudios de unión de anticuerpos sobre los antígenos recombinantes (Green, W.K, y col., International Archives of Allergy and Applied Immunology, 92:30-38 (1990); Chua, K.Y., y col., International Archives of Allergy and Applied Immunology, 91:124-129 (1990)). Los fragmentos de ADN complementario de Der p I se han expresado en E. coli y los estudios de unión a IgE con sueros humanos IgE de alérgicos a ácaros mezclados han mostrado las regiones de unión y no unión a lo largo de la molécula (Thomas, W.R., y col., En: Epitopes of Atopic Allergens. Proceedings of Workshop from XIV Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology, Berlín, Sept. 1989. pág. 77-82). Se han descrito los epítopes de células T de Der p I (O'Hehir, R.E., y col., Annual Review Immunology, 9:67-95 (1991); Stewart, G.A., y col., En: Epitopes of Atopic Allergens. Proceedings of Workshop from XIV Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology, Berlín, Sept. 1989. pág. 41-47; Yessel, H. y col., En: T cell Activation in Health and Disease: Discrimination Between Immunity and Tolerance, Conferencia 22-26 Sept., 1990, Trinity College, Orford, Reino Unido y Hessel, H., y col., Journal of Immunology, 148 (3): 738-745 (Feb. 1, 1992).
Resumen de la invención
La presente invención proporciona péptidos aislados de los alergenos de proteínas del grupo I o II de Dermatophagoides. Los péptidos dentro del alcance de la invención contienen al menos un epítope de células T, preferiblemente al menos dos epítopes de células T de un alergeno proteico seleccionado entre los alergenos Der p I, Der p II, Der f I o Der f II. La invención además proporciona péptidos que comprenden al menos dos regiones, que contiene cada una de ellas al menos un epítope de células T de un alergeno proteico de ácaros. Las regiones proceden de los mismo o diferentes alergenos de proteínas del grupo I o II de Dermatophagoides.
La invención también proporciona péptidos modificados con propiedades terapéuticas similares o potenciadas con respecto a los correspondientes alergenos naturales o a parte de los mismos, pero con efectos secundarios reducidos, así como péptidos modificados con propiedades mejoradas, como mayor solubilidad y estabilidad. Los péptidos de la invención son capaces de modificar, en un individuo sensible a los ácaros del polvo doméstico al cual se administran, la respuesta alérgica del individuo al alergeno del ácaro del polvo doméstico o a un alergeno con reactividad inmunológica cruzada con el alergeno del ácaro del polvo doméstico. También se proporcionan los métodos de tratamiento o de diagnóstico de la sensibilidad a los ácaros del polvo doméstico en un individuo y las composiciones terapéuticas que contienen uno o más péptidos de la invención.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 muestra la subclonación y expresión de los alergenos del grupo I y del grupo II de D. pteronyssinus y D. farinae.
La figura 2a muestra los adaptadores usados en la expresión de Der p I y Der f I, y la figura 2b muestra los cebadores para la amplificación de Der f II y Der p II y un cebador de mutagénesis de Der f II.
La figura 3 muestra diversos péptidos de las longitudes deseadas derivados de los alergenos de las proteínas Der p I y Der p II.
La figura 4 muestra diversos péptidos de las longitudes deseadas derivados de los alergenos de las proteínas Der f I y Der f II.
La figura 5 es una representación gráfica que ilustra las respuestas de líneas celulares T de 33 pacientes sensibilizadas in vitro a la proteína Der p I purificada nativa (N) o recombinante (R) y analiza la respuesta a diversos péptidos de Der p I solapantes mediante el porcentaje de respuestas con un índice de estimulación (I.E.) de células T de al menos 2 en los individuos estudiados, la media del índice de estimulación de células T de respuestas positivas para el péptido y la suma de rangos de las respuestas a péptidos.
La figura 6 es una representación gráfica que ilustra las respuestas de líneas celulares T de 16 pacientes sensibilizadas in vitro a la proteína Der f I y analiza la respuesta a diversos péptidos de Der f I solapantes mediante el porcentaje de respuestas con un I.E. de al menos 2 en los individuos estudiados, la media del índice de estimulación de células T de respuestas positivas para el péptido y la suma de rangos de las respuestas a péptidos.
La figura 7 es una representación gráfica que ilustra las respuestas de líneas...
Reivindicaciones:
1. Un péptido aislado de un alergeno de una proteína del grupo I o grupo II de Dermatophagoides, comprendiendo dicho péptido al menos un epítope de células T de dicho alergeno de proteína, opcionalmente al menos dos epítopes de células T, teniendo dicho péptido un índice de positividad de al menos 100 y un índice de estimulación medio de células T de al menos aproximadamente 2, determinado en una población de individuos sensibles a dicho alergeno de proteína, siendo la población, opcionalmente, de al menos 9 individuos, por ejemplo, al menos 29 individuos.
2. Un péptido aislado de la reivindicación 1 que tiene un índice de positividad de al menos 150 y un índice de estimulación medio de células T de al menos aproximadamente 4 determinado en una población de individuos sensibles a dicho alergeno de proteína.
3. Un péptido aislado de la reivindicación 1 o 2 seleccionado entre:
4. Un péptido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, el cual:
5. Un péptido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, seleccionándose dicho péptido entre:
en el que dicho péptido tiene un índice de estimulación medio de células T equivalente o superior al índice de estimulación medio de células T de dicho péptido como se muestra en la figura 5 y la figura 13, opcionalmente, un índice de estimulación medio de células T de al menos 4.
6. Un péptido aislado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 que tiene una secuencia de aminoácidos que se corresponde con una secuencia de aminoácidos de un péptido seleccionado entre los siguientes:
como se muestra en la figura 28.
7. Un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que no se une a la inmunoglobulina E específica de Der pI en al menos el 75% de los individuos sensibles a Der pI o, si se produce la unión del péptido a dicha inmunoglobulina E, esta unión no da lugar a la liberación de mediadores a partir de mastocitos o basófilos en al menos el 75% de los individuos sensibles a Der pI.
8. Un péptido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 que comprende al menos dos regiones, cada una de las cuales comprende al menos un epítope de células T de un alergeno de una proteína del grupo I o II de Dermatophagoides, derivadas dichas regiones de los mismos o diferentes alergenos de proteínas del grupo I o II de Dermatophagoides, comprendiendo cada una de dichas regiones una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:
9. Un péptido aislado de la reivindicación 8, en el que:
(i) dichas regiones comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionados entre:
todas como se muestra en las figuras 3 y 4; o
(ii) dicho péptido comprende una combinación de regiones seleccionadas entre:
(iii) dicho péptido comprende la siguiente combinación de regiones: DP I-21.2 (SEQ ID NO: 27); DP I-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP I-26.1 (SEQ ID NO: 37); DP II-20.6 (SEQ ID NO: 56); DP II-22 (SEQ ID NO: 63); DP II-25.2 (SEQ ID NO: 71) y DF I-22.2 (SEQ ID NO: 93); o
(iv) dicho péptido tiene un ordenamiento secuencial específico de secuencias de aminoácidos, estando dicho ordenamiento de secuencias de aminoácidos seleccionado entre:
10. Un péptido aislado de un alergeno de una proteína del grupo I o II de Dermatophagoides, comprendiendo dicho péptido al menos un epítope de células T de dicho alergeno de proteína, comprendiendo dicho péptido una secuencia de aminoácidos seleccionada entre una de las siguientes:
teniendo dicho péptido, opcionalmente, una producción de inmunoglobulina E que es menor que la cantidad de producción de IgE y/o de producción de IL-4 estimulada por el alergeno de la proteína nativa.
11. Un péptido aislado que es inmunológicamente reactivo con anticuerpos específicos o células T reactivas con un péptido de la reivindicación 10.
12. Un péptido aislado de un alergeno de una proteína del grupo I o II de Dermatophagoides, seleccionando dicho péptido entre:
(i)
o (ii)
13. Un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, el cual:
(a) no se une a la inmunoglobulina E específica para un alergeno de una proteína del género Dermatophagoides en al menos el 75% de los individuos sensibles al alergeno de proteína o, si se produce la unión del péptido a dicha inmunoglobulina E, esta unión no da lugar a la liberación de mediadores a partir de mastocitos o basófilos en un porcentaje sustancial del 75% de individuos sensibles al alergeno de proteína; o
(b) se une a la inmunoglobulina E con un grado menor al que se une dicha inmunoglobulina E al alergeno de la proteína a partir del cual deriva el péptido.
14. Un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, que modifica, en un individuo sensible a los ácaros del polvo doméstico al que se le administre, la respuesta alérgica del individuo a un alergeno de los ácaros del polvo doméstico.
15. Un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en el que se sustituye al menos uno de los restos de aminoácidos que se une al complejo MHC-proteína, pero que no es esencial para dicha unión, siendo sustituido, opcionalmente, dicho resto (o restos) de aminoácidos por alanina, ácido glutámico o un metil-amino ácido.
16. Un péptido de la reivindicación 15 en el que al menos uno de los restos de aminoácidos que es esencial para la unión al complejo MHC-proteína se sustituye por un resto de aminoácido conservativo.
17. Un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en el que se sustituye al menos uno de los restos de aminoácidos que se une al receptor de células T, pero no es esencial para dicha unión.
18. Un ácido nucleico aislado que tiene una secuencia que codifica un péptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17.
19. Un péptido aislado producido en una célula hospedadora transformada con un ácido nucleico de la reivindicación 18.
20. Una composición terapéutica que comprende un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
21. Una composición terapéutica según la reivindicación 20 que comprende al menos dos péptidos, comprendiendo cada uno de dichos péptidos al menos un epítope de células T de un alergeno de una proteína del grupo I o II de Dermatophagoides y derivando dichos péptidos de los mismos o diferentes alergenos de proteínas del grupo I o II de Dermatophagoides.
22. Una composición de la reivindicación 20 o 21, en la que:
(a)
en el que dicha composición comprende un porcentaje suficiente de epítopes de células T de al menos un alergeno de proteína, de modo que tras la administración de la composición a un individuo sensible a un alergeno de ácaros del polvo doméstico, las células T del individuo se hacen tolerantes a dicho, al menos, un alergeno de proteína; o
(b)
23. Una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22 que comprende la siguiente combinación de péptidos:
DP I-21.2 (SEQ ID NO: 27); DP I-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP I-26.1 (SEQ ID NO: 37); DP II-20.6 (SEQ ID NO: 56); DP II-22 (SEQ ID NO: 63); DP II-25.2 (SEQ ID NO: 71) y DF I-22.2 (SEQ ID NO: 93).
24. El uso de un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la sensibilidad a ácaros del polvo doméstico.
25. El uso de la reivindicación 24 en el que el dicho medicamento se adapta para administrar simultánea o secuencialmente al menos dos péptidos/porciones diferentes.
26. Un método de detección de la sensibilidad a los ácaros del polvo doméstico en un individuo, que comprende mezclar una muestra de sangre obtenida a partir de un individuo con al menos uno de los péptidos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 en condiciones apropiadas para la unión de los componentes de la sangre con el péptido y determinar el grado al cual se produce dicha unión como indicativo de la sensibilidad del individuo a los ácaros del polvo doméstico.
27. El método de la reivindicación 26 en el que el grado al cual se produce la unión se determina mediante la valoración de la función de células T, de la proliferación de células T o una combinación de las mismas.
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