ENSAYO DE UNIÓN COMPETITIVO PARA IDENTIFICAR INHIBIDORES DE LA POLIMERASA DEL VHC.

Un método para identificar compuestos que se unen a la polimerasa del VHC que comprende los pasos de:

a) poner en contacto dicha polimerasa del VHC con una sonda que puede unirse a la polimerasa del VHC, y que puede ser desplazada por un inhibidor de la misma, de manera que forma un complejo que comprende dicha sonda unida a dicha polimerasa; b) medir una señal emitida por dicha sonda en dicho complejo para establecer un nivel basal; c) incubar el producto del paso a) con un compuesto de prueba; y d) medir la señal de dicho complejo; y e) comparar la señal del paso d) con la señal del paso b); en el que una modulación en dicha señal es un indicación de que dicho compuesto de prueba se une a dicha polimerasa; en el que dicha sonda se selecciona de entre: un isómero, enantiómero, diastereoisómero o tautómero de una sonda con la siguiente fórmula: **(Ver fórmula)**en el que R1 es cicloalquilo (C5-6); R2 es fenilo o Het, y ambos pueden estar opcionalmente sustituidos con R20, en el que R20 se define como: - de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano, azido, C(=NH)NH2, C(=NH)NH-alquilo (C16), C(=NH)NHCO-alquilo (C1-6); o - de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: a) alquilo o haloalquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R150c; b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150c; c) OCOR105 en el que R105 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150c; d) SR108 , SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo R108 (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c; NR111R112 R111 e) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo o SO2R115 (C1-6)-Het, COOR115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c; f) NR116COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150c; , R119 y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R118 R119 (C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c; h) NR121COCOR122 en el que R121 y R122 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150co N(R124)2; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c; i) COR127 en el que R127 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150c; COOR128 R128 j) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150c; y R130 k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R129 R130 (C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c; l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150c; en los que R150c es preferiblemente: - de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano o azido; o - de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R160c; b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo o cicloalquilo opcionalmente sustituido con R160c; d) SR108 , SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, o ambos R108 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c; NR111R112 R111 e) en el que es H, alquilo (C1-6), o cicloalquilo (C3-7), y R112 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo COOR115 SO2R115 R115 (C3-7), o en el que es alquilo (C1-6) o R111 R112 cicloalquilo (C3-7), o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c; f) NR116COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), y dicho alquilo (C1-6) y cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160; , R119 y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o R118 está R119 unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c; R121 h) NR121COCOR122 en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo y cicloalquilo está o N(R124)2opcionalmente sustituido con R160c; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c; COR127 R127 i) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo y cicloalquilo está opcionalmente sustituido con R160c; COOR128 R128 j) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo (C1-6) y cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160c; y y R130 k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente R130 H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o ambos R129 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c; R160c en los que se define como 1 o 2 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, CN, alquilo C1-6, OR161 N(R162)2, SO2N(R162)2,haloalquilo, COOR161 , , o CON(R162)2, en el que R161 y cada R162 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7); R162 o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; R3 se selecciona de entre cicloalquilo (C3-7), bicicloalquilo (C6-10), arilo de 6 o 10 miembros, o Het; R7 y R8 son cada uno de ellos de forma independiente H, alquilo (C1-6), haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het, en el que dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C16)-arilo, alquilo (C1-6)-Het están opcionalmente sustituidos con R70; o R7 y R8 están unidos entre ellos covalentemente para formar un segundo cicloalquilo (C3-7) o un heterociclo de 4, 5 o 6 miembros con entre 1 a 3 heteroátomos seleccionados de entre O, N, y S; en el que R70 se selecciona de entre: - de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano, azido; o - de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C16)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R150d; b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; d) SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)R108 arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; NR111R112 R111 e) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo o SO2R115 (C1-6)-Het, COOR115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; f) NR116COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; , R119 y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R118 R119 (C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; R121 h) NR121COCOR122 en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; y R122 es OR123 o N(R124)2 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; i) COR127 en el que R127 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; R128 j) COOR128 en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; k) CONR129R130 y R130 en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R129 R130 (C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150d; en el que R150d se selecciona de entre: - de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano, azido; o - de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), todos ellos opcionalmente sustituidos con R160d ; b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo y cicloalquilo está opcionalmente sustituido con R160d; SO2N(R108)2 R108 d) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo o cicloalquilo está opcionalmente sustituido con R160d; NR111R112 R111 e) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), y R112 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het, COOR115 o SO2R115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R111 R112 (C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160d; f) NR116COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160d; , R119 y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno y R120 de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7) ; o R119 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160d; R121 h) NR121COCOR122 en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo o cicloalquilo está o N(R124)2opcionalmente sustituido con R160d; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160d; j) tetrazol, COOR128 en el que R128 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo (C1-6) y cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160d; y y R130 k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente R130 H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o ambos R129 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160d; R160d en el que se define como 1 o 2 sustituyentes seleccionados de entre: tetrazol, halógeno, CN, alquilo C1-6, haloalquilo, COOR161, OR161, N(R162)2 o CON(R162)2, en el que R161 y cada R162 es independientemente H o alquilo (C1-6); R9 es H; o R9 está unido covalentemente a cualquiera de los grupos R7 o R8 para formar un heterociclo de 5 o 6 miembros; R11 es OPO3HNO2, ciano, azido, C(=NH)NH2, C(=NH)NHalquilo (C1-6) o C(=NH)NHCO-alquilo (C1-6); o R150a a) alquilo (C1-6) sustituido con , haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos R150d R150a opcionalmente sustituidos con , en el que es el mismo que R150d pero no es halógeno, OR150b, COOR150b, N(R150)2, en el que R150b es H o alquilo C1-6; b) OR104 en el que R104 es alquilo(C1-6) sustituido con R150d, cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; c) OCOR105 en el que R105 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; d) SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)R108 arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; e) NR111R112 en el que R111 es alquilo (C1-6) sustituido con R150d, cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het o R111 es H y R112 es SO2R115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o y R112 ambos R111 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; f) NR118COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118, R119 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R118 R119 (C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; h) NR121COCOR122 en el que R121 y R122 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C16)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150do N(R124)2; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; i) COR127 en el que R127 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; j) COOR128 en el que R128 es H o alquilo (C1-6) sustituido R150 con , cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; y R130 k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R129 R130 (C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d; l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150d; y R100 es: - de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano o azido; o - de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R150e; b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150e; NR111R112 R111 e) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo o SO2R115 (C1-6)-Het, COOR115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150e; f) NR116COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150e; y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118, R119 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R118 R119 (C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150e; h) NR121COCOR122 en el que R121 y R122 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150e; R122 OR123 N(R124)2o es o en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R1508; R128 j) COOR128 en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150e; y R130 k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R129 R130 (C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150e; l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150e; en el que R1508 se selecciona de entre: - de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano o azido; o - de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C16)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R160e; b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R160e ; d) SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)R108 arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6) Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e; NR111R112 R111 e) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo SO2R115 R115 (C1-6)-Het o en el que es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e; f) NR116COR117 y R117 en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R160e ; y R120 g) NR118CONR119R120, en el que R118, R119 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R118 R119 (C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e; h) NR121COCOR122 en el que R121 es H, alquilo (C1-6) opcionalmente sustituido con R160e; o R122 es OR123 o N(R124)2 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e; j) tetrazol, COOR128 en el que R128 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R160e; y k) CONR129R130 y R130 en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo R129 R130 (C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6) Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e; R160e en el que se define como 1 o 2 sustituyentes seleccionados de entre: tetrazol, halógeno, CN, alquilo C1-6, COOR181 SR161 SO2R161 OR161 N(R182)2,haloalquilo, , SO3H, , , , SO2N(R162)2, R161 R162 o CON(R162)2, en el que y cada es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7); o ambos R162 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y R150 es R150e como se ha definido anteriormente; o una sal de los mismos; en el que dicho compuesto está opcionalmente: a) marcado con un isótopo radioactivo en cualquier posición adecuada, b) unido a una señal detectable mediante un enlazante adecuado en posición adecuada, excepto R1 y R3; o c) unido a una cola de afinidad en cualquier posición adecuada, excepto R1 y R3; en el que dicha sonda se une a una polimerasa del VHC y puede verse desplazada por un inhibidor de la misma

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CA2002/001214.

Solicitante: BOEHRINGER INGELHEIM (CANADA) LTD..

Nacionalidad solicitante: Canadá.

Dirección: 2100 RUE CUNARD LAVAL, QUEBEC, H7S 2G5 CANADA.

Inventor/es: KUKOLJ,GEORGE, BEAULIEU,PIERRE,L, MCKERCHER,GINETTE.

Fecha de Publicación: 26 de Noviembre de 2010.

Fecha Solicitud PCT: 5 de Agosto de 2002.

Fecha Concesión Europea: 21 de Julio de 2010.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12Q1/48 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que interviene una transferasa.

Clasificación PCT:

G01N33/569 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

Clasificación antigua:

G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

Fragmento de la descripción:

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está relacionada generalmente con un método para identificar inhibidores de la polimerasa de RNA dependiente de RNA del VHC. En particular, este método utiliza una nueva sonda en un ensayo competitivo para identificar inhibidores de la polimerasa del VHC y determinar su potencia. Más concretamente, esta invención está relacionada con la utilización de una sonda que se une con especificidad a la polimerasa, y que puede verse desplazada por los inhibidores de la enzima.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El virus de la hepatitis C (VHC) es el principal agente etiológico de la hepatitis no A no B post-transfusional y adquirida en la comunidad a nivel mundial. Se estima que alrededor de 200 millones de personas de todo el mundo están infectadas por el virus. Un elevado porcentaje de portadores pasan a estar infectados de forma crónica y muchos progresan a enfermedad hepática crónica, denominada hepatitis crónica. Este grupo posee a su vez un elevado riesgo de contraer una enfermedad hepática seria como la cirrosis hepática, carcinoma hepatocelular y enfermedad hepática terminal que conduce a la muerte. El mecanismo por el que el VHC establece la persistencia viral y causa una elevada tasa de enfermedad hepática crónica se ha elucidado completamente. No se conoce como el VHC interacciona con el sistema inmune del huésped y lo evade.

El VHC es un virus con una cadena positiva de RNA con cubierta de la familia Flaviviridae. El genoma de una única cadena de RNA del VHC es de polaridad positiva y comprende un

marco abierto de lectura (ORF) de aproximadamente 9600 nucleótidos de longitud, que codifica una poliproteína lineal de aprox. 3010 aminoácidos. En las células infectadas, esta poliproteína se escinde por múltiples puntos mediante las proteasas celulares y virales para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS). Las proteínas estructurales (C, E1, E2 y E2-p7) comprenden los polipéptidos que constituyen la partícula vírica (Hijikata, M. et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 5547-5551; Grakoui, A. et al., 1993(a), J. Virol. 67, 1385-1395). Las proteínas no estructurales (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B) codifican las enzimas o factores accesorios que catalizan y regulan la replicación del genoma de RNA del VHC. El procesado de las proteínas estructurales lo catalizan las proteasas de la célula huésped (Hijikata et al., 1991, supra). La generación de las proteínas no estructurales maduras la catalizan dos proteasas codificadas por el virus. La primera es la metaloproteasa dependiente de zinc NS2/3 que autocataliza la liberación de la proteína NS3 de la poliproteína. La NS3 liberada contiene un dominio proteasa de serinas N-terminal (Grakoui A, et al., 1993(b), Proc Natl Acad Sci USA, 90, 10583-7; Hijikata, M. et al., 1993, J. Virol. 67, 4665-4675.) y cataliza el resto de escisiones de la poliproteína. La proteína NS4A liberada posee al menos dos roles. En primer lugar, formar un complejo estable con la proteína NS3 y colaborar en la localización en la membrana del complejo NS3/NS4A (Kim et al., Arch Virol. 1999, 144: 329-343) y en segundo lugar, actuar como un cofactor de la actividad proteasa NS3. Este complejo asociado a membrana, a su vez cataliza la escisión de las dianas restantes en la poliproteína, consiguiendo así la liberación de NS4B, NS5A y NS5B (Bartenschlager, R. et al., 1993, J. Virol., 67, 38353844; Grakoui et al., 1993(a) supra; Hijikata et al., 1993 supra; Love, R.A. et al., 1996, Cell, 87, 331-342; revisado

en Kwong AD. et al., 1998, Antiviral Res., 40, 1-18). El segmento C-terminal de la proteína NS3 también es portadora de la actividad trifosfatasa de nucleósidos y helicasa de RNA (Kim, D.W. et al., 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm., 215, 160-166). La función de la proteína NS4B es desconocida. NS5A, una proteína altamente fosforilada, parece ser responsable de la resistencia al interferón de varios genotipos del VHC (Gale Jr. et al. 1997 Virology 230, 217; Reed et al., 1997, J. Virol. 71, 7187). NS5B es una polimerasa de RNA dependiente de RNA (RdRp) que está involucrada en la replicación del VHC.

Para comprender mejor el mecanismo de replicación del RNA del VHC y desarrollar los sistemas in vitro apropiados, se han realizado análisis bioquímicos de la proteína NS5B. Se ha producido la NS5B completa y se ha purificado como una proteína no de fusión a partir de células de insecto infectadas con baculovirus recombinantes (S. E. Behrens et al., 1996, EMBO J., 15: 12-22; R. de Francesco et al., 1996, Methods Enzymol., 275:58-67) o como una proteína marcada, a partir tanto de células de insecto (V. Lohmann et al., 1997,

J. Virol., 71:8416-8428; V. Lohmann et al., 1998, Virology 249:108-118) como de E. coli (Z. H. Yuan et al., 1997, BBRC 232:231-235). In vitro, la actividad RdRp de la NS5B recombinante es dependiente de un molde de RNA y requiere RNA

o DNA como cebador (S. E. Behrens et al,, 1996, EMBO J. 15:12-22; V. Lohmann et al., 1997, J. Virol., 71:8416-8428). Sobre los moldes de RNA de las secuencias heteropoliméricas, el 3'-OH del molde se utiliza como cebador y la elongación procede a través de un mecanismo de retroceso ("snap-back"), que da lugar a una molécula de doble cadena en la que los RNA molde y producto están unidos de forma covalente (S. E. Behrens et al., 1996, EMBO J., 15:12-22; V. Lohman et al., 1998, Virology, 249:108-118; G. Luo et al., 2000, J. Virol. 74:851-863). Recientemente, varios grupos han demostrado

también que la proteína NSSB del VHC es capaz de iniciar la síntesis de RNA de novo (J. Oh et al., 1999, J. Virol. 73:7694-7702; X. Sun et al., 2000, BBRC 268:798-803; W. Zhong et al., 2000, J. Virol. 74:2017-2022).

La RdRp NSSB se ha cristalizado revelando una estructura reminiscente de otras polimerasas de ácidos nucleicos (S. Bressanelli et al., 1999, PNAS USA 96:13034-13039; H. Ago et al., 1999, Structure 7:1417-1426; C.A. Lesburg et al., 1999, Nature Struct. Biol., 6:937-943). Una comprensión exhaustiva de las diferencias entre las polimerasas del VHC y las celulares facilitará el diseño de inhibidores específicos de la replicación del VHC. La información detallada de la cinética también ayudará a comprender la base molecular de la incorporación de nucleótidos catalizada por la NS5B del VHC, y a continuación a la caracterización de los mecanismos de los inhibidores.

Estudios previos (S. E. Behrens et al., 1996, EMBO J. 15:12-22; R. de Francesco et al., 1996, Methods Enzymol. 275:58-67; V. Lohmann et al., 1997, J. Virol. 71:8416-8428;

V. Lohmann et al., 1998, Virology 249:108-118) han proporcionado poca información respecto a la proporción de complejos polimerasa -RNA que son competentes para la catálisis. Algunos estudios recientes investigaron las necesidades de molde y de cebadores de la replicación de RNA dirigida por la NS5B del VHC. Los moldes con extremos 3' libres de estructuras secundarias y los cebadores cortos de 2

o 3 nucleótidos (nt) de longitud eran los preferibles para una iniciación eficiente de la síntesis de RNA (W. Zhong et al., 2000, J. Virol. 74:9134-9143). En la iniciación de novo de la síntesis de RNA, sin embargo, la NS5B necesita un molde con una estructura secundaria estable y una secuencia de cadena sencilla que contenga al menos un citidilato en 3'.

Las polimerasas virales representan dianas atractivas

para la inhibición terapéutica de la replicación viral. El

descubrimiento de nuevos agentes antivirales a menudo involucra el cribaje de un gran número de muestras para la inhibición de la actividad diana utilizando ensayos in vitro

o in vivo. En general, las polimerasas se analizan monitorizando la incorporación de mononucleótidos marcados con 3H, α-32P o α-33P en productos oligonucleótidos, o mediante la extensión de cebadores marcados en el extremo 5'. Los productos incorporados en los cebadores extendidos se capturan o separan utilizando ensayos de filtrado, precipitación ácida o electroforesis en gel desnaturalizante comunes.

La polimerasa NS5B del VHC es una diana fundamental en la búsqueda de inhibidores de la replicación del VHC. Diferentes preparaciones de la polimerasa del VHC muestran eficiencias variables de formación de producto con una variedad de sustratos de RNA. Además, la actividad de la polimerasa NS5B recombinante purificada varia de forma significativa con sustratos de RNA específicos. Adicionalmente, la actividad de la polimerasa de RNA NS5B in vitro es extremadamente sensible...

Reivindicaciones:

1. Un método para identificar compuestos que se unen a la polimerasa del VHC que comprende los pasos de:

a) poner en contacto dicha polimerasa del VHC con una sonda que puede unirse a la polimerasa del VHC, y que puede ser desplazada por un inhibidor de la misma, de manera que

forma un complejo que comprende dicha sonda unida a dicha polimerasa; b) medir una señal emitida por dicha sonda en dicho complejo para establecer un nivel basal;

c) incubar el producto del paso a) con un compuesto de prueba; y

d) medir la señal de dicho complejo; y

e) comparar la señal del paso d) con la señal del paso b);

en el que una modulación en dicha señal es un indicación de que dicho compuesto de prueba se une a dicha polimerasa;

en el que dicha sonda se selecciona de entre: un isómero, enantiómero, diastereoisómero o tautómero de una sonda con la siguiente fórmula:

**(Ver fórmula)**

en el que R1 es cicloalquilo (C5-6); R2

es fenilo o Het, y ambos pueden estar opcionalmente

sustituidos con R20, en el que R20 se define como:

- de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano, azido, C(=NH)NH2, C(=NH)NH-alquilo (C16), C(=NH)NHCO-alquilo (C1-6); o

- de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre:

a) alquilo o haloalquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R150c;

b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150c;

c) OCOR105 en el que R105 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150c;

d) SR108 , SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo

R108

(C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c;

NR111R112 R111

e) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo

o SO2R115

(C1-6)-Het, COOR115 en el que R115 es alquilo (C1-6),

cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7),

arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112

y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c;

f) NR116COR117 y R117

en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150c;

, R119 y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno

de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R118 R119

(C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c;

h) NR121COCOR122 en el que R121 y R122 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con

R150co N(R124)2

un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c;

i) COR127 en el que R127 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150c;

COOR128 R128

j) en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150c;

y R130

k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente

H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R129 R130

(C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho

alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150c;

l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150c;

en los que R150c es preferiblemente:

- de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano o azido; o

- de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre:

a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R160c;

b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo

(C3-7), dicho alquilo o cicloalquilo opcionalmente sustituido con R160c;

d) SR108 , SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, o ambos R108 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c;

NR111R112 R111

e) en el que es H, alquilo (C1-6), o cicloalquilo (C3-7), y R112 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo COOR115 SO2R115 R115

(C3-7), o en el que es alquilo (C1-6) o R111 R112

cicloalquilo (C3-7), o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c;

f) NR116COR117 y R117

en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), y dicho alquilo (C1-6) y cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160;

, R119 y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno

de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o R118 está

R119

unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, y heterociclo está opcionalmente sustituido con

R160c

; R121

h) NR121COCOR122 en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo y cicloalquilo está

o N(R124)2

opcionalmente sustituido con R160c; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6)

o cicloalquilo (C3-7), o ambos R124 están unidos entre ellos

covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c;

COR127 R127

i) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo y cicloalquilo está opcionalmente sustituido con R160c;

COOR128 R128

j) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo (C1-6) y cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160c; y

y R130

k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente R130

H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), o ambos R129 y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160c;

R160c

en los que se define como 1 o 2 sustituyentes

seleccionados de entre: halógeno, CN, alquilo C1-6, OR161 N(R162)2, SO2N(R162)2,

haloalquilo, COOR161 , , o CON(R162)2, en el que R161 y cada R162 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7);

R162

o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros;

R3 se selecciona de entre cicloalquilo (C3-7), bicicloalquilo (C6-10), arilo de 6 o 10 miembros, o Het;

R7 y R8 son cada uno de ellos de forma independiente H, alquilo (C1-6), haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het, en el que dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C16)-arilo, alquilo (C1-6)-Het están opcionalmente sustituidos con R70; o

R7 y R8 están unidos entre ellos covalentemente para formar un segundo cicloalquilo (C3-7) o un heterociclo de 4, 5

o 6 miembros con entre 1 a 3 heteroátomos seleccionados de

entre O, N, y S; en el que R70 se selecciona de entre:

- de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano, azido; o

- de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre:

a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C16)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R150d;

d) SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108 es

independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)

R108

arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo

o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente

sustituido con R150d; NR111R112 R111

o SO2R115

(C1-6)-Het, COOR115 en el que R115 es alquilo (C1-6),

cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112

y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo

saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

f) NR116COR117 y R117

en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d;

, R119 y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno

de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R118 R119

R121

h) NR121COCOR122 en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d; y R122 es OR123

o N(R124)2

en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido

con R150d;

R128

j) COOR128 en el que es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d;

k) CONR129R130 y R130

en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R129 R130

(C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150d;

en el que R150d se selecciona de entre:

- de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano, azido; o

- de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre:

a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), todos ellos opcionalmente sustituidos con R160d ;

b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo y cicloalquilo está opcionalmente sustituido con R160d;

SO2N(R108)2 R108

d) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo o cicloalquilo está opcionalmente sustituido con R160d;

NR111R112 R111

e) en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), y R112 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het, COOR115 o SO2R115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R111 R112

(C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho

alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160d;

f) NR116COR117 y R117

en el que R116 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160d;

, R119 y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118 son cada uno y R120

de ellos H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7) ; o R119 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160d;

R121

h) NR121COCOR122 en el que es H, alquilo (C1-6) o cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo o cicloalquilo está

o N(R124)2

opcionalmente sustituido con R160d; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6)

o cicloalquilo (C3-7), o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124

están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo y heterociclo está opcionalmente sustituido con

R160d

; j) tetrazol, COOR128 en el que R128 es H, alquilo (C1-6) o

cicloalquilo (C3-7), dicho alquilo (C1-6) y cicloalquilo (C3-7) está opcionalmente sustituido con R160d; y

y R130

k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente R130

R160d

en el que se define como 1 o 2 sustituyentes seleccionados de entre: tetrazol, halógeno, CN, alquilo C1-6, haloalquilo, COOR161, OR161, N(R162)2 o CON(R162)2, en el que R161 y cada R162 es independientemente H o alquilo (C1-6);

R9 es H; o R9 está unido covalentemente a cualquiera de los grupos R7 o R8 para formar un heterociclo de 5 o 6 miembros;

R11

es OPO3HNO2, ciano, azido, C(=NH)NH2, C(=NH)NHalquilo (C1-6) o C(=NH)NHCO-alquilo (C1-6); o

R150a

a) alquilo (C1-6) sustituido con , haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), espirocicloalquilo C3-7 que contiene opcionalmente 1 o 2 heteroátomos, alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos

R150d R150a

opcionalmente sustituidos con , en el que es el mismo que R150d pero no es halógeno, OR150b, COOR150b, N(R150)2,

en el que R150b es H o alquilo C1-6;

b) OR104 en el que R104 es alquilo(C1-6) sustituido con R150d, cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R150d;

d) SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108

es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)

R108

o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

e) NR111R112 en el que R111 es alquilo (C1-6) sustituido con R150d, cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y R112 es H, CN, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het o R111 es H y R112 es SO2R115 en el que R115 es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o

y R112

ambos R111 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

f) NR118COR117 y R117

y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118, R119 son cada uno

de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R118 R119

(C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; o R119 y R120 están unidos entre

ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C37), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

h) NR121COCOR122 en el que R121 y R122 son cada uno de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), un arilo de 6 o 10 miembros, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C16)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido

con R150do N(R124)2

; o R122 es OR123 en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilocicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

j) COOR128 en el que R128 es H o alquilo (C1-6) sustituido R150

con , cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150d;

y R130

k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R129 R130

(C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho

alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150d;

l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150d; y

R100

es:

- de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano o azido; o

- de 1 a 4 sustituyentes seleccionados de entre:

a) alquilo (C1-6) o haloalquilo, cicloalquilo (C3-7), alquenilo (C2-6), alquinilo (C2-8), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), todos ellos opcionalmente sustituidos con R150e;

NR111R112 R111

o SO2R115

(C1-6)-Het, COOR115 en el que R115 es alquilo (C1-6),

cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos R111 R112

f) NR116COR117 y R117

en el que R116 son cada uno de ellos

H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150e;

y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118, R119 son cada uno

de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R118 R119

R150e

; R122 OR123 N(R124)2

o es o en el que R123 y cada R124 es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R1508;

R128

j) COOR128 en el que es H, alquilo (C1-6),

cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7),

arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R150e;

y R130

k) CONR129R130 en el que R129 son independientemente

H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R129 R130

(C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho

alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R150e;

l) arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, todos ellos están opcionalmente sustituidos con R150e;

en el que R1508 se selecciona de entre:

- de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre: halógeno, NO2, ciano o azido; o

- de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de entre:

b) OR104 en el que R104 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C16)-Het está opcionalmente sustituido con R160e ;

d) SO3H, SO2N(R108)2 o SO2N(R108)C(O)R108 en el que cada R108

es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)

R108

arilo o alquilo (C1-6)-Het o ambos están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados

para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo

o alquilo (C1-6) Het o heterociclo está opcionalmente

sustituido con R160e; NR111R112 R111

SO2R115 R115

(C1-6)-Het o en el que es alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, o ambos

R111 R112

y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6) arilo o alquilo (C1-6)-Het, o heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e;

f) NR116COR117 y R117

y R120

g) NR118CONR119R120, en el que R118, R119 son cada uno

de ellos H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R118 R119

(C1-6)-Het, o está unido covalentemente a y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros;

o R119

y R120 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros; y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het o heterociclo está opcionalmente

sustituido con R160e;

h) NR121COCOR122 en el que R121 es H, alquilo (C1-6) opcionalmente sustituido con R160e; o R122 es OR123 o N(R124)2 en el que R123 y cada R124 es

independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)arilo o alquilo (C1-6)-Het, o R124 es OH o O-alquilo (C1-6) o ambos R124 están unidos entre ellos covalentemente para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e;

j) tetrazol, COOR128 en el que R128 es H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo (C1-6)-Het, dicho alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), oralquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo y alquilo (C1-6)-Het está opcionalmente sustituido con R160e; y

k) CONR129R130 y R130

en el que R129 son independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7), alquilo (C1-6)cicloalquilo (C3-7), arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo o alquilo

R129 R130

(C1-6)-Het, o ambos y están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7 miembros, y dicho alquilo, cicloalquilo, alquilo-cicloalquilo, arilo, Het, alquilo (C1-6)-arilo, alquilo (C1-6) Het y heterociclo está opcionalmente sustituido con R160e;

R160e

en el que se define como 1 o 2 sustituyentes

seleccionados de entre: tetrazol, halógeno, CN, alquilo C1-6, COOR181 SR161 SO2R161 OR161 N(R182)2,

haloalquilo, , SO3H, , , , SO2N(R162)2, R161 R162

o CON(R162)2, en el que y cada es independientemente H, alquilo (C1-6), cicloalquilo (C3-7) o alquilo (C1-6)-cicloalquilo (C3-7); o ambos R162 están unidos entre ellos covalentemente y al nitrógeno al que están

enlazados para formar un heterociclo saturado de 5, 6 o 7

miembros; y R150

es R150e como se ha definido anteriormente;

o una sal de los mismos; en el que dicho compuesto está opcionalmente: a) marcado con un isótopo radioactivo en cualquier

posición adecuada, b) unido a una señal detectable mediante un enlazante adecuado en posición adecuada, excepto R1 y R3; o c) unido a una cola de afinidad en cualquier posición adecuada, excepto R1 y R3; en el que dicha sonda se une a una polimerasa del VHC y puede verse desplazada por un inhibidor de la misma.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha sonda es un compuesto con la siguiente fórmula:

**(Ver fórmula)**

reivindicación 1; o una sal de los mismos; en el que dicho compuesto está opcionalmente: a) marcado con un isótopo radioactivo en cualquier posición adecuada, b) unido a una señal detectable mediante un enlazante adecuado en cualquier posición adecuada, excepto R1 y R3; o

c) unido a una cola de afinidad en cualquier posición

adecuada, excepto R1 y R3;

3. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en el que la señal detectable se selecciona de entre el grupo que consiste en: una señal fluorescente, un átomo radioactivo, una señal quimioluminiscente y una señal colorimétrica.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 3 en el que la señala es una señal fluorescente o señal quimioluminiscente.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, en el que la señal fluorescente se selecciona de entre el grupo que consiste en: fluoresceína, verde Oregon, dansilo, rodamina, rojo Texas, ficoeritrina y Eu3+ .

6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la señal fluorescente es la fluoresceína.

7. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que la señal detectable es un par marcador/bloqueador fluorescente.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el par marcador/bloqueador se selecciona de entre el grupo que consiste en: EDANS/DABCILO, triptófano/2,4dinitrofenilo, triptófano/DANSILO, 7-metoxicumarina/2,4dinitrofenilo, 2-aminobenzoilo/2,4-dinitrofenilo y 2aminobenzoilo/3-nitrotirosina.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el átomo radioactivo se selecciona de entre 3H, 14C y 125I.

10. La utilización de una sonda de fórmula IIb, IIc, IIe

o IIf de acuerdo con la reivindicación 1, en el desarrollo de un ensayo para identificar inhibidores de la polimerasa del VHC.

11. Un método para identificar compuestos que inhiben la polimerasa del VHC que comprende los pasos de:

a) poner en contacto dicha polimerasa del VHC con una sonda de acuerdo con la reivindicación 1, de manera que se

forme un complejo con dicha sonda unida a dicha polimerasa;

b) medir la señal de dicho complejo para establecer un

nivel basal;

c) incubar el producto del paso a) con un compuesto de

5 prueba; y

d) medir la señal de dicho complejo; y

e) comparar la señal del paso d) con la señal del paso

b); en el que la modulación de dicha señal es una indicación 10 de que dicho compuesto de prueba inhibe dicha polimerasa.

12. Un método para identificar compuestos capaces de inhibir la polimerasa del VHC, que comprende: f) repetir los pasos de (a) a (e), de acuerdo con la

reivindicación 11, en un cribaje a gran escala o de alto 15 rendimiento.

13. El método de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la polimerasa del VHC se selecciona de entre el grupo que consiste en: NS5B, NS5BΔ21 y NS5BΔ57..

14. El método de acuerdo la reivindicación 11, en el que

20 la polimerasa del VHC se obtiene del genotipo de las cepas VHC-1a o VHC-1 b que opcionalmente posee una cola de histidina en el extremo N- o C-terminal.

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