COMPUESTO CAPAZ DE INHIBIR EL ENLACE DE UNA PROTEINA CON LOS MASTOCITOS, EMPLEO DE DICHO COMPUESTO EN LA PREPARACION DE UN MEDICAMENTO, COMPOSICION FARMACEUTICA, PROCEDIMIENTO PARA DIAGNOSTICAR UNA ENFERMEDAD Y PROCEDIMIENTO DE SELECCION.

Uso de glicoproteína Tamm-Horsefall o de un péptido de la misma,

péptido que comprende al menos la secuencia de aminoácidos AHWSGHCCL, para reducir en el menos un 5% el enlace de la cadena ligera libre de inmunoglobina (LC) con los mastocitos in vitro

Compuesto capaz de inhibir el enlace de una proteína con los mastocitos, empleo de dicho compuesto en la preparación de un medicamento, composición farmacéutica, procedimiento para diagnosticar una enfermedad y procedimiento de selección.

En el campo de la inmunología, Askenase, P.W. et al (J. Exp. Med. 157, p. 862-873 (1983)) describen un "factor de célula T" que sensibiliza los mastocitos. Dicho factor de célula T es una composición muy impura. Hasta ahora no se sabía qué componente(s) era(n) responsable(s) de la sensibilización.

Sorprendentemente, el solicitante ha descubierto que la cadena ligera libre de la inmunoglobulina (Ig LC) es uno de los componentes del factor de célula T factor y es el agente responsable de la sensibilización de los mastocitos. Se ha descubierto que la Ig LC sensibiliza los mastocitos antígeno-específicamente.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a un compuesto que inhibe el enlace de la cadena ligera libre de la inmunoglobulina con los mastocitos, en donde el compuesto, en presencia de una cantidad equimolar de cadena ligera libre (Ig LC) de inmunoglobulina, reduce el enlace en al menos un 5%, no siendo dicho compuesto la glicoproteína Tamm-Horsefall (THP) o fragmentos del péptido de enlace de la misma con LC.

El uso de dicho compuesto es de vital importancia para suprimir los desagradables efectos que experimenta un paciente debido a la sensibilización. Los compuestos pueden detectarse de forma sencilla, por ejemplo, incubando el compuesto que se va a someter a prueba junto con la Ig LC etiquetada fluorescente y mastocitos. Con ayuda de un microscopio de fluorescencia o, en la medición cuantitativa, de un Clasificador de Células Activado por Fluorescencia (FACS) se puede evaluar la inhibición. Dicha inhibición puede producirse debido a la competencia entre el compuesto y la Ig LC por enlazar con el mastocito.

Según una materialización interesante, el compuesto puede enlazar con la cadena ligera libre de inmunoglobulina, mientras que el compuesto es capaz de competir con un péptido con enlace con la cadena ligera libre que tenga la secuencia de aminoácidos (AHWSGHCCL) y en presencia de una cantidad equimolar del péptido, el compuesto reduce su enlace en al menos un 5%.

Huang Z.-Q. et al. (ref. 2) describen una proteína urinaria única, la glicoproteína Tamm-Horsefall (THP, conocida también como uromodulina) que produce la acumulación de cadenas ligeras de inmunoglobulina y THP. Dicha acumulación causa insuficiencia renal debido a la obstrucción del nefrón distal del riñón. La publicación explica que los péptidos trípticos de la THP también producen acumulación. En ella no se explica el empleo de los mismos o de THP como medicamento, ni tampoco el enlace de los mismos con los mastocitos.

Preferiblemente, el compuesto reducirá el enlace del péptido en al menos un 10%, preferiblemente en al menos un 25%, más preferiblemente en al menos 50%, más preferiblemente aún en al menos un 75% y, lo más preferible, en al menos un 90%.

En principio, dichos compuestos son útiles como componente activo de una composición farmacéutica, sobre todo si el enlace se reduce en más de un 50%.

Dentro del ámbito de la presente invención, el péptido se puede usar también como componente activo. También es posible usar péptidos con aminoácidos poco corrientes y/o modificados. Según una materialización interesante, el compuesto es un peptidomimético.

Un peptidomimético adecuado es, por ejemplo, un peptoide en el que las cadenas laterales están situadas en los átomos de hidrógeno del esqueleto peptídico. En comparación con el péptido original, dicho peptoide tiene una vida media en la sangre más larga. La síntesis de peptoides se halla bien documentada en la técnica. La diferencia más importante con la síntesis de péptidos son las diferentes materias primas correspondientes a los aminoácidos.

La presente invención se refiere también a un método para cribar una serie de compuestos por su capacidad de enlazar la cadena ligera libre de inmunoglobina mediante un compuesto etiquetado del que se sabe que enlaza la cadena ligera libre de inmunoglobina y es capaz de competir con el péptido con la secuencia de aminoácidos (AHWSGHCCL), en donde el cribado se realiza mediante una prueba que comprende una reacción de competencia entre el compuesto que se somete a prueba y el compuesto etiquetado Conviene que la prueba sea una prueba homogénea, para que se puedan cribar rápidamente los compuestos y seleccionar los compuestos activos.

En la presente invención se entiende que prueba homogénea es una prueba en donde para la detección no es necesario separar un péptido etiquetado no complejo (o peptidomimético) de un péptido etiquetado complejo. En lugar del péptido etiquetado con la secuencia de aminoácidos (AHWSGHCCL), también es posible, por supuesto, usar un compuesto usado con ese péptido.

Hay dos ejemplos de pruebas homogéneas muy adecuadas que se basan en (de)polarización de fluorescencia o transferencia de energía interna respectivamente, pues permiten un empleo óptimo de respectivamente la diferencia de tamaño entre péptido complejo y péptido etiquetado y la pequeña distancia entre el fluoróforo y el cromóforo.

La presente invención se refiere también a un método para cribar una serie de compuestos por su capacidad de reducir la sensibilización de los mastocitos, en donde el cribado se realiza incubando un compuesto que se va a someter a prueba y una cadena ligera libre etiquetada de inmunoglobina con un mastocito y detectando la reducción del enlace de la cadena ligera libre etiquetada de inmunoglobina.

En casos como éste es preferible que el cribado se realice en condiciones fisiológicas, ya que el compuesto tendrá que estar activo cuando se use como medicamento en esas condiciones.

Ni que decir tiene que el compuesto puede usarse con fines farmacéuticos, especialmente si el compuesto es aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Así pues, la presente invención se refiere también a una aplicación de un compuesto (obtenido) según la presente invención o de glicoproteína Tamm-Horsfall (THP) o de fragmentos del péptido de enlace de la misma con LC para la preparación de un medicamento para una enfermedad cuyo síntoma sea i) una concentración de la cadena ligera libre de inmunoglobina en suero de al menos 8 mg/l, especialmente de al menos 15 mg/l y más especialmente 20 mg/l; y/o ii) una concentración de la cadena kappa ligera libre de inmunoglobina en fluido espinal de al menos 70 µ/l, especialmente de al menos 100 µ/l y más especialmente 150 µ/l; y/o iii) una concentración de la cadena lambda libre de inmunoglobina en fluido espinal de al menos 300 µ/l, especialmente de al menos 400 µ/l y más especialmente 500 µ/l.

Ejemplos significativos de tales enfermedades son el asma, la alergia, incluida la alergia de contacto y la alergia ocupacional, los trastornos inflamatorios del intestino de carácter crónico, la infección viral y la esclerosis múltiple. El solicitante considera la posibilidad de incluir las migrañas en la lista de trastornos.

Según una materialización ventajosa, se usa un compuesto que es un péptido o peptidomimético con una masa de menos de 10 KDal, preferiblemente de menos de 2 kDal.

Si el péptido no necesita sintetizarse porque se deriva de una proteína, la masa tiene menor importancia, aunque entonces el péptido debe ser preferiblemente no-inmunogénico.

Por lo tanto, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la invención o glicoproteína Tamm-Horsefall (THP) o péptidos de enlace de la misma con LC junto con un portador o excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

Por último, la presente invención se refiere a un método para diagnosticar una enfermedad en un paciente con un nivel elevado de la cadena ligera libre de inmunoglobina en un fluido corporal, en donde un antígeno específico de dicha enfermedad entra en contacto con el fluido corporal del paciente y posteriormente se determina la presencia de un complejo del antígeno extraño y la cadena ligera libre de inmunoglobina.

Los fluidos corporales más apropiados son la orina, el suero o el plasma. También sirven el fluido espinal, el lavado de pulmón y los esputos. Por consiguiente, en el contexto de la presente invención, el fluido corporal también comprende líquidos preparados sobre la base del material...

1. Uso de glicoproteína Tamm-Horsefall o de un péptido de la misma, péptido que comprende al menos la secuencia de aminoácidos AHWSGHCCL, para reducir en el menos un 5% el enlace de la cadena ligera libre de inmunoglobina (LC) con los mastocitos in vitro.

2. Uso según la reivindicación 1, en donde el péptido de enlace con la LC tiene una masa de menos de kDal.

3. Uso según la reivindicación 1 ó 2, en donde el péptido de enlace con la LC, péptido que se deriva de una proteína, es no inmunogénico.

4. Método para seleccionar un compuesto basado en la capacidad del compuesto para reducir el enlace de la LC con los mastocitos, método que comprende: